高效液相色譜法測(cè)定纈沙坦片的含量

廖洪娟，張 濤

（1.福建省龍巖市第二醫(yī)院藥劑科，福建 龍巖 364000； 2.江蘇華源藥業(yè)有限公司研發(fā)部，江蘇 泰州 214500）

纈沙坦是一種高選擇性Ⅰ型血管緊張素Ⅱ受體（AT1受體）拮抗劑，具有良好的抗高血壓作用，可單用或與其他抗高血壓藥物合用治療高血壓，適用于各種類型的輕、中度高血壓，尤其對(duì)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑不能耐受的患者，且無致咳的不良反應(yīng)[1-2]。目前國內(nèi)已有多家藥廠開始合成生產(chǎn)纈沙坦原料及其制劑產(chǎn)品[3-4]，但我國藥典尚未收錄，故無統(tǒng)一的含量測(cè)定方法。筆者參考有關(guān)文獻(xiàn)[5-8]，建立了測(cè)定纈沙坦片含量的高效液相色譜（HPLC）法，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

島津高效液相色譜系統(tǒng)（日本島津公司），包括LC-10ATVP型溶劑輸送泵，SPD-10AVP型紫外檢測(cè)器；N2000色譜軟件（浙江大學(xué)）；BS210S型、BP211D型電子分析天平（賽多利斯公司）；SB2000型超聲波振蕩器。纈沙坦對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)為100651-200401，含量為98.5%）；纈沙坦片（江蘇常州第四制藥廠，批號(hào)為 050301，050504，050702）；乙腈、磷酸二氫鉀、鹽酸、氫氧化鈉、30%雙氧水（色譜純），注射用水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Waters Symmetry C18柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：磷酸鹽緩沖液（0.01 mol/L磷酸二氫鉀，pH=3.5）-乙腈（20 ∶80），檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：40 ℃ ；進(jìn)樣量 20 μL。在此條件下，色譜圖見圖1。可知，纈沙坦峰與相鄰雜質(zhì)峰分離度大于2.0，理論塔板數(shù)按纈沙坦峰計(jì)算大于3 000，拖尾因子不超過1.2，表明該系統(tǒng)適用性良好。

2.2 溶液制備

精密稱取纈沙坦對(duì)照品50.0 mg，置 100 mL量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液；取樣品20片，精密稱定，研細(xì)，取約10.0 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加適量流動(dòng)相，超聲溶解3 min，冷卻，加流動(dòng)相稀釋至刻度，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。取不含纈沙坦的陰性樣品，同法制備陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

進(jìn)樣精密度試驗(yàn)：精密移取對(duì)照品貯備液2.0 mL至10 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液，依法連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果峰面積的 RSD為0.48%（n=6），表明進(jìn)樣精密度良好。

中間精密度試驗(yàn)：取批號(hào)為050301的樣品，委托其他技術(shù)人員照供試品溶液制備方法制備溶液，用美國Waters 600高效液相色譜系統(tǒng)依法測(cè)定含量。結(jié)果平均含量為99.59%，RSD為0.31%（n=6），表明該色譜條件精密度良好。

重現(xiàn)性試驗(yàn)：取批號(hào)為050301的樣品，依法制備供試品溶液并測(cè)定。結(jié)果平均含量為99.74%，RSD為0.33%（n=6）。

線性關(guān)系考察：分別精密移取對(duì)照品貯備液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL，置 10 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，分別取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積對(duì)溶液質(zhì)量濃度作線性回歸，得回歸方程 A=78 145 653 C+254 359，r=0.999 9（n=6）。結(jié)果表明，纈沙坦進(jìn)樣質(zhì)量濃度在0.05～0.3 g/L范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

定量限與檢測(cè)限確定：取線性關(guān)系考察項(xiàng)下質(zhì)量濃度為50μg/mL的對(duì)照品溶液，繼續(xù)稀釋進(jìn)樣。質(zhì)量濃度為50 ng/mL時(shí)，其基線信噪比約為10∶1，故定量限約為50 ng/mL；繼續(xù)稀釋進(jìn)樣，質(zhì)量濃度為20 ng/mL時(shí)基線信噪比約為3∶1，故檢測(cè)限約為20 ng/mL。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別于 0，1，2，4，6，8 h 時(shí)依法測(cè)定。結(jié)果峰面積的 RSD為0.25%，雜質(zhì)峰總峰面積的 RSD為0.98%（n=6），表明供試品溶液在8 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的樣品，分別按80%，100%，120%的比例精密加入纈沙坦對(duì)照品適量，按供試品溶液制備方法制備溶液，依法測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

2.4 樣品含量測(cè)定

圖1 高效液相色譜圖

表1 纈沙坦加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

精密稱取樣品適量（約相當(dāng)于纈沙坦10 mg），置100 mL量瓶中，加入適量流動(dòng)相，超聲溶解3 min，冷卻并稀釋至刻度，作為供試品溶液；另取纈沙坦對(duì)照品適量，同法制成每1 mL含10 μg纈沙坦的溶液，作為對(duì)照品溶液。各取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)為050301，050504，050702的樣品中纈沙坦的標(biāo)示百分含量分別為99.76%，99.28%，99.61%。

3 討論

有關(guān)文獻(xiàn)的含量測(cè)定方法中，纈沙坦的HPLC法檢測(cè)波長(zhǎng)為270 nm，而其藥品試行標(biāo)準(zhǔn)中檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm。在試驗(yàn)過程中，取樣品含量測(cè)定項(xiàng)下對(duì)照品溶液，照分光光度法，于200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)測(cè)定，結(jié)果在230，250，270nm波長(zhǎng)處均有吸收，但230nm波長(zhǎng)處最大，故檢測(cè)波長(zhǎng)定為230 nm。

在不改變流動(dòng)相組成成分的條件下，流速加大，主峰的出峰時(shí)間會(huì)提前；減少流速，主峰的出峰時(shí)間會(huì)延后，但主峰和其他雜質(zhì)峰的分離度、理論塔板數(shù)、拖尾因子均符合規(guī)定。

換用其他型號(hào)的C18柱，如Waters Symmetry C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），Waters Novpak C18柱（150 mm ×3.9 mm，5 μm），Kromasil C18柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm），在流動(dòng)相無改變的情況下，出峰時(shí)間僅與色譜柱的長(zhǎng)度有關(guān)，長(zhǎng)柱的出峰時(shí)間稍長(zhǎng)，短柱出峰時(shí)間略快，且主峰和其他雜質(zhì)峰的分離度、理論塔板數(shù)、拖尾因子均符合規(guī)定。結(jié)果表明，本方法的系統(tǒng)耐用性比較穩(wěn)定。

[1]楊寶峰.藥理學(xué)[M].第6版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2006：228-229.

[2]祝世法，顧 亮，王 雁，等.新型血管緊張素受體拮抗劑——纈沙坦[J]. 心腦血管病防治，2001（02）：37-39.

[3]曾運(yùn)才 .纈沙坦的合成工藝研究[J].膠體與聚合物，2003，21（3）：43-44.

[4]賈慶忠，馬桂林，黎文志，等.抗高血壓藥纈沙坦的合成[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2001，32（9）:385.

[5]韓 俊，馬寶玉，李 娟.纈沙坦分散片的制備及含量測(cè)定[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2007，18（1）：145-146.

[6]WS-455（X-391）-2000，國家食品藥品監(jiān)督管理局國家藥品試行標(biāo)準(zhǔn)·纈沙坦[S].

[7]WS1-（X-2339）-2003Z，國家食品藥品監(jiān)督管理局國家藥品試行標(biāo)準(zhǔn)·纈沙坦[S].

[8]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（二部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：附錄 172，附錄 182.