毛細(xì)管電泳測(cè)定單味石膏及其復(fù)方中Na、Ca元素

秦 云 李 祥 陳建偉 夏 怡

南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，江蘇 南京 210046

石膏為硫酸鹽類(lèi)礦物硬石膏族石膏，是《中國(guó)藥典》收載的中醫(yī)臨床常用藥。生石膏主要成分為CaSO4·2H2O，主要功效為清熱瀉火、除煩止渴。煅石膏主要成分為CaSO4，主要功效為收濕生肌、斂瘡止血。

Na與Ca離子的比例，在體溫調(diào)節(jié)中有重要作用，Na離子濃度升高，可使體溫升高;Ca離子濃度升高，則可使體溫降低［1］。已有實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明生石膏的解熱作用可能與調(diào)節(jié)體內(nèi)Na/Ca比例有關(guān)。

本文運(yùn)用毛細(xì)管電泳法測(cè)定生、煅石膏在模擬胃酸pH提取液中Na、Ca元素的溶出率;另外測(cè)定白虎湯、去石膏的白虎湯、以煅石膏、化學(xué)藥分別代替石膏入白虎湯的Na、Ca含量，考察Na/Ca比值。

測(cè)定無(wú)機(jī)陽(yáng)離子最為廣泛的方法是原子吸收光譜法［2］，此法操作簡(jiǎn)單但常規(guī)儀器一次只能測(cè)定一種元素。離子選擇電極法［3］選擇性較高，也存在類(lèi)似的缺點(diǎn)。毛細(xì)管電泳(CE)是上世紀(jì)八十年代發(fā)展起來(lái)的一種分析技術(shù)，能夠一次完成多種元素的測(cè)定，且分析速度快、樣品用量少，在無(wú)機(jī)離子分析方面得到廣泛的應(yīng)用［4～6］。

1 儀器與材料

1.1 儀器:高效毛細(xì)管電泳儀 (安捷倫公司);未涂層熔融石英毛細(xì)管 (55cm×75μm，有效長(zhǎng)度47cm，河北永年光纖廠(chǎng))。

1.2 材料:生石膏，采自湖北應(yīng)城，粉碎過(guò)100目篩;煅石膏，按石膏煅制工藝為粉碎成0.125cm3的小塊，鋪至1cm后，50分鐘由室溫升至650℃后煅制1.5小時(shí)粉碎過(guò)100目篩，批號(hào)SG0105;知母、炙甘草、粳米購(gòu)自江蘇益豐大藥房，經(jīng)本校鑒定教研室陳建偉教授鑒定。

咪唑 (上海青析化工科技有限公司，批號(hào)071026)，酒石酸 (上海美興化工股份有限公司，批號(hào)080501)，鹽酸 (上海化學(xué)試劑有公司，批號(hào)080302)，NaOH(上海實(shí)意化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)20030628)，CaCl2(上海奉賢試劑廠(chǎng)，批號(hào)20030710)，NaCl(南京化學(xué)試劑080922)。

2 方法

2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備精密稱(chēng)取NaCl115.5mg，用重蒸水定容至25mL，再取10mL重蒸水定容至100mL，作為Na儲(chǔ)備液。精密稱(chēng)取CaCl22078mg，用重蒸水定容至25mL，作為Ca儲(chǔ)備液。臨用前用重蒸水稀釋至所需濃度，過(guò)0.45μm微孔濾膜，超聲脫氣。

2.2 提取溶劑的配制精密吸取鹽酸234mL，加重蒸水定溶至1000mL，配制成稀鹽酸。精密吸取稀鹽酸16.4mL，加重蒸水定溶至1000mL。此提取溶劑為模擬去蛋白酶的人工胃液酸度。

2.3 供試品溶液的制備

2.3.1 生、煅石膏單味藥各稱(chēng)取生石膏與煅石膏細(xì)粉約3g，精密加入提取溶劑10mL，稱(chēng)重，37℃水浴提取30min，冷卻至室溫，滴加重蒸水補(bǔ)足重量，抽濾，精密吸取濾液5mL至容量瓶，加重蒸水4.5mL，氨水30μL，并用重蒸水定容至10mL，過(guò)0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，超聲脫氣。

2.3.2 各復(fù)方組各復(fù)方組精密加60mL重蒸水，稱(chēng)重，浸泡0.5h，煎煮30min，冷卻至室溫，滴加重蒸水補(bǔ)足重量，抽濾，精密吸取濾液5mL至容量瓶，重蒸水定容至10mL，過(guò)0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，超聲脫氣。各復(fù)方組藥味配伍及劑量見(jiàn)表1。

表1 藥味配伍方式Tab.1 Methods of compatibilities

2.4 電泳條件 10mmol/L咪唑，4mmol/L酒石酸，以0.1mol/L的HCl和氨水調(diào)節(jié)pH至4.5制備電泳緩沖溶液，緩沖溶液超聲脫氣備用。毛細(xì)管柱在使用前依次用0.1mol/L鹽酸、0.1mol/L氫氧化鈉、水和緩沖溶液清洗。兩次進(jìn)樣之間用緩沖溶液沖洗3min，在分離電壓下平衡3分鐘。分離電壓15Kv;進(jìn)樣時(shí)間5s;檢測(cè)波長(zhǎng)214nm。

2.5 線(xiàn)性考察 精密吸取上述Na儲(chǔ)備液0.1，0.2，0.4，0.6，0.8mL，重蒸水定容至10mL;精密吸取上述Ca儲(chǔ)備液0.1，0.2，0.3，0.4，0.5mL，重蒸水定容至10mL。按上述電泳條件進(jìn)行測(cè)定，以進(jìn)樣量 (mg/mL)對(duì)峰面積(A)進(jìn)行線(xiàn)性回歸，求得Na元素回歸方程為:Y=3.2586X+0.4671，r=0.9997;Ca元素回歸方程為 Y=5932.08X+43.2778，r=0.9998，結(jié)果表明，Na、Ca元素分別在0～14.5313μg/mL，0～1.4977mg/mL之間呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.6 精密度試驗(yàn) 分別吸取Na、Ca標(biāo)準(zhǔn)溶液，按上述電泳條件重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定Na、Ca峰面積，其 RSD值分別為2.25%和1.77%，結(jié)果表明精密度較好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一批石膏粉末，按“2.3供試品溶液的制備”方法處理后，分別在制備后0，1，2，4，6，8，10，12，24，36h進(jìn)樣分析，測(cè)定Na、Ca峰面積，計(jì)算得其RSD值分別為1.4%和1.98%，表明樣品在36小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批石膏粉末6份，按“2.3供試品溶液的制備”方法處理后，按上述電泳條件進(jìn)樣分析，測(cè)定Na、Ca峰面積，計(jì)算得其RSD值分別為1.97%和2.35%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性較好。

2.9 準(zhǔn)確度試驗(yàn) 取同一批石膏粉末6份，精密吸取Na(181.6410μg/mL)、Ca(29.9532mg/mL)標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，加入已知含量的樣品中，按“2.3供試品溶液的制備”方法處理后，按上述電泳條件進(jìn)行含量測(cè)定，并對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，求加樣回收率。結(jié)果見(jiàn)表2，表3。

表2 Na元素準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)Tab.2 Recovery of Na

表3 Ca元素準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)Tab.3 Recovery of Ca

表4 生、煅石膏Na、Ca元素含量及比值Tab.4 Determination and Ratio of Na and Ca in gypsum and anhydrite

表5 復(fù)方中Na、Ca元素含量及比值Tab.5 Determination and Ratio of Na and Ca in compound

3 結(jié)果

各供試品溶液過(guò)0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，超聲脫氣，進(jìn)樣測(cè)定分析，結(jié)果見(jiàn)表4和表5。

4 討論

本文采用毛細(xì)管電泳測(cè)定石膏中Ca、Na元素含量，精密度、穩(wěn)定性好，加樣回收率達(dá)到要求。

實(shí)驗(yàn)考察了生、煅石膏在模擬胃酸pH提取液中Na、Ca元素的溶出率和Na/Ca比值。根據(jù)臨床用法用量，石膏的水煎液濃度較低，考慮到在服用中石膏混懸進(jìn)入胃液消化，因此考察了模擬胃液以及模擬胃酸pH范圍的提取液，兩者的區(qū)別在于是否加入了胃蛋白酶。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明是否加入胃蛋白酶對(duì)石膏煎出液的濃度影響不大，這可能是因?yàn)槲傅鞍酌复龠M(jìn)蛋白質(zhì)的分解，而對(duì)無(wú)機(jī)物的作用不大，因此選擇直接用模擬胃酸pH濃度的溶液37℃提取。通過(guò)含量測(cè)定發(fā)現(xiàn)生石膏的Na+、Ca2+溶出率較煅石膏高，Na/Ca比值較煅石膏低，進(jìn)一步說(shuō)明了生石膏解熱功效與Na、Ca含量的多少有關(guān)。

實(shí)驗(yàn)考察了白虎湯、去石膏的白虎湯、以煅石膏、化學(xué)藥分別代替石膏入白虎湯的Na、Ca含量以及Na/Ca比值，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Ca的含量以復(fù)方中最高，化學(xué)藥方其次，去石方最低Na/Ca比值;Na/Ca比值則以復(fù)方中最低，化學(xué)藥其次，去石方最高?？蛇M(jìn)一步推測(cè)石膏解熱作用的物質(zhì)基礎(chǔ)可能與Na/Ca的比值有關(guān)。煅石膏入方劑后溶液中Ca含量較原方及化學(xué)藥方低，推測(cè)Ca含量的差異可能與硫酸鈣是否帶有結(jié)晶水有關(guān);生石膏與煅石膏相比，在方中有增加Ca含量的作用。

復(fù)方中成分的含量變化受多方面因素影響，包括藥物之間的作用及體內(nèi)吸收等，具體解熱機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

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