金標(biāo)法與酶聯(lián)免疫吸附法檢測乙肝表面抗原的方法學(xué)比較

066100 北京軍區(qū)北戴河療養(yǎng)院 李巖 姜梅 陳松楠 李娜

乙型肝炎是目前流行最廣泛、危害最嚴(yán)重的病毒性肝炎之一[1]，我國為乙型肝炎病毒感染的高流行區(qū)，正常人群的乙肝表面抗原(HBsAg)攜帶率一般為10%～15%[2]。目前檢測HBsAg的方法以酶聯(lián)免疫吸附法 (ELISA)為代表，該法以其操作簡便、快速、靈敏、準(zhǔn)確、重復(fù)性好、無放射污染等特點(diǎn)被廣泛使用；金標(biāo)法(Gold immnnochromatography，GICA)是在ELISA基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種檢測技術(shù)，由于其具有操作簡便、快捷、可單份檢測、便于保存、不需特殊設(shè)備等優(yōu)點(diǎn)，也廣泛應(yīng)用于HBsAg的初篩。本文對(duì)兩種方法檢測結(jié)果進(jìn)行比較，探討其差異性。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 來自2009年4～8月北京軍區(qū)北戴河療養(yǎng)院體檢人員、門診患者及療養(yǎng)人員1 024例，其中男615例，女409例。抽取靜脈血3 mL，標(biāo)本靜置后離心取血清。

1.2 方法

1.2.1 金標(biāo)法 嚴(yán)格按照使用說明書的要求操作，在層析擴(kuò)散正常的情況下，質(zhì)控區(qū)出現(xiàn)1條紫紅色條帶，測試區(qū)未出現(xiàn)紫紅色條帶為陰性；質(zhì)控區(qū)和測試區(qū)均出現(xiàn)紫紅色條帶為陽性；僅測試區(qū)出現(xiàn)，質(zhì)控區(qū)未出現(xiàn)紫紅色條帶，結(jié)果無效。HBsAg金標(biāo)試紙條加樣后15～20 min觀察結(jié)果，30 min后出現(xiàn)的反應(yīng)線視為無效。

1.2.2 ELISA 采用雙抗體夾心法原理在微孔條上預(yù)包被純化乙肝表面抗體(HBsAb)，配以酶標(biāo)記抗體(HBsAb-HRP)及TMB顯色劑等其他試劑，檢測人血清或血漿中的HBsAg。嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。

2 試劑與儀器

金標(biāo)法快速測試條由浙江杭州艾康生物技術(shù)有限公司提供(批號(hào)：200805164/d)，ELISA試劑盒由北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司提供(批號(hào)：X20090101)，酶標(biāo)儀：Rayto6000，洗板機(jī)：Rayto3000，恒溫箱：WMZK-02，加樣器：M148023。

3 結(jié)果

金標(biāo)法與ELISA檢測HBsAg的比較，在1 024份標(biāo)本中ELISA檢出HBsAg陽性92份，陽性率為8.98%；金標(biāo)法有5份假陰性，9份假陽性，陽性率為9.37%，靈敏度為94.56%，特異度為99.03%。兩法結(jié)果經(jīng)配對(duì)計(jì)數(shù)資料的χ2檢驗(yàn)，χ2＝0.046 9，結(jié)果顯示兩種方法測定的HBsAg結(jié)果間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＞0.05。但漏檢率仍為5.4%，誤差率為0.88%，準(zhǔn)確度為98.63%(表1)。

表1 金標(biāo)法與ELISA法檢測結(jié)果比較

4 討論

用抗HBsAg多克隆抗體包被硝酸纖維素膜，配以紅色乳膠標(biāo)記的抗(HBsAg)單克隆抗體HBsAb，應(yīng)用雙抗體夾心法原理，定性檢測血清或血漿中HBsAg。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，金標(biāo)法與ELISA法的靈敏度有差異，金標(biāo)法的靈敏度稍低于ELISA法[3-4]。目前，國產(chǎn)的HBsAg膠體金試紙條檢測靈敏度已達(dá)到1 ng/mL[5]，而ELISA試劑的靈敏度可達(dá)0.5 ng/mL，這可能是造成ELISA法檢測弱陽性標(biāo)本金標(biāo)法檢測陰性的主要原因，還有金標(biāo)法存在的一個(gè)重要的問題就是層析的速度，如果速度過快，HBsAg未能與試紙條上的HBsAb結(jié)合，就越過了檢測線，弱陽性樣本還未顯示，這也可能導(dǎo)致漏檢。國內(nèi)作者報(bào)道，由于金標(biāo)法易受環(huán)境、濕度、反應(yīng)時(shí)間及加樣量的影響，對(duì)于低滴度HBsAg感染者極易造成漏檢[6]。ELISA法檢測HBsAg以靈敏度高、特異性強(qiáng)、可進(jìn)行定量和半定量測定尤為突出，重復(fù)性好，可進(jìn)行批量檢測，但操作步驟相對(duì)繁瑣，試劑實(shí)際要求嚴(yán)格，影響因素多。因此實(shí)驗(yàn)室要結(jié)合工作情況合理選用試驗(yàn)方法。

[1]葉維法，鐘振義.肝炎學(xué)大典[M].天津：天津科學(xué)技術(shù)出版社，1996：463-515.

[2]姜雙應(yīng).青海省病毒性肝炎血清流行病學(xué)調(diào)查[J].中國病毒性肝炎血清流行病學(xué)調(diào)查(下卷)，1997，7(1)：224.

[3]陳瀑，康紅.膠體金免疫層析法檢測乙型肝炎的評(píng)價(jià)[J].臨床輸血與檢驗(yàn)，2003，5(1)：30-31.

[4]曾章新，劉文星，樂忠勇，等，膠體金免疫層析法檢測乙型肝炎表面抗原的評(píng)價(jià)[J].中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，1999，22(6)：327-329.

[5]周繼文，戎廣亞，楊守純，等.膠體金免疫層析法檢測乙型肝炎病毒表面抗原[J].中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，1998，21(1)：30.

[6]施紀(jì)問，徐簡華，溫惠萍.ELISA法和膠體金免疫層析法檢測乙型肝炎表面抗原的比較[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2005，20(5)：48-49.