清腦寧顆粒質量標準研究*

2010-06-01 12:22:22李福如顧海琳洪雪勤

中國藥業 2010年9期

李福如，繆婧，顧海琳，洪雪勤

（1.江蘇省南通市中醫院，江蘇南通 226001； 2.南通大學，江蘇南通 226001）

清腦寧顆粒是我院腦外科的科研制劑，由赤芍、當歸、川芎、陳皮等10味中藥組成，具有活血化瘀、鎮痛、安神的功效，對腦外傷后的頭痛、失眠及腦功能恢復有較好療效。根據處方藥物的理化性質，筆者采用薄層色譜（TLC）法對方中主藥（赤芍、當歸、川芎、陳皮）進行定性鑒別，采用高效液相色譜（HPLC）法對赤芍中芍藥苷進行含量測定，報道如下。

1 儀器與試藥

島津LC-20AD型高效液相色譜儀。層析用硅膠（青島海洋化工廠）；芍藥苷對照品（批號為110736-200731）、阿魏酸對照品（批號為110773-200611）、橙皮苷對照品（批號為110721-200613），均購自中國藥品生物制品檢定所；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 TLC鑒別

赤芍[1]109：取清腦寧顆粒1 g，加乙醇20 mL，振搖5 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇2 mL使溶解，作為供試品溶液；按處方制備不含赤芍的陰性樣品，同法制備陰性對照品溶液；取赤芍對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液；另取芍藥苷對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述4種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，置日光下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照品藥材溶液及對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的熒光斑點，而陰性對照品溶液色譜中則無此斑點（圖1 A）。

當歸[1]89：取清腦寧顆粒4 g，加1%碳酸氫鈉溶液50 mL，用力攪拌，濾過，濾液用稀鹽酸調節pH至2～3，用乙醚10 mL振搖提取，取上層乙醚液，置水浴揮干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液；按處方制備不含當歸的陰性樣品，同法制備陰性對照品溶液；取當歸對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液；另取阿魏酸對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述4種溶液各3 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯 -甲酸（4∶1∶0.1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以新配制的1%三氯化鐵和1%鐵氰化鉀（1∶1）的混合溶液，置日光下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的熒光斑點，而陰性對照品溶液色譜中則無此斑點（圖1 B）。

川芎[1]28：取當歸鑒別項下供試品溶液，作為供試品溶液；按處方制備不含川芎的陰性樣品，同法制備陰性對照品溶液；取川芎對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液；另取阿魏酸對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述4種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯-甲酸（4∶1∶0.1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以新配制的1%三氯化鐵和1%鐵氰化鉀（1∶1）的混合溶液，置日光下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的熒光斑點，而陰性對照品溶液色譜中則無此斑點（圖1 C）。

陳皮[1]132：取清腦寧顆粒 0.5 g，加甲醇 10 mL，振搖 5 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液；按處方制備不含陳皮的陰性樣品，同法制備陰性對照品溶液；取陳皮對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液；另取橙皮苷對照品，加甲醇制成飽和溶液，作為對照品溶液。吸取上述供試品溶液及陰性對照品溶液2～5 μL，對照藥材溶液及對照品溶液2 mL，分別點于用0.5%氫氧化鈉溶液制成的同一硅膠G薄層板上，先以醋酸乙酯-甲醇-水（100∶17∶13），再以甲苯 -醋酸乙酯 -甲酸 -水（20∶10∶1∶1）的上層液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試劑，熱風吹干后，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液及對照品溶液色譜相應位置上顯相同的熒光斑點，而陰性對照品溶液色譜中則無此斑點（圖1 D）。

圖1 薄層色譜圖

2.2 含量測定[1]109，[2-3]

2.2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：島津 C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇 -0.05 mol/L 磷酸二氫鉀（30∶70）；檢測波長：230 nm；柱溫：25℃；流速：1.0 mL/min；進樣量：50 μL。理論塔板數按芍藥苷計算應不低于3 000，方中其他成分對芍藥苷的含量測定無影響（圖2）。

圖2 高效液相色譜圖

2.2.2 溶液制備

精密稱取芍藥苷對照品12 mg，置100 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得質量濃度為120 μg/mL的對照品貯備液。精密量取對照品貯備液5 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液（每1 mL含芍藥苷60 μg）。取裝量差異項下樣品內容物研細，取8 g，精密稱定，加入甲醇50 mL，稱定質量，超聲處理50 min，放置室溫，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，棄去初濾液，即得供試品貯備液。精密量取供試品貯備液5 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。按處方制備不含赤芍的顆粒，精密稱取該空白樣品8 g，同法操作制備陰性對照品溶液。

2.2.3 方法學考察

線性關系考察：分別吸取對照品貯備液 1，2，3，5，8 mL，置 10 mL量瓶中，制得質量濃度為 12，24，36，60，96，120 μg/mL 的對照品溶液，分別進樣2次，每次50 μL，按2.2.1項下色譜條件測定，記錄峰面積，以對照品進樣量（X，μg）為橫坐標、峰面積平均值（Y）為縱坐標繪制標準曲線，得回歸方程 Y=13 924X-195.23，r2=0.999 8（n=6）。結果表明，芍藥苷質量濃度在 12～120 μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：取對照品溶液，重復進樣測定。結果峰面積的RSD 為 0.67% （n=6）。

穩定性試驗：取同一供試品溶液，于室溫放置 0，2，4，6，8 h 時進樣測定。結果峰面積的 RSD=0.65%（n=5），表明供試品溶液在8 h內穩定。

重現性試驗：精密稱取樣品8.0 g，依法制備供試品溶液并測定。結果含量的 RSD=1.60%（n=5）。

加樣回收試驗：精密稱取已知含量的樣品（批號為20080308，含量為7.4 mg/袋，平均裝量為10.152 1 g），精密加入0.1 mg的芍藥苷對照品，按供試品溶液制備方法制備溶液并進樣測定，計算回收率。結果見表1。