頂空毛細管氣相色譜法測定倍他米松磷酸鈉原料藥中3種有機溶劑殘留量

趙佳麗，章展煌，徐宏祥

（浙江嘉興市食品藥品檢驗所，嘉興市 314001）

倍他米松磷酸鈉是一種腎上腺皮質激素藥，為《中國藥典》2005年版[1]收載品種，其原料藥質量標準中未收載殘留溶劑檢測項目，文獻也未見有關該原料藥有機溶劑殘留量檢測方法報道。為了提高本品質量及用藥安全，筆者認為應制定殘留溶劑的檢驗方法。有關殘留溶劑測定方法有直接進樣法[2]和頂空進樣法[3，4]等，筆者根據《中國藥典》2005年版二部殘留溶劑測定法[1]的要求，采用頂空進樣法，建立了以正丙醇為內標的毛細管氣相色譜法測定倍他米松磷酸鈉中的3種有機溶劑殘留量的方法。結果表明，該方法簡單、靈敏、準確。

1 儀器與試藥

6890N毛細管氣相色譜儀，包括HP7694E頂空進樣器、氫火焰離子化檢測器（FID）、HP化學工作站（美國Aglient公司）；BP211D電子分析天平（北京賽多利斯有限公司）。

倍他米松磷酸鈉原料藥3批（批號：080305、080312、080316，含量：99.5%、98.9%、100.2%）為某藥廠提供；四氫呋喃、無水乙醇和正丙醇均為分析純；甲醇為色譜純；水為蒸餾水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與色譜

色譜柱：HP-INNOWAX石英毛細管柱（30 m×0.320 mm，0.25 μm）；固定液：聚乙二醇（分子量為20000）；柱溫：60 ℃；進樣口溫度：180℃；FID檢測口溫度：250℃；氮氣流速：1.0 mL·min－1；分流進樣，分流比：10∶1；頂空溫度：80 ℃；平衡時間：30 min；進樣時間：1.0 min。結果四氫呋喃、甲醇、乙醇與內標正丙醇的分離良好，各峰分離度均大于1.5。色譜詳見圖1。

2.2 測定方法

圖1 氣相色譜圖1.四氫呋喃；2.甲醇；3.乙醇；4.正丙醇Fig 1 GC chromatogram1.furanidine；2.methanol；3.ethanol；4.n-propanol

精密稱取正丙醇適量，用水稀釋制成2.24 mg·mL－1的溶液，作為內標貯備液；精密量取內標貯備液3 mL，置于50 mL容量瓶中，加水至刻度，作為內標溶液。另精密稱取四氫呋喃71.8 mg、甲醇300.1 mg、無水乙醇496.6 mg，置于100 mL容量瓶中，加水至刻度，作為對照品貯備液。精密量取對照品貯備液與內標貯備液各3 mL，置于50 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，再精密量取5 mL，置于10 mL頂空取樣瓶中，加蓋密封，作為對照品溶液；另精密稱取供試品0.3 g，置于10 mL頂空取樣瓶中，精密加入內標溶液5 mL，加蓋密封，振搖使溶解，作為供試品溶液。各取對照品溶液與供試品溶液于80℃加熱30 min，照《中國藥典》2005年版二部附錄殘留溶劑測定法[1]，按“2.1”項下色譜條件測定，根據內標法以峰面積計算。

2.3 線性范圍

精密量取上述對照品貯備液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分別置于50 mL容量瓶中，各精密加入內標貯備液3 mL，加水至刻度，搖勻。精密量取5 mL，置于10 mL頂空取樣瓶中，加蓋密封，依法測定。以對照品各峰面積與內標物峰面積之比（Y）為縱坐標，濃度X（mg·mL－1）為橫坐標進行線性回歸，得四氫呋喃、甲醇和乙醇的回歸方程分別為Y＝25.30X+0.0352（r＝0.9993）、Y＝1.922X+0.0106（r＝0.9999）、Y＝3.936X+0.0119（r＝1.000），三者檢測濃度線性范圍分別為0.0144～0.0718、0.060～0.300、0.0993～0.497 mg·mL－1。

2.4 精密度試驗

取對照品溶液，重復測定6次，計算對照品峰面積與內標物峰面積的平均比值，結果四氫呋喃、甲醇、乙醇分別為1.006、0.3602、1.1960；RSD分別為0.53%、0.30%、0.48%（n＝6），表明精密度良好。

2.5 溶液穩定性試驗

取“2.2”項下對照品溶液，分別于0、2、4、6、8 h取樣測定，得各峰面積與內標物峰面積比值無明顯差別，RSD＝0.20%，表明溶液在8 h內穩定。

2.6 最低定量限試驗

取“2.2”項下對照品貯備液，用水逐級稀釋成每1 mL中含四氫呋喃0.287、0.0144、0.0072 μg，甲醇0.730、0.365、0.182 μg和乙醇0.398、0.199、0.0995μg的3種不同濃度的混合溶液，依法測定，按S/N＝10計算最低定量濃度，結果四氫呋喃為0.0573μg·mL－1，甲醇為0.486 μg·mL－1，乙醇為0.145 μg·mL－1。

2.7 回收率試驗

精密稱取經105℃干燥至恒重的樣品（批號為080305）0.3 g，共6份，置于10 mL頂空取樣瓶中，分別精密加入對照品溶液（精密量取“2.2”項下對照品貯備液和內標貯備液各3 mL，加水稀釋至50 mL）5 mL，加蓋密封，振搖使溶解，依法測定，按內標法以峰面積計算回收率，得回收率四氫呋喃為103.7%（RSD＝2.62%，n＝6）、甲醇為95.8%（RSD＝1.21%，n＝6）、乙醇為95.0%（RSD＝0.87%，n＝6）。

2.8 樣品中溶劑殘留量測定

精密稱取批號為080305、080312、080316的倍他米松磷酸鈉原料藥0.3 g，依法進行測定。結果，3批均未檢出四氫呋喃；批號為080316樣品檢出甲醇殘留量為0.062%；3批樣品中均檢出乙醇，殘留量分別為0.281%、0.301%、0.183%。

3 討論

溶劑的選擇：倍他米松磷酸鈉易溶于水，且被測溶劑四氫呋喃、甲醇和乙醇均與水混溶，故選擇水作溶劑。

內標物與色譜柱的選擇：由于四氫呋喃、甲醇和乙醇均為極性溶劑，根據“相似相溶”的原理，采用極性色譜柱可增加極性溶劑的保留值。筆者曾分別以丙酮、正丙醇作為內標進行測試，結果，丙酮的保留時間與甲醇、乙醇較為接近，三者之間難分離；而正丙醇的保留時間較長，并通過適當提高柱溫，改善了各組分的分離情況。表明內標物以正丙醇為好。

頂空平衡時間和溫度選擇：取對照品溶液3份，分別在70、80、85℃下加熱平衡30 min后進樣測定。結果3種被測溶劑和內標正丙醇的峰面積均隨平衡溫度升高而增大；另取對照品溶液2份，分別在80℃加熱30、45 min后進樣測定，結果在平衡30、45 min時測得3種被測溶劑和正丙醇的峰面積基本不變。故選擇加熱溫度為80℃，平衡時間為30 min。采用頂空進樣法，除了能提高檢測靈敏度外，還可減少樣品對色譜柱的污染；同時降低頂空加熱溫度，可減少水氣對固定相聚乙二醇的影響，延長柱子使用壽命，且色譜系統穩定。

溶劑限度的擬定：根據《中國藥典》2005年版二部的規定，四氫呋喃、甲醇為二類溶劑，限度分別為0.071%、0.3%；乙醇為三類溶劑，限度為0.5%。在此要求下，本研究中3批原料藥的有機溶劑殘留量均合格。

[1]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（二部）[S].2005年版.北京：化學工業出版社，2005：621、附錄54.

[2]張 軍，孫會敏，李 科.氣相色譜法測定阿德福韋酯的10種殘留溶劑[J].藥物分析雜志，2005，25（6）：660.

[3]魏京京，張啟明，朱維華.毛細管氣相色譜測定27種常用有機溶劑[J].藥物分析雜志，2006，26（8）：1171.

[4]欒成章，祝 波，王尊文，等.頂空氣相色譜法測定夫西地酸中有機溶劑殘留量[J].中國藥房，2006，17（7）：535.