復方維生素E霜中熊果苷和維生素E的含量測定

林 彩，劉松青，賀紅軍，趙映蘭，吳玉晗

（第三軍醫大學西南醫院，重慶 400038）

復方維生素E霜主要成分為維生素E、熊果苷、硅油等，具有保持水分、營養肌膚、消除皮膚色素沉著、防曬、延緩衰老的作用。熊果苷（對-羥基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷）是源于綠色植物的天然活性物質，對皮膚有增白作用，可通過抑制黑色素細胞的酪氨酸酶活性而有效抑制黑色素的生成，其毒性、刺激性、致敏性等不良反應均較小，在護膚品方面具有廣泛的應用前景。筆者采用高效液相色譜（HPLC）法對方中維生素E和熊果苷的含量進行了測定，旨在為控制復方維生素E霜的質量提供可靠依據。

1 儀器與試藥

Waters 810型液相色譜儀，包括510泵、484可變波長紫外檢測器、7725-i進樣器、Baseline 810計算機控制及處理系統；Beckman DU-650型紫外分光光度計（美國Beckman公司）；Milli-Q Plus超純水器（美國 Waters Piuision of Millipore）；LN9527-25 型高速離心機 （德國 Abbott Laboratories Abbott Park）；BP221S型天平（德國Sartorius）。維生素E對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為10062-0007）；熊果苷對照品（南京青澤醫藥有限公司提供，批號為 070328）；復方維生素 E霜（自制，批號為 080428，080721，080910，081223，090303 ）；正己烷、醋酸乙酯、甲醇均為色譜純。

2 方法與結果

2.1 熊果苷含量測定

2.1.1 色譜條件

色譜柱：Machedey-Nagel Si柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相：正己烷 -醋酸乙酯 - 甲醇（30 ∶10 ∶9）；流速：1.2 mL/min；檢測波長：285 nm；柱溫：35 ℃；進樣量：10 μL。

2.1.2 溶液配制

取熊果苷對照品26 mg，精密稱定，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解，制成質量濃度為0.52 g/L的熊果苷對照品貯備液。取樣品0.5 g，精密稱定，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解，超聲處理10 min，放至室溫，定容，過濾，混勻，離心，作為供試品溶液。精密稱取不含熊果苷的復方維生素E霜空白基質0.5 g，置50 mL量瓶中，按供試品溶液的配制方法處理，即得陰性對照品溶液。

2.1.3 方法學考察

專屬性試驗：在擬訂的色譜條件下，取2.1.2項下3種溶液，依法進樣。結果供試品溶液中熊果苷與雜質峰分離較好，陰性對照無干擾（見圖1）。

線性關系考察：取熊果苷對照品貯備液，用甲醇稀釋，制得質量濃度分別為25.48，23.95，22.42，20.89，19.36，17.84，

14.78 μg/mL的對照品溶液，吸取上述溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。以熊果苷質量濃度對峰面積進行線性回歸，回歸方程為Y=3 653 014X+7 800.4，r=0.999 8（ n=7）。結果表明，熊果苷質量濃度在14.78～25.48 μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

圖1 熊果苷含量測定的高效液相色譜圖

精密度試驗：取 3 種不同質量濃度（25.48，20.89，14.78 μg/mL）的對照品溶液各3份，在同日內和不同日內進行分析，平行操作3次。結果日內精密度的 RSD分別為0.85%，0.16%，0.24%，日間精密度的 RSD分別為0.78%，0.51%，0.96%。

加樣回收試驗：精密稱取已知熊果苷含量的同一批號樣品0.458 5 g，置50 mL量瓶中，照供試品溶液制備方法制備溶液，分別取0.5 mL到3只EP管中，再分別取3種不同質量濃度的熊果苷對照品溶液各0.5 mL，置上述3只EP管中，混勻，離心，注入液相色譜儀，每個質量濃度重復進樣3次，測定峰面積，計算回收率。結果見表1。

表1 加樣回收試驗結果（n=9）

檢測限和定量限確定：采用信噪比法，將已知質量濃度的供試品溶液測出的信號與陰性對照品溶液測出的信號進行比較。結果以信噪比為2∶1時最低檢測限為0.19 μg/mL，以信噪比為10∶1時最低定量限為0.97 μg/mL。

2.1.4 樣品含量測定

精密稱取5個不同批次的樣品0.5 g，按供試品溶液的制備方法處理，注入高效液相色譜，測定峰面積，代入回歸方程計算。結果5批樣品中熊果苷的含量分別為 26.02，25.99，25.97，25.77，25.82 μg/mL（標示量為 25 μg/mL）。

2.2 維生素E含量測定

2.2.1 色譜條件

色譜柱：C18柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇；流速：1.5 mL/min；檢測波長：285 nm；柱溫：35 ℃；進樣量：10 μL。

2.2.2 溶液配制

取維生素E對照品20.6 mg，精密稱定，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解，制成質量濃度為0.412 g/L的維生素E對照品貯備液。取復方維生素E霜樣品0.5 g，精密稱定，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解，超聲處理10 min，放至室溫，定容，過濾，混勻，離心，作為供試品溶液。精密稱取不含維生素E的復方維生素E霜空白基質0.5 g，置50 mL量瓶中，按供試品溶液的配制方法處理，即得陰性對照品溶液。

2.2.3 方法學考察

專屬性試驗：在擬訂的色譜條件下，取2.2.2項下3種溶液，依法進樣。結果供試品溶液中維生素E與雜質峰分離較好，陰性對照無干擾（見圖2）。

線性關系考察：分別吸取維生素E對照品貯備液，加入甲醇，制得質量濃度分別為 14.42，16.48，18.54，20.6，22.66，24.72，26.78 μg/mL的對照品溶液。吸取上述溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。以維生素E的質量濃度對峰面積進行線性回歸，回歸方程為 Y=1 615 675 X-925.21，r=0.999 7（ n=7）。結果表明，維生素E質量濃度在14.42～26.78 μg/mL 范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：在同一日內和不同日內對低、中、高3種質 量 濃 度（14.42，20.60，26.78 μg/mL）的對照品溶液進行分析，平行操作3次。結果日內精密度的 RSD分別為0.38%，1.53%，0.43%，日間精密度 RSD分別為1.00%，0.78%，0.42%。

加樣回收試驗：取已知維生素E含量的同一批號樣品0.516 6 g，精密稱定，置50 mL量瓶中，照供試品溶液制備方法制備溶液，分別取0.5 mL，置3只EP管中，再分別取3種不同質量濃度的維生素E對照品溶液各0.5 mL，置上述EP管中，混勻，離心，注入液相色譜儀，每個質量濃度重復進樣3次，測定峰面積，計算回收率。結果見表1。

檢測限和定量限確定：采用信噪比法。信噪比為2∶1時最低檢測限為0.57 μg/mL，信噪比為 10∶1時最低定量限為4.53 μg/mL。

2.2.4 樣品含量測定

精密稱取3批樣品0.5 g，按供試品溶液的制備方法處理，注入高效液相色譜，測定峰面積，代入回歸方程計算。結果3批樣品中維生素 E 的含量分別為 19.17，19.04，19.07 μg/mL（標示量為20.66 μg/mL）。

3 討論

取熊果苷對照品適量，加甲醇溶解，在200～400 nm波長范圍掃描，結果熊果苷在波長285 nm波長處有最大吸收。取維生素E對照品適量，加甲醇溶解，在200～400 nm波長范圍掃描，結果維生素E在波長285 nm波長處有最大吸收。故選取285 nm為檢測波長。

預試驗中，擬用同一色譜條件同時測定復方維生素E霜中熊果苷和維生素E的含量，選用了不同流動相，雖然熊果苷與維生素E都能夠分離，但熊果苷的出峰時間都太短，峰形也不好，因此采用不同的色譜條件分別測定。將熊果苷的測定方法改為正相高效液相色譜法[1]，結果熊果苷的出峰時間較前法延后，峰形變好。而維生素E仍采用反相高效液相色譜法[2]，用純甲醇作流動相，維生素E的出峰時間和峰形都較好。

本品為霜劑，內含乳劑型基質，在處理樣品時操作需小心，避免乳化現象。

圖2 維生素E含量測定的高效液相色譜圖

[1]衛瑩芳，山森千彰，郭 力，等.高效液相色譜法測定六種川產鹿蹄草中熊果苷的含量[J]. 華西藥學雜志，2002，17（6）：435-436.

[2]陳 亮，何鳳慈，寧桂琴.高效液相色譜法測定維生素E霜中的維生素 E 的含量[J]. 中國藥業，2001，10（9）：42.