高效液相色譜法測定炙草復(fù)脈丸中芍藥苷含量

王玉紅，閆 玲，張靜宇

(1.河北省保定市第二醫(yī)院，河北 保定 071051;2.河北省保定市中醫(yī)院，河北 保定 071000)

炙草復(fù)脈丸是由炙甘草、赤芍、地黃、黃芪、丹參、澤瀉等8味藥組成的醫(yī)院制劑，具有益氣、養(yǎng)陰、活血的功效，用于治療氣陰兩虛兼有的血瘀型心悸等癥。為控制制劑質(zhì)量，筆者以方中赤芍的有效成分芍藥苷為定量指標，參考相關(guān)文獻[1]建立了制劑中芍藥苷的含量測定方法，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Shimadzu LC 20AT型高效液相色譜儀，包括四元泵、紫外檢測器、自動進樣器(日本島津)。芍藥苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為110736－200732);炙草復(fù)脈丸及缺赤芍的陰性樣品(保定市第二醫(yī)院自制);乙腈為色譜純，水為去離子水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:Shimadzu VP C18柱(150 mm × 6.0 mm，5 μm);流動相:乙腈 －0.1%磷酸(14 ∶86);檢測波長:230 nm;流速:1 mL/min;柱溫:室溫;進樣量:5 μL。在此條件下，樣品中芍藥苷與其他成分色譜峰分離良好，保留時間適中。

2.2 溶液制備

取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含40 μg的溶液，即得對照品溶液。取本品適量，研碎，混勻，取0.4 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入30%甲醇25 mL，密塞，超聲處理(功率為160 W，頻率為40 kHz)30 min，放冷，濾過，用30%甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。取不含赤芍的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

陰性干擾試驗:精密吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照品溶液各5 μL，注入液相色譜儀測定。結(jié)果陰性對照品溶液色譜在與芍藥苷對照品溶液色譜峰相應(yīng)保留時間處無干擾(圖1)。

線性關(guān)系考察:精密吸取不同量的對照品溶液，注入液相色譜儀，測定峰面積。以進樣量(μg)為橫坐標、峰面積為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程 Y=4.449 6+1 781.6 X，r=0.999 9。結(jié)果表明，芍藥苷進樣量在 0.020 84～2.084 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗:精密吸取對照品溶液 5 μL，連續(xù)進樣5次，記錄峰面積。結(jié)果平均峰面積為 550 236，RSD為0.86%(n=5)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:取同一供試品溶液，分別于配制后0，1，2，4，8，14，24 h 進樣測定。結(jié)果 峰 面 積 的 RSD=0.59%(n=7)，表明供試品溶液至少在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗:取同一批樣品，依法制備供試品溶液，分別測定含量。結(jié)果平均含 量 為 2.907 mg/g，RSD=1.1%(n=6)，表明方法重復(fù)性良好。

圖1 高效液相色譜圖

加樣回收試驗:精密稱取已知含量(含芍藥苷2.907 mg/g)的樣品0.2 g，分別精密加入一定質(zhì)量濃度的對照品溶液，依法測定含量，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 芍藥苷加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測定

取3批樣品，依法測定。結(jié)果批號為080501，080201，080301的樣品中，芍藥苷含量分別為 2.91，2.80，2.84 mg/g，平均含量為2.85 mg/g。

3 討論

以流動相為溶劑，在200～400 nm波長范圍內(nèi)測定芍藥苷對照品的紫外光譜圖，結(jié)果在230 nm波長處有最大吸收，故確定230 nm為測定波長。曾嘗試用甲醇－水(40∶60)作流動相，結(jié)果芍藥苷與其他組分色譜峰未達到有效分離。取樣品，分別以甲醇、70%甲醇、50%甲醇、30%甲醇為提取溶劑，依法測定。結(jié)果以后兩者為提取溶劑的提取效果相近，提取物雜質(zhì)較少，考慮到30%甲醇的提取物雜質(zhì)更少，故選用30%甲醇作提取溶劑。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學工業(yè)出版社，2005:59－60.