探討ELISA檢測HBsAg中延時不同時間比色對結果的影響

830017 新疆烏魯木齊溫泉療養院 李書群 劉艷 李曉勤

1 材料和方法

1.1 標本來源 從428名來我院進行體檢的體檢者中檢出的13例HBsAg陽性血清標本。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 儀器 KHB ST-360酶標儀，KHB ST-36W洗板機。

1.2.2 試劑 濰坊三維生物工程集團有限公司提供的乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒(酶聯免疫法)。

1.3 方法

1)對13例血清標本進行隨機編號，依次為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13號，用ELISA法檢測13例血清標本HBsAg，按照試劑盒中的說明書操作。

2)在加入終止液混勻后立即在酶標儀上比色，記為0 min的OD值。然后依次在加入終止液后的10 min、20 min、30 min、40 min在酶標儀上比色，分別記為10 min、20 min、30 min、40 min的OD值。

3)結果判斷。本試驗的C.O.為0.105，以0 min的OD值/C.O.≥1者判為HBsAg陽性，13例血清全部陽性。

4)將0 min的OD值分別與10 min、20 min、30 min、40 min的OD值配成對子，共4對。用配對t檢驗，分別比較0 min的OD值與10 min、20 min、30 min、40 min的OD值，結果(表1)。

表1 終止反應后延時不同時間的OD值比較

2 結果

從表1中可以看出，終止反應后延時10 min、20 min的OD值與0 min的OD值比較，P＞0.05，無統計學差異。終止反應后延時30 min、40 min的OD值與0 min的OD值比較，P＜0.05，有統計學差異。

3 討論

實驗室在應用試劑盒檢測標本時，一般都是按照試劑盒中的說明書進行操作。本試驗試劑盒中的說明書上表明的比色時間應在終止反應的30 min內完成。而作者所做的試驗結果卻是：在終止反應的20～30 min這段時間內，樣本的OD值便與0 min的OD值有統計學差異。這種差異對OD值較高的強陽性標本影響不大，但對于OD值較低的弱陽性標本，容易造成假陰性結果。從表1中可以看到，第9號標本在延時第10分鐘比色時，已經由弱陽性轉為陰性。對于有自動化免疫分析儀的實驗室，不存在延時比色的問題。但對于沒有自動化免疫分析儀的實驗室來說，這個問題就應引起重視。作者建議用ELISA進行HBsAg測定的操作過程中，加終止液終止反應后應立即比色。我國是乙型肝炎的高發地區，HBsAg攜帶者約為1.2億，攜帶率為10%[1]。為了避免給臨床造成漏診、誤診，我們在實際工作中，應以嚴謹負責的工作態度，認真實踐，嚴格控制導致HBsAg假陰性結果的因素，減少誤差，提高檢測結果的準確性。

[1]王振英，張紀云，高玉芳，主編.放射免疫分析與臨床[M].北京：中國科學技術出版社，1994：239.