不同廠家炙朝鮮淫羊藿飲片主成分含量比較Δ

賈曉斌，金曉勇，王靜靜，邵振中，蘭雪蓮（1.江蘇大學藥學院，鎮江市 1013；.國家中醫藥管理局名方適宜劑型重點研究室，南京市 1008；3.江蘇省中醫藥研究院中藥新型給藥系統重點實驗室，南京市 1008）

淫羊藿為我國傳統的補益中藥，始載于《神農本草經》，并記載于歷代本草。淫羊藿具有補肝腎、強筋骨、祛風濕的作用，臨床用于治療陽痿、腰膝酸軟、風濕痹痛等證，具有較好的療效。臨床用淫羊藿歷來均以炮制品為主，而炙淫羊藿飲片應用最為廣泛，且療效極為顯著。炙淫羊藿飲片在2005年版《中國藥典》無含量測定項[1]。淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、寶藿苷I等黃酮類成分是淫羊藿的主要活性成分。筆者收集了3個廠家的炙朝鮮淫羊藿飲片，建立了反相高效液相色譜（RP-HPLC）法用于同時測定淫羊藿中5種主要黃酮類成分，旨在為炙朝鮮淫羊藿飲片的質量控制、資源利用和臨床合理應用提供科學依據。

1 儀器與試藥

HPLC儀，包括600型泵、2996型自動檢測器（美國Waters公司）；Empower數據處理系統（美國Waters公司）；KQ5200型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；十萬分之一分析電子天平（瑞士Mettler Toledo公司）。

乙腈（色譜純，美國Tedia公司）；甲醇、乙醇（分析純，南京化學試劑有限公司）；水為超純水；淫羊藿苷（中國藥品生物制品檢定所，批號：110737-200312）；朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、寶藿苷I標準品（江蘇省中醫藥研究院中藥新型給藥系統重點實驗室自制，純度＞98%）；炙品A（藥都集團茗都中藥飲片有限公司，批號：080201）、炙品B（安徽滕王藥業有限公司，批號：080501）、炙品C（亳州千草藥業有限公司，批號：080401）均經南京中醫藥大學吳德康教授鑒定為炙朝鮮淫羊藿飲片真品。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Alltima-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-水，梯度洗脫（0～13 min，乙腈22%；13～40 min，乙腈22%～78%；40～42 min，乙腈78%～22%；42～50 min，乙腈22%）；流速：1.0 mL·min-1；檢測波長：270 nm；柱溫：30℃；進樣量：10 μL。色譜見圖1。

2.2 混合對照品溶液的制備

精密稱定朝藿定A 8.58 mg、朝藿定B 9.13 mg、朝藿定C 8.27 mg、淫羊藿苷5.76 mg、寶藿苷I 5.73 mg對照（標準）品，分別置于10 mL容量瓶中，加甲醇定容，得0.858 mg·mL-1朝藿定A、0.913 mg·mL-1朝藿定 B、0.827 mg·mL-1朝藿定 C、0.576 mg·mL-1淫羊藿苷、0.573 mg·mL-1寶藿苷I貯備液。精密移取貯備液各1 mL，置于同一10 mL容量瓶中，搖勻，加甲醇定容，搖勻，即得朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、寶藿苷I濃度分別為0.0858、0.0913、0.0827、0.0576、0.0573 mg·mL-1的混合對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備[2]

取炙朝鮮淫羊藿飲片粉末（過3號篩）約0.2 g，精密稱定，加入75%乙醇溶液20 mL，精密稱定，超聲提取60 min，稱重后用提取液補足失重，過濾，減壓蒸干，殘渣用甲醇溶解，定容于10 mL容量瓶中，用0.45 μm微孔濾膜過濾，作為供試品溶液。

2.4 線性關系考察

精密吸取混合對照品溶液4、5、10、20、30、40、50 μL依次進樣，按“2.1”項下色譜條件測定峰面積。以峰面積積分值（Y）為縱坐標，對照品進樣量（X，μg）為橫坐標，進行線性回歸，得5種黃酮類成分的回歸方程、相關系數及線性范圍（見表1）。

表1 5種黃酮類成分的回歸方程、相關系數及線性范圍Tab 1 Regression equation，correlation coefficient and linear range of 5 kinds of flavonoids

2.5 精密度試驗

精密吸取混合對照品溶液20 μL，連續進樣5次，按“2.1”項下色譜條件測定各對照品峰面積。結果，峰面積的RSD分別為朝藿定A 1.11%、朝藿定B 1.00%、朝藿定C 1.26%、淫羊藿苷1.29%、寶藿苷I 0.86%，表明儀器精密度良好。

2.6 重復性試驗

取同一炙朝鮮淫羊藿飲片共6份，分別按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定。結果，朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷及寶藿苷I質量分數的RSD分別為1.90%、0.92%、2.18%、0.67%、1.27%，表明方法重復性良好。

2.7 穩定性試驗

取同一份供試品溶液，室溫放置，分別于0、1、2、4、8、12、24 h進樣，按“2.1”項下色譜條件測定。結果，朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷及寶藿苷I峰面積的RSD分別為3.59%、1.43%、2.66%、1.12%、2.30%，表明供試品溶液在24 h內穩定。

2.8 加樣回收率試驗

稱取已知含量的樣品共9份，每份約0.1 g，精密稱定，依次加入低、中、高3種質量濃度的朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷和寶藿苷I貯備液，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，準確吸取10 μL進樣，按“2.1”項下色譜條件測定，計算回收率。結果，朝藿定A、朝藿定B、朝藿C、淫羊藿苷和寶藿苷I的平均回收率分別為99.77%、101.37%、101.45%、102.10%、99.00%，RSD分別為2.27%、1.62%、1.70%、1.17%、1.59%（n＝9）。

2.9 樣品含量測定

稱取不同廠家的炙朝鮮淫羊藿飲片各約0.2 g，精密稱定，分別按“2.3”項下方法制備供試品溶液，準確吸取10 μL進樣，按“2.1”項下色譜條件測定。不同廠家炙朝鮮淫羊藿飲片中黃酮類成分含量測定結果見表2。

3 討論

本試驗結果表明，不同廠家炙朝鮮淫羊藿飲片所含5種黃酮類成分的含量差別較大。寶藿苷I以炙品B的含量最高，是炙品A的5.5倍、炙品C的6.4倍。炙品B淫羊藿苷含量最高，分別高出炙品A、C16.1%、17.2%。炙品B的朝藿定B、朝藿定C略低于炙品A和炙品C中的含量，但是總體來說，朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C含量接近，朝藿定A的含量波動范圍在3.61～4.26 mg·g-1，朝藿定B的含量波動范圍在5.77～7.91 mg·g-1，朝藿定C的含量波動范圍在2.47～2.97 mg·g-1。筆者認為，不同廠家炙朝鮮淫羊藿飲片中5種黃酮類成分含量差別較大的原因是：來源不同的朝鮮淫羊藿藥材經加工炮制成不同廠家的炙朝鮮淫羊藿飲片后，其5種黃酮類經成分的含量存在差異；蔡垠等[3]研究發現溫度和時間是影響淫羊藿中黃酮類成分含量的重要因素，因此不同廠家的炮制工藝不同必然會引起不同廠家炙淫羊藿飲片中5種黃酮類成分含量的差異。

表2 不同廠家炙朝鮮淫羊藿飲片中黃酮類成分含量測定結果（n＝3）Tab 2 Content determination of flavone in Epimedium koreanum nakai decoction pieces from different manufactories（n＝3）

炮制會改變淫羊藿中黃酮類化學組分的配比，使多糖苷（如朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C等）向低一級糖苷（如淫羊藿苷）轉化，而低一級糖苷的滲透系數比多糖苷滲透系數高，吸收比多糖苷好[4]。本課題構建了炙朝鮮淫羊藿飲片的評價體系，以便科學合理地控制炙朝鮮淫羊藿飲片的質量，為炙淫羊藿朝鮮飲片的生產、檢驗、臨床應用提供科學依據。

本研究建立的RP-HPLC法，通過對色譜條件的優化[5]，可以同時測定不同極性的黃酮類成分，如極性較大的朝藿定A和極性較小的寶藿苷I；同時，對極性相似、母核一致、取代基稍有不同而難于分離的成分如朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C仍可達到基線分離，方法簡便、可靠。

[1]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（一部）[S].2005年版.北京：化學工業出版社，2005：229.

[2]Hua-Feng Zhang，Tian-Shun Yang，Zuo-Zhou Li，et al.Simultaneous extraction of epimedin A，B，C and icariin from Herba Epimedii by ultrasonic technique[J].Ultrasonics Sonochemistry，2008，15（4）：376.

[3]蔡 垠，陳 彥，賈曉斌，等.受熱溫度和時間對淫羊藿中黃酮成分含量的影響[J].中國中藥雜志，2007，32（22）：2441.

[4]Yan Chen，Yan-hong Zhao，Xiao-bin Jia，et al.Absorption mechanisms of prenylated flavonoids and effects of heat processing on their stability and intestinal[J].Pharmaceutical Research，2008，25（9）：2190.

[5]陳 彥，趙艷紅，賈曉斌，等.RP-HPLC法同時測定不同品種淫羊藿藥材中5種主要黃酮類成分的含量[J].中國藥房，2008，19（6）：431.