穿山龍等3種中藥材的總灰分定值分析方法研究Δ

呂麗娟，劉淑聰，龔寧波，馬林，呂揚

（北京協和醫學院/中國醫學科學院藥物研究所，北京市 100050）

標準物質從其建立、發展到今天，在各個行業、領域的應用中扮演著越來越重要的角色。標準物質的使用不僅是確保產品質量的基本要求，而且為材料試驗和化學分析等提供了測量基準，并確保了測量方法的溯源性以及可比較性。然而，目前我國尚缺少賦予不確定度的中藥材有證標準物質。本論文為該項研究中的部分內容，以中藥材為對象，選擇了絕對分析方法-重量法-雙人定值，評定其總灰分測定結果的不確定度。

總灰分系指藥材或制劑經加熱熾灼灰化后殘留的無機物。總灰分除包含藥物本身所含無機鹽（稱為生理灰分）外，還包括泥土、砂石等藥材外表黏附的無機雜質（稱為外來雜質）。因此，測定總灰分的目的主要是控制藥材中泥土、砂土的量，同時還可以反映藥材生理灰分的量[1]。各國藥典均收載藥材總灰分的檢查方法，并不得超過一定的限量，可見總灰分測定的意義重大。

1 材料

1.1 儀器

SX2.5-10型箱式電阻爐（上海樹立儀器儀表有限公司）；XS105型分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；坩堝（常規）；干燥器（常規）。

1.2 試藥

穿山龍（產地河北）、梔子（產地江西）、夏枯草（產地山西），經中國醫學科學院藥物研究所馬林教授鑒定，分別為薯蕷科植物穿龍薯蕷Dioscorea nipponica Makino的干燥根莖、茜草科植物梔子Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果實、唇形科植物夏枯草Prunella vulgaris L.的干燥果穗。

中藥材樣品均經凈制、粉碎、過篩處理，其中穿山龍樣品過65目篩，梔子樣品過65目篩，夏枯草樣品過24目篩。

2 方法與結果

2.1 方法

雙人（甲、乙）獨立操作。分別精密稱取供試中藥材標準物質0.3 g，共10份，置熾灼至恒重的坩鍋中，稱定質量，緩慢熾熱，注意避免燃燒，至完全炭化時，逐漸升高溫度至500～600℃，使完全灰化并至恒重。根據殘渣質量，計算供試品中總灰分的含量（%）。如供試品不易灰化，可將坩堝放冷，加熱水或10%硝酸銨溶液2 mL，使殘渣濕潤，然后置水浴上蒸干，殘渣照前法熾灼，至坩堝內容物完全灰化[2，3]。

2.2 測量數據的檢驗（以穿山龍為例計算說明）

各中藥材標準物質的總灰分測定結果見表1。

通過對標準物質灰分含量測定得到的甲、乙2組各10個值，經格拉布斯（Grubbs）法檢驗，未發現可疑值。然后進行2次獨立檢測數據的t檢驗。

表1 3種中藥材總灰分測定結果Tab 1 Results of total ash value of 3 kinds of Chinese herbal medicines

查t分布雙側分位數表知：當f＝18、α＝0.05時，t＝2.101。說明2次獨立檢測數據的t值均小于臨界值，表明2次獨立檢測數據無顯著性差異。

2.3 標準值確定（以穿山龍為例計算說明）

將20個值求得的總平均值作為該標準物質的總灰分標準值，則穿山龍標準物質的總灰分標準值為1.7167%。

2.4 不確定度評定的數學模型[4～7]

不確定度的來源涉及測量的人員、環境、方法及器具等，總灰分的測定采用重量法，在標準方法規定的條件下，溫度、濕度等影響可忽略；測試過程（包括人員操作等）的隨機效應、被檢樣品的非均勻性和稱量的變動性等均體現在測量的重復性中；天平校準的不確定度可以從檢定證書中獲得；恒重主要影響灰分的質量，即m1，可加入到相應的質量分量中。m1、m2、m3均稱量一次而得，因此，考慮中藥材的總灰分測定中不同因素的影響和重復性的影響，建立數學模型為：

式中，x為中藥材總灰分含量（g·g-1）；m1為恒重坩堝和灰分的質量（g）；m2為恒重坩堝的質量（g）；m3為恒重坩堝和中藥材樣品的質量（g）。

2.5 不確定度計算（以穿山龍為例計算說明）

2.5.2 均勻性產生的不確定度 隨機抽取裝有標準物質的安瓿15支（每支1 g），以0.3 g為取樣量，每支取樣3份，同法測定總灰分，利用單因素方差分析進行樣品均勻性檢驗，3種中藥材均勻性檢驗結果見表2。

表2 3種中藥材均勻性檢驗結果Tab 2 Results of uniformity test of 3 kinds of Chinese herbal medicines

其中，MS組間為組間均方；MS組內為組內均方；SS組間為組間離差平方和；SS組內為組內離差平方和；ν組間為組間自由度；ν組內為組內自由度。

因此，由均勻性產生的不確定度（SH）按照《國際標準化組織指南35》規定，按照公式：

2.5.3 穩定性產生的不確定度 由長期穩定性考察可知，斜率的不確定度S（b1）用下式計算：

3種中藥材的穩定性檢驗結果見表3。

表3 3種中藥材穩定性檢驗結果Tab 3 Results of stability test of 3 kinds of Chinese herbal medicines

2.5.4 相對合成標準不確定度uc（x）

2.5.5 擴展不確定度U（x）U（x）＝kuc（x），k取2，U（x）＝2×0.07048%＝0.1410%，P＝95%。

2.5.6 結果表示 穿山龍標準物質的灰分值為：（1.72±0.15）%，k＝2，P＝0.95。同理，梔子標準物質及夏枯草標準物質的灰分值分別為：（4.82±0.21）%和（9.39±0.39）%。3種中藥材總灰分測定不確定度分量匯總見表4。

表4 3種中藥材總灰分測定不確定度分量匯總Tab 4 Uncertainty of total ash of 3 kinds of Chinese herbal medicines

3 討論

灰分測定是對中藥材的雜質進行檢查的一種方法，對于中藥材及以藥材粉末直接入藥或為原料的中藥制劑進行灰分檢測，對控制中藥及其制劑質量、確保用藥安全有效都有積極意義。

有些中藥材生理灰分差異較大，特別是組織中含草酸鈣較多的藥材，需要測定酸不溶性灰分，從而更準確地反映出外來雜質的量。

由表4可見，測量不確定度分量對評定結果的總不確定度影響較大，樣品均勻性次之，樣品穩定性最小。故而，應從減少稱量誤差方面著手以提高測量結果的準確性。

本研究方法簡便、可行，在中藥材整體質量控制方面具有參考價值，同時也為中藥材有證標準物質研制提供了基礎研究結果。

[1]劉文英主編.藥物分析[M].第6版.北京：人民衛生出版社，2007：422.

[2]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（一部）[S].2005年版.北京：化學工業出版社，2005：附錄48.

[3]楊 輝.關于2005年版《中國藥典》（一部）附錄灰分測定法中操作方法的探討[J].中國藥房，2007，18（7）：547.

[4]全國法制計量技術委員會編.JJF1059-1999測量不確定度評定與表示[S].1999：1566.

[5]中國合格評定國家認可委員會編.CNAS-GL06化學分析中不確定度的評估指南[S].2006：7.

[6]Leung KSY，Chan CL，Lau ACK，et al.Measurement uncertainty for total ash and acid-insoluble ash determination of Chinese materia medica[J].Accred Qual Assur，2005，10（6）：289.

[7]朱 嵐，魯 波，劉廣輝.重量分析測量不確定度評定的探討[J].預防醫學情報雜志，2005，21（6）：761.