HPLC法測定毓麟合劑中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量

徐玲玲，張玉萱，年 華

（上海中醫(yī)藥大學附屬岳陽中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院藥劑科，上海市 200437）

毓麟合劑由川續(xù)斷等6味中藥組成，主要用于治療女子不孕癥，臨床應用療效確切。處方中川續(xù)斷為君藥，皂苷類成分為其重要成分，川續(xù)斷皂苷Ⅵ為活性物質(zhì)。為控制該藥的內(nèi)在質(zhì)量，確保用藥安全、有效，筆者參考《中國藥典》[1]，采用高效液相色譜（HPLC）法對毓麟合劑中川續(xù)斷皂苷Ⅵ進行了含量測定。

1 材料

1.1 儀器

1200型HPLC儀（美國Agilent公司）；Branson B5200S-DT型超聲提取器（必能信超聲上海有限公司）；80-1型離心機（上海手術器械廠）；BS124S型萬分之一天平（德國Sartorius公司）；0.45 μm微孔濾膜（北京Dikma公司）。

1.2 試藥

川續(xù)斷皂苷Ⅵ對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：111685-200401）；毓麟合劑（批號：060810、060814、060830、070531、070724）及陰性樣品均由本院制劑室提供；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為雙蒸水（使用前經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Zorbax EcLipse XDB-C18（150 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：甲醇-0.01 mol·L-1鹽酸溶液（69∶31）；流速：1 mL·min-1；檢測波長：212 nm；柱溫：20 ℃；進樣量：5 μL。色譜見圖1。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥器減壓干燥至恒重的川續(xù)斷皂苷Ⅵ對照品適量，以流動相制成相應濃度的對照品溶液，即得。每次測定前用0.45 μm微孔濾膜濾過。

2.2.2 供試品溶液 精密吸取本品（批號：060810）1 mL，置10 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密吸取1 mL，置2 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，3000 r·min-1離心5 min，取上清液，即得。進樣前用0.45μm微孔濾膜濾過。

2.2.3 陰性對照溶液 按處方比例，取除去川續(xù)斷藥材成分的陰性樣品，按“2.2.2”項下方法制得陰性對照溶液。

2.3 方法學考察

2.3.1 線性關系考察 精密稱取川續(xù)斷皂苷Ⅵ對照品2.3 mg，加甲醇制成每1 mL含川續(xù)斷皂苷2.3 mg的溶液，分別精密吸取該溶液0.1、0.2、0.5、1、2、5 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋成不同濃度的對照品溶液，分別進樣5μL，按上述色譜條件分別進樣分析。用其峰面積積分值（Y）對濃度（X）進行線性回歸，得回歸方程為Y＝1629.9X+72.344（r＝0.9989）。結(jié)果表明，川續(xù)斷皂苷Ⅵ的檢測濃度在0.022～0.23 mg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關系。

2.3.2 精密度試驗 取同一濃度的川續(xù)斷皂苷Ⅵ對照品溶液，精密吸取5μL，連續(xù)進樣5次。結(jié)果，RSD＝1.55%，表明儀器精密度良好。

2.3.3 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液，按上述色譜條件，分別于0、2、4、8、24 h進樣測定。結(jié)果，RSD＝1.49%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.4 重復性試驗 取同一批樣品（批號：060830）共6份，分別按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定樣品含量。結(jié)果，RSD＝1.30%（n＝6），表明方法重復性良好。

2.3.5 加樣回收率試驗 精密吸取已知含量的本品（批號：060830）1 mL，共9份，分別置10 mL量瓶中，分別精密加入80%、100%、120%的川續(xù)斷皂苷Ⅵ對照品溶液，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定，計算加樣回收率，結(jié)果見表1。

2.3.6 樣品含量測定 取5批樣品，分別按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液。精密吸取對照品溶液和供試品溶液各5μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積，計算樣品含量，結(jié)果見表2。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果（n＝9）Tab 1 Results of recovery test（n＝9）

表2 毓麟合劑中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量測定結(jié)果（n＝5）Tab 2 Content determination of asperosaponinⅥin Yulin mixture（n＝5）

3 討論

取川續(xù)斷皂苷Ⅵ對照品在200～600 nm波長范圍內(nèi)進行紫外掃描，發(fā)現(xiàn)川續(xù)斷皂苷Ⅵ在212 nm波長處有最大吸收，并且供試品色譜中其它組分在此處可以達到基線分離，靈敏度高，故確定212 nm作為川續(xù)斷皂苷Ⅵ的測定波長。

本試驗采用HPLC法直接測定毓麟合劑中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量，無需進一步純化提取過程。該方法簡便、易行、精密度高、重復性好，可用于毓麟合劑的質(zhì)量控制。

[1]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（一部）[S].2005年版.北京：化學工業(yè)出版社，2005：59、60.