157例深部真菌感染和藥敏結果分析

馬鳳蓮,楊鐵生

(北京大學人民醫院檢驗科,北京100044)

近年來,隨著廣譜抗生素、免疫抑制劑的應用以及器官移植和各種侵入性診療技術的開展和一些嚴重疾病,如糖尿病、腫瘤、艾滋病等發病率的不斷升高,條件治病性真菌感染日益增多[1]。加強深部真菌感染的控制及耐藥檢測,有效防治深部真菌感染及提高治愈率已成為目前醫學領域中的重要問題。為了解我院深部真菌的分布及耐藥情況,本文對我院2009年上半年分離的157例深部真菌進行分析。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1標本來源 我院2009年1月至6月住院患者發生深部真菌感染的真菌菌侏157株(去除重復病例標本),痰96例占61.1%,尿32例占20.4%,血9例占5.7%,咽拭子7例占4.4%,便標本3例點1.8%,分泌物2例占1.3%,其它8例占5.0%。

1.1.2分離培養基及MIC藥敏板 分離培養基為CHROM Magar念珠菌顯色培養基,鄭州博賽公司生產。MIC藥敏板為梅里埃的ATBTMFUNGUS3試條進行藥敏試驗。

1.1.3儀器 VITEK-TWO全自動鑒定系統,溫盤、35℃孵育箱。

1.2方法

1.2.1培養及鑒定 標本接種于CHRO Magar培養基,35℃培養24-48 h,觀察生長情況:用VITEKTWO全自動鑒定系統。

1.2.2菌液制備 挑取培養基上的若干純菌落,用無菌生理鹽水稀釋制備成混懸液,震蕩搖勻,用光電比濁儀將濃度調至2.0麥氏單位。

1.2.3接種 將制備好的菌懸液用無菌微量移液器及20 μ l加入ATB F2培養基中,反復混勻后,用200 μ l無菌可調移液器在每個反應孔內加入 135 μ l含有菌液的ATB F2培養基(已經預先取出放在室溫下恢復至室溫的反應試條中)。最終反應濃度為3.0×104酵母菌/ml或4×103酵母菌/反應孔。

1.2.4孵育 接種完畢后,將反應板置于墊有濕紗布的瓷方盤內,然后將瓷方盤置于35℃孵育箱內孵育24-48小時觀察結果。

1.2.5結果判斷 除新型隱球菌需48±6小時觀察結果外,其余酵母菌在24±2小時觀察結果,以不含藥生長對照孔明顯生長為標準。觀察結果前應將96孔振蕩搖勻,然后觀察比較。a.兩性霉素BMIC值為生長被完全抑制的藥物最低濃度。b.氟康唑、伊曲康唑和伏立康唑可能會出現拖尾現象,判定時以不含藥生長對照孔為準,將不生長或生長不明顯或明顯低于生長對照孔的孔的藥物濃度定為MIC值。c.觀察結果時,將藥敏試條底部對準日光燈,肉眼觀察真菌生長情況。

2 結果

2.1在157株深部真菌中,白色念珠菌101株,占64.3%;光滑念珠菌42株,占26.8%;熱帶念珠菌 6株,占3.8%,近平滑念珠菌5株,占3.2%;克柔念珠菌3株,占1.9%。157例深部真菌中,未培養出新型隱球菌。

2.2157例深部真菌的抗真菌藥物體外MIC檢測結果見表1。

表1 157株深部真菌的抗真菌藥物體外MIC檢測結果

2.3除光滑念珠菌及克柔念菌外,真菌(共112株)對各藥的敏感率分別為:5-氟胞嘧啶為95.5%;伏立康唑為77.7%;伊曲康唑為75%;氟康唑為78.6%。對于光滑念珠菌及克柔念珠菌,除氟康唑外的敏感率分別為:5-氟胞嘧啶 為91.1%;伏立康唑為73.3%;伊曲康唑為22.2%。

2.4對伏立康唑、伊曲康唑及氟康唑全耐藥的菌株總數為16株,占總數的10.2%。

3 討論

3.1在157例深部真菌中,白色念珠菌最多,其次為光滑念珠菌,而熱帶念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌相對較少。這與國內其它文獻報道的主要真菌感染類型相同[2,3]。

3.2由表1可見,5-氟胞嘧啶、伏立康唑、伊曲康唑、氟康唑均對念珠菌有不同程度的殺滅作用,但臨床應用較廣泛的氟康唑耐藥率已達40.1%,可能因為氟康唑對光滑念珠菌、克柔念珠菌存在天然耐藥現象[4];伊曲康唑耐藥率次之,其耐藥率為31.8%,其耐藥率與文獻報道基本相符[5]。在本次調查中發現,5-氟胞嘧啶是敏感率最高的抗真菌藥,其次為伏立康唑較為敏感。兩性霉素B雖然CLSI沒有給判斷標準,但本院157例深部真菌中所檢測的MIC值均為最低藥物濃度(0.5 μ g/ml),故兩性霉素B對所有157例念珠菌均敏感,應為目前本院抗真菌治療的首選藥物[6]。但由于兩性霉素B的毒副作用較大,患者不能耐愛,用藥過程須監護,用藥前后須檢測肝腎功能,因此在臨床實際工作中往往不首選兩性霉素B,5-氟胞嘧啶雖然后敏試驗中顯示敏感率較高,但由于其單獨使用時真菌易對其產生耐藥性,在所有指南中不作為首選抗真菌藥而建議與其它藥物聯合使用。伏立康唑無文化從藥物敏感性方面還是副作用或耐藥性方面,為本院較好的抗真菌藥物。

3.3由于光滑念珠菌及克柔念菌對氟康唑天然耐藥,因此CLSI文件中建議無論藥敏試驗結果顯示是否耐藥或中介,均報告為耐藥,但在表1中未排除光滑念珠菌及克柔念珠菌,因此氟康唑耐藥率顯示較高(表1中的敏感及中介數據中同時也包含了對氟康唑敏感或中介的數據)。將檢測數據中的光滑念珠菌及克柔珠菌不作為統計數據重新計算,除5-氟胞嘧啶外其余三種唑類藥物敏感率基本一致(75-78.6%);對于光滑念珠菌及克柔珠菌,除天然耐藥的氟康唑外,其它兩種唑類藥物中伊曲康唑敏感率僅為22.2%,而伏立康唑敏感率則為73.3%,顯示出伏立康唑對光滑念珠菌及克柔念珠菌的強大抗菌作用。在157株分離的真菌中,對三種唑類全耐藥的菌株占10.2%,顯示出目前念珠菌對唑類耐藥的嚴重現獎,揭示臨床必須及時進行真菌培養和藥敏試驗,以指導臨床合理使用抗真菌藥物。

[1]楊繼勇,趙 慧,張軍民.酵母菌引起學問感染的病原學特征[J].中華醫院感染學雜志,2003,13(3):284.

[2]彭敬紅,趙均秀,周有利,等.136株念珠菌的臨床頒及耐藥性分析[J].中華醫院感染學雜志,2002,12(11):863.

[3]劉 華,周中華,喻 化,等.260株念珠菌分離鑒定及耐藥性分析[J].中華醫院感染學雜志,2004,11(3):347.

[4]姚正國,黃憲章,范秋蓮,等.酵母菌對氟康唑的藥物物敏感染試驗分析[J].中華醫院感染學雜志,2004,14(4):44.

[5]陳諧捷,蔡衛平,等.HIV/AIDS合并深部真菌感染的調查與研究.中國艾滋病性病[J].2003,9(4):205.

[6]戴自英.臨床抗菌藥物學[M].第2版,上海:上海科學技術出版社,1999,246-253.