微乳對(duì)左旋紫草素增溶作用的實(shí)驗(yàn)研究

連文元， 李 悅， 王新春，2*， 蘇 紅， 張美玲

（1.石河子大學(xué)藥學(xué)院，新疆石河子 832002;2.石河子大學(xué)一附院，新疆石河子 832008）

紫草是常用中藥之一，為紫草科植物新疆紫草，紫草，內(nèi)蒙紫草等的干燥塊根，具有止血，抗炎，抗菌及抗癌作用［1］。其抗腫瘤主要活性成分左旋紫草素能影響腫瘤細(xì)胞的代謝、增殖、分化、信號(hào)傳遞、基因表達(dá)等過(guò)程，阻礙腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，抗腫瘤應(yīng)用前景廣闊［2］。但左旋紫草色素水溶性差的性質(zhì)限制了其廣泛應(yīng)用。

微乳（ME）是由油相、水相、表面活性劑及助表面活性劑以適當(dāng)比例混合后，自發(fā)形成的一種透明或半透明、低黏度的動(dòng)力學(xué)和熱力學(xué)都很穩(wěn)定的混合體系，其液滴粒徑介于10～100 nm之間。微乳作為油、水難溶性藥物的良好載體可增加藥物的溶解度，提高藥物的生物利用度［3］。

因此，為增加左旋紫草素溶解度，采用偽三元相圖法進(jìn)行左旋紫草素微乳的研究，用紫外法測(cè)定其載藥量，考察微乳對(duì)左旋紫草素的增溶作用，為左旋紫草素相關(guān)制劑的研究提供一定的依據(jù)。

1 儀器與試藥

紫外分光光度計(jì)－2401PC（日本島津公司）;HJ－六聯(lián)磁力攪拌器（金壇市華峰儀器有限公司）;BS110S電子天平（北京賽多利斯天平有限公司）;左旋紫草素 （批號(hào):110769－200405，中國(guó)藥品生物制品檢定所）;聚氧乙烯（35）蓖麻油甘油醚（Cremophor EL12－14，德國(guó) BASF公司）;肉豆蔻酸異丙酯（IPM，浙江物美化學(xué)品有限公司）;其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 空白微乳的處方和Km的選擇、制備［4］

2.1.1 空白微乳的處方選擇 將乳化劑（EL）與助乳化劑（乙醇）按Km為1∶1混合，用磁力攪拌器充分混合均勻得混合乳化劑，再與油相（IPM）分別按 9 ∶1、8 ∶2、7 ∶3、6 ∶4、5 ∶5、4 ∶6、3 ∶7、2 ∶8、1 ∶9 混合均勻，邊攪拌邊逐滴加入注射用水，觀察體系由濁至清的現(xiàn)象，記錄臨界點(diǎn)時(shí)的各組分百分比。以溶液外觀、流動(dòng)性、成乳難易程度及成乳區(qū)域的大小為指標(biāo)，最終選定EL、IPM、乙醇為本實(shí)驗(yàn)的乳化劑、油相和助乳化劑。

2.1.2 Km值的選擇 見(jiàn)圖1。將Km=1∶1和Km=2∶1定為候選Km值。（Km為乳化劑和助乳化劑的質(zhì)量比）。分別按兩個(gè)Km值配制混合乳化劑，混合乳化劑與油相分別按 9 ∶1、8 ∶2、7 ∶3、6 ∶4、5 ∶5、4 ∶6、3 ∶7、2 ∶8、1 ∶9 比例混合，在25℃恒溫條件下攪拌混勻，后逐滴加入水，至體系成透明或半透明并帶藍(lán)色乳光時(shí)，停止加水即得空白微乳;記錄加水量，各組分量換算成質(zhì)量百分?jǐn)?shù)后用Origin7.5軟件繪制偽三元相圖。圖1中M表示微乳相，LG表示凝膠相，E表示普通乳相。

比較兩個(gè)相圖，前者在微乳區(qū)、凝膠相區(qū)及普通乳區(qū)分界明顯，有利于判斷區(qū)分各相形態(tài);后者所得相圖中凝膠相和普通乳相的臨界點(diǎn)難于判斷，且相區(qū)發(fā)生交叉，無(wú)法明確相區(qū)內(nèi)相態(tài)，故選擇Km=1∶1;根據(jù)乳化劑用量少和隨機(jī)的原則，從所得相圖中取三個(gè)處方配比進(jìn)行制備，攪拌12 h后，結(jié)果配比2的微乳還比較透明，且具有藍(lán)色乳光。故選擇處方2來(lái)制備空白微乳。微乳處方用量配比見(jiàn)表1。

圖1 微乳的偽三元相圖

表1 微乳處方用量配比表

2.2 紫外分光光度法測(cè)定左旋紫草素的含量

2.2.1 最大檢測(cè)波長(zhǎng)選擇 取左旋紫草素對(duì)照品約18 mg，精密稱定，置50 mL棕色量瓶中，加入乙醇溶解，稀釋至刻度，制成濃度每1 mL為0.392 mg的對(duì)照品貯備液。精密吸取對(duì)照品貯備液1.0 mL，置于10 mL棕色量瓶中，加入乙醇稀釋至刻度。以乙醇為空白，400～800 nm范圍內(nèi)掃描。同時(shí)，精密吸取左旋紫草素微乳與空白微乳各400 μL，分別置25 mL棕色量瓶中，各加入乙醇適量，再加入乙醇稀釋至刻度，搖勻。分別以乙醇為空白，400～800 nm范圍內(nèi)掃描。結(jié)果，左旋紫草素微乳中左旋紫草素與左旋紫草素對(duì)照品在516 nm波長(zhǎng)處均有最大吸收峰，而空白微乳在此波長(zhǎng)處無(wú)吸收，故對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。

2.2.2 左旋紫草素標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密移取左旋紫草素對(duì)照品貯備液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，各置于10 mL 棕色量瓶中，加入乙醇至刻度，搖勻。以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，吸收度為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得左旋紫草素標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為:A=28.011C+0.000 9（r=0.998）。結(jié)果表明，左旋紫草素在7.12～28.53 μg/mL范圍內(nèi)與吸收度線性關(guān)系良好。2.2.3 精密度試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別于同日不同時(shí)間及隔日測(cè)定1次，測(cè)定5次吸收度。結(jié)果，供試品溶液日間及日內(nèi)吸收度RSD分別為0.50%和0.32%。

2.2.4 回收率試驗(yàn) 精密移取空白微乳9份各400 μL，分別置25 mL棕色量瓶中，各精密加入左旋紫草素對(duì)照品溶液適量，再加入乙醇稀釋至刻度，搖勻、測(cè)定。計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為98.97%，RSD為0.35%（n=9）。

2.3 左旋紫草素溶解性能的考察

移取溶劑蒸餾水、空白微乳各10 mL，分別置于50 mL磨口錐形瓶中，各加入左旋紫草素至不溶，于振蕩器上連續(xù)振24 h（25±1）℃，達(dá)飽和狀態(tài)后，各取適量液體置離心管中，離心15 min（2 500 r/min）。取上清液，微孔濾膜（0.22 μm）過(guò)濾，得2種濾液。精密移取2種濾液適量，分別置25 mL棕色量瓶中，加入乙醇至刻度。于516 nm處測(cè)定吸收度，計(jì)算溶解度。結(jié)果，左旋紫草素在微乳中的溶解度比水中有明顯的增大，在微乳中的溶解度為3.72 mg/mL，在蒸餾水中的溶解度為0.003 9（mg/mL），提高約955倍，說(shuō)明微乳對(duì)左旋紫草素有明顯的增溶作用，（P＜0.05）。

3 討論

3.1 左旋紫草素由于其為溶解度極低大大限制其臨床應(yīng)用，本實(shí)驗(yàn)探索了新型給藥系統(tǒng)微乳對(duì)難溶性藥物的增溶作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，微乳可大大提高左旋紫草素的溶解度，為其臨床應(yīng)用奠定了理論基礎(chǔ)。

3.2 在篩選乳化劑、助乳化劑及油相時(shí)，分別以吐溫－80、卵磷脂及EL為乳化劑，以PEG－400、乙醇、丙二醇及正丁醇為助乳化劑，以肉豆蔻異丙酯（IPM）、油酸、辛酸/葵酸三甘油酯（GTCC）為油相，按正文中2.1.1項(xiàng)法進(jìn)行微乳制備研究，繪制偽三元相圖。結(jié)果，以樣品外觀、流動(dòng)性、成乳難易程度及微乳區(qū)域大小為綜合指標(biāo)，選擇了乙醇、EL、IPM為本實(shí)驗(yàn)的助乳化劑、乳化劑和油相。

［1］羅學(xué)婭，李明輝，呂莉，等.紫草的藥理作用與應(yīng)用研究進(jìn)展［J］.大連大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，25（2）:80－84.

［2］黃 河，劉宗潮.紫草素及其衍生物的抗腫瘤作用［J］.腫瘤防治雜志，2005，12（1）:75－79.

［3］石宗豐，王利勝.微乳在中藥制劑中的應(yīng)用研究進(jìn)展［J］.中藥新藥與臨床藥理，2008，19（5）:414－416.

［4］潘國(guó)梁，賈曉斌，魏惠華，等.藥用微乳偽三元相圖的幾種制備方法比較研究［J］.中國(guó)藥房，2006，7（1）:21－23.

［5］范芳芳，劉澤蒲，陳 文，等.紫外分光光度法測(cè)定新疆紫草中總萘醌的含量［J］.石河子大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2004，22，（5）:1577－1578.