復方鹿花盤膠囊對乳腺增生小鼠子宮、卵巢重量影響及作用機制的研究

趙文靜，趙向上，旺建偉，剛宏林，姜虹，王艷宏，張曉琳

(1.黑龍江中醫藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040;2.哈爾濱市第二醫院，黑龍江 哈爾濱 150056;3.哈爾濱市食品藥品監督管理局，黑龍江 哈爾濱 150028)

乳腺增生病(Hyperplasia of Mammary Gland，HMG)又稱乳腺結構不良，是女性常見、多發疾病，病變是以乳腺固有組織增生為主的非炎癥性、非腫瘤性病變，主要包括乳腺囊性增生病、小葉增生、腺病、纖維性病［1］。近年來其癌變率有逐年升高的趨勢。子宮、卵巢是調節性激素的重要器官，它們重量的輕微變化會影響性激素對乳房刺激的敏感性及持續的時間，而FSH含量的變化是子宮、卵巢的功能正常與否的客觀指標。鹿花盤是梅花鹿 (Cerrus nippon Temminck)每年春季長新茸時自然脫落的部分，《神農本草經》認為，該品有溫補肝腎、活血消腫之功效，能治療陰證瘡瘍，乳癰初起，瘀血腫痛等疾患［2］。本實驗應用鹿花盤與其他中藥配伍，制成復方鹿花盤膠囊，觀察其對乳腺增生小鼠子宮、卵巢重量及重量指數和對FSH含量的影響，進而判斷乳腺增生的療效及預后。

1 實驗材料

1.1 藥材及制劑

中藥鹿花盤取材于黑龍江省祿寶益生鹿業開發有限公司，柴胡、白芍、三棱、莪術、浙貝母、淫羊藿等中藥由黑龍江中醫藥大學附屬第一醫院提供。復方鹿花盤膠囊濃縮后用蒸餾水配制成濃度分別為217g·L－1、434g·L－1、868g·L－1的低、中、高三種溶液備用。

1.2 實驗動物

清潔級昆明種小白鼠，體重18～22g，雌性，由黑龍江中醫藥大學實驗動物中心提供，動物合格證號:黑動字第09－2－2號。

1.3 藥品及試劑

苯甲酸雌二醇注射液(Estradiol Benzoate Injection，上海通用藥業股份有限公司);促卵泡生成素(FSH)放免試劑盒(北京市福瑞生物工程公司);他莫昔芬(Tamoxifen，上海華聯制藥有限公司)。

1.4 實驗儀器

電子天平(梅特勒－托利多儀器(上海)有限公司);低速離心機(科大創新股份有限公司中佳分公司)。

2 實驗方法

2.1 模型制備、分組與灌胃劑量

實驗前禁食不禁水16h，空白對照組10只常規飼養，不施加任何藥物，其他小鼠在同等條件下，腹腔注射苯甲酸雌二醇，每2日1次，每次0.5mg·kg－1，共注射15次，在注射苯甲酸雌二醇后第4d小白鼠均出現不同程度的乳腺隆起外觀。取模型制備成功小鼠，按體重隨機分模型組、他莫昔芬組、鹿低劑量組、鹿中劑量組、鹿高劑量組五組，每組各10只。于造模第5d開始分別用藥灌胃治療，空白對照組不用任何藥物，模型組生理鹽水 15mL·kg－1，他莫昔芬組3.9mg·kg－1，復方鹿花盤膠囊低、中、高劑量組分別是3.25、6.5、13g·kg－1，連續灌胃 30d［3］。

2.2 標本取材

連續灌胃30d后，分離子宮、卵巢，剔除周圍的脂肪組織等，迅速稱重，測定子宮、卵巢指數［4，5］。

將各組小鼠稱重后摘除眼球各取血3mL，室溫靜置2h后于3000r·min－1離心3min，吸取上部取血清，－20℃保存待測。依照試劑盒說明進行。采用放免分析法測定血清中FSH的含量［6］。

2.3 統計學處理

采用SPSS 12.0軟件，實驗結果數據采用平均值±標準差(±s)表示，組間差異顯著性用t檢驗比較。

3 結果

3.1 復方鹿花盤膠囊對乳腺增生小鼠FSH含量的影響

實驗結果如表1所示，他莫昔芬、鹿中、高劑量組均能升高模型組FSH含量，且有非常顯著性差異(P<0.01)，鹿低劑量組與模型組無統計學意義，且鹿花盤三劑量組彼此無顯著性差別。結果見表1。

表1 復方鹿花盤膠囊對乳腺增生小鼠FSH含量的影響(±s)

表1 復方鹿花盤膠囊對乳腺增生小鼠FSH含量的影響(±s)

注:與模型組相比較，**P<0.01;與空白對照組比較，▲▲P<0.01。

3.48±0.29模型組 15mL 2.57±0.31▲▲他莫昔芬組 3.9mg 3.37±0.22**鹿低劑量組 3.25 2.90±0.48鹿中劑量組 6.5 3.22±0.35**鹿高劑量組 13 3.36±0.36空白對照組－**

3.2 復方鹿花盤膠囊對乳腺增生小鼠子宮、卵巢的影響

實驗結果如表2所示，模型組與空白對照組比較，子宮重量增加，且有顯著性差異(P<0.05)，鹿高劑量組能明顯降低模型組子宮重量，兩組有顯著性差異(P<0.05)，并且鹿高劑量組與空白對照組子宮重量實際數據非常接近;同時，西藥他莫昔芬組與空白對照組比較，子宮重量低于空白對照組，且有顯著性差異(P<0.05)，從實際數據也反映出西藥組過度降低乳腺增生小鼠子宮重量(P<0.05)，導致低于正常子宮的重量范圍;在對乳腺增生小鼠卵巢方面的影響實驗中，鹿低、中、高劑量組與模型組均無顯著性差別，在這點上，鹿低、中、高三劑量組均不如西藥他莫昔芬組作用更明顯。結果見表2。

表2 復方鹿花盤膠囊對乳腺增生小鼠子宮卵巢的影響(±s，n=10)

表2 復方鹿花盤膠囊對乳腺增生小鼠子宮卵巢的影響(±s，n=10)

注:與模型組相比較，*P<0.05，**P<0.01;與空白對照組比較，▲P<0.05。

空白對照組－ 118.51±43.78 0.372±0.119 20.63±7.00 0.067±0.026模型組 15mL 166.39±41.08▲ 0.562±0.127▲ 20.05±8.380 069±0.032他莫昔芬組 3.9mg 78.16±25.55▲** 0.268±0.072▲** 12.62±2.73* 0.044±0.011*鹿低劑量組 3.25 125.94±51.52 0.425±0.180 14.52±5.68 0.049±0.021鹿中劑量組 6.5 161.43±186.35 0.563±0.653 16.34±4.23 0.058±0.014鹿高劑量組 13 118.94±29.26* 0.389±0.090*14.30±6.24 0.047±0.021

4 討論

乳房為性激素作用的靶器官，其生長發育到衰退均受到下丘腦－垂體－卵巢軸的調控，子宮內膜也受該系統的控制，所以卵巢、子宮、乳房三者在發生乳腺增生病的時候關系最為密切、直接。而子宮、卵巢起著調節和平衡雌、孕激素的重要作用，它們在形態重量上的輕微變化常常會引起女性性激素水平明顯的起落，一旦發生乳腺增生病，往往伴有子宮、卵巢在形態學上的異常變化，由此也可以初步推斷到其調節內分泌的功能也會有相應的失調;婦女的月經周期基本可分為卵泡期、黃體期，這兩個期性激素水平會有其周期性的變化，而FSH含量變化可以影響及反應子宮、卵巢調節性激素的功能，進而間接影響性激素對乳房刺激的強度和持續的時間。

本課題是通過復方鹿花盤膠囊的不同劑量組和西藥對照組相比較，來觀察該膠囊對實驗性乳腺增生小鼠子宮、卵巢重量的變化，結果是鹿高劑量組能明顯降低乳腺增生模型組子宮重量，差異性顯著，且實際數據接近空白對照組子宮重量，提示該劑量有很好的恢復乳腺增生小鼠子宮形態作用，同時也優于西藥組對子宮重量過度降低的作用，而鹿低、中劑量組在這方面與模型組比較沒有統計學意義;在對卵巢重量影響方面，鹿三個劑量組弱于西藥對照組;在對于FSH含量影響方面，鹿中、高劑量組療效較顯著。

由此可以推斷，復方鹿花盤膠囊一定劑量可以直接作用于子宮，恢復實驗性乳腺增生小鼠子宮重量，并通過調節FSH含量間接的促進子宮、卵巢功能，加強對下丘腦－垂體－卵巢軸的調控，從而平衡性激素的含量而使乳腺組織受到性激素良性、周期性的合理刺激，最終達到治療乳腺增生的目的。

［1］蔡國良，王友和.對乳腺增生的再認識［J］.陜西中醫學院學報，2002，25(1):24－25.

［2］王振玉.鹿花盤注射液研究［J］.生化藥物雜志，1987(2):10－12.

［3］李建國，朱建宙，張玉芝，等.“藥味乳康罩”抑制小白鼠乳腺小葉增生病理組織學觀察研究［J］.河南中醫，1993，13(3):111－112.

［4］張少卓，柳占彪.乳樂寧對小鼠雌激素活性的影響［J］.內蒙古中醫藥，2004，23(4):41－42.

［5］鄒世潔，陳小野，蔣小麗，等.雌激素對大鼠性腺乳腺影響觀察［J］.中醫藥學刊，2006，24(1):52－54.

［6］戴麗軍，廖軍，黃月玲，等.Fmr1基因敲除小鼠血清雌性激素含量的比較研究［J］.中國比較醫學雜志，2006，16(8):459－462.