大孔吸附樹脂分離白鮮皮抗炎有效組分的實驗研究

艾丹，楊桂明

(黑龍江中醫藥大學佳木斯學院，黑龍江 佳木斯 154007)

白鮮皮為蕓香科白鮮屬植物白鮮(Dictamnus dasycarpus Turcz.)的根皮，具有清熱燥濕、祛風解毒，止癢的功效?，F代藥理學研究證明，白鮮皮具有抗氧化、抗病毒、抗細菌、抗炎、抗腫瘤等多種活性。本課題組前期研究發現，白鮮皮的95%乙醇提取物具有顯著的抗炎作用。本實驗中采用大孔吸附樹脂柱色譜法對白鮮皮的95%乙醇提取物進一步分離，考察不同洗脫物對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響，探討白鮮皮抗炎的有效組分。

1 材料與儀器

1.1 動物

SPF級KM小鼠70只，體重(18～22)g，♂，由黑龍江中醫藥大學實驗動物中心提供，合格證號SCXK黑2008004，適應飼養3d后供試。

1.2 藥物

藥材:白鮮皮購于河北安國藥材市場，經黑龍江中醫藥大學中藥學教研室陳效忠副教授鑒定為蕓香科植物白鮮(Dictamnus dasycarpus Turcz.)的干燥根皮，粉碎成粗粉，備用。

受試藥物:水洗脫物、20%乙醇洗脫物、50%乙醇洗脫物、70%乙醇洗脫物、95%乙醇洗脫物，供藥效篩選用。

陽性對照藥物:吲哚美辛腸溶片，臨汾寶珠制藥有限公司，批號:090201。

空白對照藥物:生理鹽水，浙江濟民制藥有限公司，批號:08122403。

1.3 試劑及儀器

二甲苯(分析純，沈陽市新西試劑廠，批號:20061110);乙醇(分析純，沈陽市東光試劑廠，批號:20090429);氫氧化鈉(分析純，天津市恒光化學試劑制造有限公司，批號:20081218);鹽酸(分析純，固安縣北方化學工業公司，批號:081216);水為蒸餾水;AB－8型大孔吸附樹脂(河北省滄州市寶恩化工有限公司)。

恒溫水浴鍋(天津市泰斯特儀器有限公司，型號:DK－98－1);真空干燥箱(上海齊欣科學儀器有限公司，型號:DZF－6020);旋轉蒸發器(上海亞榮生化儀器廠，型號:RE5220);旋轉蒸發儀(上海申勝生物技術有限公司，型號:R－201);電子分析天平(德國賽多利斯集團，型號:ALC－210.4)。

2 方法

2.1 樣品溶液制備

稱取白鮮皮粗粉800g，加入4倍量的95%乙醇，于恒溫水浴鍋(100℃)中回流提取2h，提取液經濾過后，減壓濃縮揮去乙醇，放入真空干燥箱中除去殘留溶劑，干燥后的樣品加蒸餾水稀釋至0.5g·mL－1，備用。

2.2 大孔吸附樹脂預處理

稱取一定量的AB－8型大孔吸附樹脂，用水漂洗去白色混濁物，加入95%乙醇泡24h使之充分溶脹，濕法裝柱，用95%乙醇洗柱至流出液與水混合(1∶3)不呈白色混濁為止，以蒸餾水洗柱至流出液無醇味，然后用4%NaOH溶液洗至呈堿性，浸泡6h，以蒸餾水洗至中性，再用4%HCl溶液洗至呈酸性，浸泡6h，以蒸餾水洗至中性，備用。

2.3 吸附洗脫

樣品溶液過預先裝好的大孔吸附樹脂柱進行吸附。依次用水、20%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、95%乙醇進行洗脫，分別收集洗脫液，減壓濃縮回收溶劑，加蒸餾水稀釋至濃度為4mg·mL－1，備用。

2.4 陽性對照藥物制備方法

吲哚美辛腸溶片，每片25mg，實驗時用蒸餾水配置成5mg·mL－1的溶液，備用。

2.5 抗炎實驗

取KM小鼠70只，隨機分成7組:生理鹽水組，吲哚美辛組，水洗脫物組，20%乙醇洗脫物組，50%乙醇洗脫物組，70%乙醇洗脫物組和95%乙醇洗脫物組。分別灌胃給白鮮皮不同洗脫物制劑和對照藥物(詳見表1)，連續7d。末次給藥1h后，于小鼠右耳兩側均勻涂布二甲苯0.05mL·只－1，左耳不涂作為對照，致炎1h后脫頸處死動物，沿耳廓基線剪下兩耳，用直徑9mm打孔器打下雙耳同一部位圓片，用電子分析天平精密稱重，右耳片重量減去左耳片的重量即為腫脹度，抑制率(%)=(模型組腫脹度－給藥組腫脹度)/模型組腫脹度×100%。

2.6 統計學處理

3 結果

結果如表1所示，與生理鹽水組比較，95%乙醇洗脫物能明顯減輕二甲苯致炎小鼠的耳廓腫脹程度(P<0.01)，提示95%乙醇洗脫物均有較好的抗炎作用;與吲哚美辛組比較，95%乙醇洗脫物抗炎作用未見明顯差異(P>0.05)，作用與吲哚美辛相似;與生理鹽水組比較，20%乙醇洗脫物，50%乙醇洗脫物，70%乙醇洗脫物不具有抗炎作用(P>0.05)。

表1 白鮮皮不同洗脫物對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響(±s)

表1 白鮮皮不同洗脫物對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響(±s)

注:與空白對照組比較，*P<0.01。

組別 動物數(只)劑量(g·kg－1)腫脹程度(mg)抑制率(%)17.08±1.97－吲哚美辛組 10 10 7.40±1.79* 56.67水洗脫物組 10 50 16.38±1.95 4.16 20%乙醇洗脫物組 10 50 16.11±1.87 5.68 50%乙醇洗脫物組 10 50 15.96±1.76 6.56 70%乙醇洗脫物組 10 50 15.78±1.81 7.67 95%乙醇洗脫物組 10 50 8.81±1.92*生理鹽水組 10 10mL·kg－1 48.42

4 討論

4.1 中藥提取液中有效成分的精制方法有醇沉去雜法、有機溶劑萃取法、大孔吸附樹脂吸附法、聚酰胺柱分離法等。其中大孔吸附樹脂吸附法操作簡便、無污染、成本較低，較其它方法所得提取物體積小、不吸潮、易制成各種劑型。本研究中采用AB－8型大孔吸附樹脂對白鮮皮的醇提物進行分離。AB－8型大孔吸附樹脂為聚苯乙烯型非極性吸附樹脂，該樹脂的比表面積和孔徑較大，適合于吸附具有一定疏水性的中藥成分，吸附量較大，洗脫容易，吸附動力學性能良好［1］。對熱、有機溶劑和一般使用條件下的酸、堿穩定，使用壽命較長。

4.2 非特異性炎癥是具有血管系統的活體組織對局部損傷的反應。在炎癥的早期，某些炎癥介質刺激血管，使血管擴張，血管內皮間隙擴大，血管壁通透性增強，血管內的液體、蛋白質和白細胞等滲出到組織間隙，隨著滲出的增加，造成組織腫脹，炎癥滲出組織腫脹是急性炎癥病理組織學的主要特征。本研究采用二甲苯作為致炎因子，引起急性炎癥反應，通過測定小鼠耳廓的腫脹程度，反應出白鮮皮不同洗脫物的抗炎效果。實驗研究結果表明，95%乙醇洗脫物能抑制二甲苯引起的小鼠耳廓腫脹，提示其具有顯著的抗炎作用。

［1］景怡，景榮琴，任遠，等.AB－8大孔吸附樹脂分離純化玉米須中總黃酮的研究［J］.中醫藥學報，2010，38(1):75－77.