豬瘟脾淋苗、豬O型口蹄疫和豬藍(lán)耳病滅活苗兩兩聯(lián)合應(yīng)用的免疫效果觀察

文萍萍，陳代平，李金海，鄧永強(qiáng)

（四川省動物疫病預(yù)防控制中心，四川 成都 610041）

1 材料和方法

1.1 試驗動物 在較潔凈的豬場，選擇約180頭35～37日齡健康的斷奶仔豬，組間豬的大小基本一致。人工投料，豬自由采食，自由飲水。

1.2 試驗疫苗 豬O型口蹄疫滅活疫苗（Ⅱ），批號0703002；豬瘟活疫苗（脾淋苗），批號0709085；高致病性豬藍(lán)耳病滅活疫苗，批號0710091。按疫苗說明書的條件進(jìn)行保存、運輸，使用時均在有效期內(nèi)。

1.3 診斷試劑 口蹄疫O型液相阻斷ELISA抗體檢測試劑盒，由蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn)，批號2007122401；豬瘟ELISA抗體檢測試劑盒，IDEXX公司產(chǎn)品，批號433220-P361；豬藍(lán)耳病抗體ELISA試劑盒，INGENASA公司產(chǎn)品，批號2331106。

1.4 試驗方案 將試驗豬分為9個試驗組，免疫注射時給所有豬佩戴牲畜耳標(biāo)。具體方案詳見表1。

表1 試驗分組方案

1.5 免疫反應(yīng)的臨床觀察 在接種疫苗后2h測量體溫一次，4h測量第二次體溫，同時觀察注射局部的反應(yīng)和全身反應(yīng)。

1.6 采血方案 于接種后0、4、14、21 d和28 d前腔靜脈采血，1～1.5mL/頭，血清析出后-20℃凍存，統(tǒng)一檢測。

1.7 檢測方法及結(jié)果判定 豬瘟ELISA抗體檢測試劑盒的檢測原理為阻斷ELISA；O型口蹄疫檢測試劑盒為液相阻斷ELISA抗體；豬藍(lán)耳病抗體ELISA試劑盒的檢測原理為間接ELISA。檢測時按試劑盒操作說明書進(jìn)行。

1.8 數(shù)據(jù)分析 用SPSS13.0軟件進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1免疫反應(yīng)的觀察 單獨免疫豬瘟疫苗后，豬體溫、食欲正常，未見免疫副反應(yīng)產(chǎn)生。單獨免疫豬O型口蹄疫滅活疫苗（Ⅱ）或高致病性豬藍(lán)耳病滅活疫苗后，體溫升高0.5～1℃，精神狀態(tài)稍差，但很快恢復(fù)，無不食和精神不振的情況，注射部位無紅腫變化，總體免疫副反應(yīng)較小。豬瘟與口蹄疫或高致病性豬藍(lán)耳病疫苗同時分部位免疫，豬的免疫副反應(yīng)與單獨注射口蹄疫或高致病性豬藍(lán)耳病疫苗的情況基本一致。口蹄疫和高致病性豬藍(lán)耳病疫苗同時分部位免疫后，豬體溫升高1～2℃，精神狀態(tài)稍差，1d左右恢復(fù)，無不食和精神不振的情況，注射局部無紅腫變化，總體上免疫副反應(yīng)較單獨免疫注射時明顯。

2.2 免疫抗體檢測結(jié)果

2.2.1 豬口蹄疫抗體檢測結(jié)果與分析 用液相阻斷ELISA 檢測 1、4、6、7、8 組豬在接種后 0、4、14、21 d 和28 d的口蹄疫抗體效價，結(jié)果見表2、表3。從表2可見，1組免疫后28 d，平均抗體效價可達(dá)71.77，4組與1組相比差異不大，而6組平均抗體效價大大低于1組。從表3可見，28 d時I組的免疫合格率可達(dá)66.67%，4組免疫合格率為50%，6組免疫合格率為0。7、8組母源抗體比1組高，相比1、4組產(chǎn)生的抗體效價要低一些。從1、4組看，豬瘟和口蹄疫同時分部位注射對口蹄疫的免疫效果有一定的影響，但差異不顯著（P＞0.05），總體來說是可以接受的；豬藍(lán)耳病和口蹄疫同時分部位免疫對口蹄疫的免疫效果影響很大（P＜0.01）。比較 7、8組和 1、4組可見，母源抗體對口蹄疫的免疫效果影響較大。

表2 口蹄疫O型抗體液相阻斷ELISA的檢測結(jié)果（幾何平均值） %

表3 口蹄疫O型抗體液相阻斷ELISA檢測的免疫合格數(shù)

表4 豬瘟抗體檢測結(jié)果（幾何平均值） %

表5 豬瘟抗體檢測結(jié)果（陽性數(shù)）

2.2.2 豬瘟抗體檢測結(jié)果與分析 用ELISA檢測2、4、5、7、9 組的豬瘟抗體水平，結(jié)果見表 4、5。從 2、4 組看，豬瘟和口蹄疫同時分部位免疫對豬瘟的免疫效果影響不大（P＞0.05）。從2、5組看，豬藍(lán)耳病和豬瘟同時分部位免疫對豬瘟的免疫有一定的影響。從2、7、9組看，在豬瘟母源抗體較高時免疫，對豬瘟抗體的影響較大。

2.2.3 豬藍(lán)耳病抗體檢測結(jié)果與分析 用間接ELISA檢測豬藍(lán)耳病的抗體，0d的檢測結(jié)果表明該豬場部分仔豬的抗體效價達(dá)到1 000以上，說明該豬場已經(jīng)感染了豬藍(lán)耳病，所以無法比較各組的差異。此外豬藍(lán)耳病的抗體與保護(hù)率之間無相關(guān)性，本試劑盒不能區(qū)分高致病性藍(lán)耳病疫苗的特異性抗體，凡是豬藍(lán)耳病的抗體均能檢出。故本報告未列出相應(yīng)的檢測結(jié)果。

3 小結(jié)與討論

3.1 本次試驗表明，豬瘟脾淋弱毒疫苗和豬O型口蹄疫滅活疫苗（Ⅱ）同時分部位注射時，免疫副反應(yīng)與單獨注射口蹄疫疫苗的情況一致，對口蹄疫和豬瘟免疫抗體的產(chǎn)生無影響，相互間干擾很小（P＞0.05），在生產(chǎn)實際中是可行的，這與張娟敏等人的報道是一致的，也是被我省這幾年的防疫工作所證實的。

3.2 本次試驗表明，高致病性豬藍(lán)耳病疫苗和豬O型口蹄疫滅活疫苗（Ⅱ）不能同時免疫，這可能與檢測方法、母源抗體水平高低等因素有關(guān)。豬瘟脾淋弱毒疫苗和高致病性豬藍(lán)耳病疫苗同時分部位免疫對豬瘟的免疫效果有一定的影響，王劍峰等也報道豬藍(lán)耳病疫苗對豬瘟的免疫效果有顯著影響。

3.3 該豬場所有母豬均免疫過兩次豬藍(lán)耳病疫苗，0 d時部分仔豬的抗體水平很高，可能存在隱性豬藍(lán)耳病。

3.4 此次試驗表明：仔豬只免疫1次口蹄疫疫苗（1 mL），免疫抗體合格率只能達(dá)到50%～66.67%，因此，生豬口蹄疫只免疫1次一般達(dá)不到保護(hù)效果，應(yīng)加強(qiáng)免疫1次，這與農(nóng)業(yè)部口蹄疫免疫方案規(guī)定的60日齡左右強(qiáng)化免疫1次是一致的。

3.5 通常認(rèn)為豬瘟弱毒脾淋苗的免疫效果最好，本次試驗用豬瘟脾淋苗1頭份，抗體陽性率只能達(dá)到60%左右，因此實際生產(chǎn)中應(yīng)在60日齡左右加強(qiáng)免疫1次，并且要根據(jù)當(dāng)?shù)貙嶋H情況制定合理的免疫程序。

本次試驗均采用ELISA方法對免疫效果進(jìn)行評價，通常ELISA比IHA方法更客觀，更敏感，特異性更高，但該ELISA試劑盒沒有給出達(dá)到免疫保護(hù)的臨界值。

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