高效液相色譜法測定救爾心膠囊中原兒茶醛含量

付凌燕，李亞榮

(吉林省吉林市食品藥品檢驗所，吉林 吉林 132001)

救爾心膠囊由三七、川芎、紅花、丹參、澤瀉、刺五加6味中藥制成，具有活血通脈、化瘀生新的功效，臨床用于治療冠心病、心絞痛[1]，療效良好。處方中丹參具有祛瘀止痛、活血通經、清心除煩的作用，原兒茶醛是其主要有效成分，原質量標準中只有化學鑒別和薄層鑒別。為更好地控制制劑質量，筆者采用高效液相色譜法測定了救爾心膠囊中原兒茶醛的含量，現報道如下。

1 儀器與試藥

LC－2010 A型高效液相色譜儀，CLASS－VP色譜工作站。原兒茶醛對照品(供含量測定用，批號為110810－200506，中國藥品生物制品檢定所);救爾心膠囊(吉林百姓堂藥業有限公司，批號分別為 20080101，20080503，20080801，規格為 0.45 g/粒);甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱:Phenomenex C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇－1%醋酸溶液(12∶88);檢測波長:279 nm;流速:0.8 mL/min;柱溫:24℃。理論板數按原兒茶醛峰計應不低于2 000。

2.2 溶液制備

精密稱取經五氧化二磷減壓干燥12 h以上的原兒茶醛對照品適量，加甲醇制成0.099 9 g/L的對照品貯備液;再精密量取對照品貯備液適量，加甲醇制成9.990 μg/mL的對照品溶液。取裝量差異項下的樣品內容物約3.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定質量，加熱回流1 h，放冷，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，精密量取續濾液25 mL，蒸干，殘渣用水10 mL溶解，再用稀鹽酸調pH至2，乙醚提取4次，每次10 mL，合并乙醚提取液，揮干，殘渣用甲醇溶解，轉移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液[2]。取處方中除丹參外的其余藥材，按1/10處方量依法制成膠囊，再按供試品溶液制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

專屬性試驗:分別精密吸取供試品溶液、陰性對照品溶液和對照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖(圖1)。由圖1可見，供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上有相同保留時間的色譜峰，陰性對照品溶液無干擾，表明方法可行。

線性關系考察:精密吸取原兒茶醛對照品貯備液(質量濃度為 0.099 9 g/L)適量各5份，分別置50 mL量瓶中，用甲醇定容，配成質量濃度分別為 1.998，4.995，9.990，14.985，19.980 μg/mL 的溶液，搖勻，用 0.45 μm 微孔濾膜過濾。精密吸取續濾液各10 μL，注入液相色譜儀，測量峰面積。以峰面積(A)為縱坐標、質量濃度(C)為橫坐標繪制標準曲線，得原兒茶醛回歸方程 A=56 696.40 C － 1 888.48，r=1.000 0(n=5)。結果表明，原兒茶醛質量濃度在 1.998～19.980 μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

圖1 高效液相色譜圖

精密度試驗:精密吸取原兒茶醛對照品溶液(9.990 μg/mL)10 μL，重復進樣 5次。結果峰面積的 RSD為0.3%(n=5)，表明儀器精密度較好。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，于 0，4，8，12，24 h 時分別進樣測定。結果的 RSD為0.9%(n=5)，表明供試品溶液在24 h內穩定。

重復性試驗:取批號為20080101的樣品5份，依法制備供試品溶液并測定。結果原兒茶醛含量的 RSD為0.6%(n=5)，表明方法重復性較好。

加樣回收試驗:精密稱取已知含量的樣品(批號為20080101，原兒茶醛含量為8.596μg/mL，平均粒重0.4564 g/粒)適量，共6份，分別精密加入低、中、高3種不同質量濃度的原兒茶醛對照品溶液適量，按供試品溶液制備方法制備溶液，依法測定[3]。結果見表1。

表1 原兒茶醛加樣回收試驗(n=6)

2.4 樣品含量測定

分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定3批樣品的原兒茶醛峰面積，按外標法計算含量。結果批號為20080101，20080503，20080801的3批樣品，平均粒重分別為 0.456 4，0.452 1，0.453 3 g，平均含量分別為 22.49，21.38，20.93 μg/粒(n=5)。

3 討論

3批樣品中原兒茶醛含量測定結果為最高22.49 μg/粒，最低20.93 μg/粒，綜合考慮后確定限量為每粒含原兒茶醛不低于15 μg。試驗中比較了體積比均為12∶88的流動相，即甲醇－0.2 mol/L醋酸銨(用硫酸調pH至2.2)[4]和甲醇－1%醋酸溶液，結果表明，用甲醇－1%醋酸溶液(12∶88)時，色譜圖基線較穩，分離效果較好。

本方法準確、簡便，重現性及回收率均理想，可以作為該制劑的質量控制方法。

[1]WS3－B－1629－93，衛生部頒藥品標準(中藥成方制劑第八冊)[S].

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學工業出版社，2005:327－328.

[3]王維禮，付 利，程曉英，等.高效液相色譜法測定咽炎片中沒食子酸含量[J].中國藥業，2008，17(11):30－31.

[4]WS3－B－3766－98，衛生部頒藥品標準(中藥成方制劑第二十冊)[S].