利用氣相色譜檢測黃瓜果實中霜霉威的殘留量

馬佰慧，秦志偉，譚行之

（東北農業大學園藝學院，黑龍江哈爾濱，150030）

黃瓜霜霉病是黃瓜生產中的主要病害之一，其來勢猛、傳播快、為害重，能在1～2周內使植株大部分葉片枯死，造成嚴重減產，以致絕收[1]。為了防治霜霉病，在生產上需使用大量農藥，不僅提高了生產成本，也易造成農殘量超標，為害消費者健康。長期食用受污染蔬菜，是導致癌癥、動脈硬化、心血管病、胎兒畸形、死胎、早夭、早衰等疾病的重要原因。霜霉威（Propamocarb），是國內抑制霜霉病病害的主要噴灑類藥劑之一，能夠有效地抑制霜霉病的擴散，目前在生產上已廣泛使用，因而選擇一種快捷的方法定量分析黃瓜內霜霉威殘留量尤為重要[2，3]。本試驗的目的就是建立一種快速、準確、經濟、實用的黃瓜果實霜霉威殘留量的檢測方法。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

①試驗樣品 供試材料D0313（腌漬型）、D0351（腌漬型）、D0328-6（歐洲鮮用型）、北進（華北型）、D9320-2（華南型）均是經過多代自交選育的自交系，由東北農業大學園藝學院黃瓜育種研究室提供。

②儀器設備 島津GC-2010氣相色譜儀；島津 Rtx-1 （30 m×0.25 mm×0.25 μm）色譜柱；AOC-20i自動進樣器；旋轉蒸發儀；DY89-Ⅰ型高速玻璃均質器；Philips HR2860高速組織搗碎機，硅烷化白色擔體玻璃層析柱（20 mm×20 cm），250 mL分液漏斗。

③試劑 丙酮（分析純），乙醚（分析純），甲醇（色譜純），購自天津市化學試劑六廠；霜霉威標準品（≥99.0%）250 mg原藥（由美國Sigma公司提供，貨號45638）；霜霉威 （由黑龍江強爾生化技術開發有限公司提供）；氯化鈉，無水硫酸鈉（天津永大化學試劑有限公司）。

1.2 試驗方法

①農藥噴施 試驗在東北農業大學設施園藝中心進行。選取霜霉威400倍液噴灑，共噴藥3次，第1次在黃瓜植株長出根瓜時進行噴灑，每隔7 d 1次，最后一次噴藥后間隔7 d取樣[4]。供試材料采用隨機區組設計，3次重復。采用立架式單蔓栽培，其他田間管理同一般黃瓜栽培。

②色譜條件 色譜柱：島津 Rtx-1（30 m×0.25 mm×0.25 μm）毛細色譜柱；檢測器：FID；載氣（N2）：30 mL/min；空氣：400 mL/min；氫氣：40 mL/min；程序升溫：70℃持續 3 min，30℃/min升溫至 230℃，230℃持續10 min；進樣口溫度：260℃；檢測器溫度：290℃；恒壓；不分流；進樣量 1 μL。

③配制標準溶液 標準儲備液：稱取10 mg霜霉威標準品，用甲醇溶解并定容于100 mL容量瓶中，該溶液濃度為0.1 mg/mL。吸取儲備液10 mL于100 mL容量瓶中，用甲醇定容至100 mL作為標準中間液，該溶液濃度為10 μL/mL。標準工作液分別取標準中間液 0.01 mL，0.02 mL，0.1 mL，0.5 mL，1 mL和5 mL于5個100 mL容量瓶中，甲醇定容至濃度分別為 0.01 μL/mL，0.02 μL/mL，0.1 μL/mL，0.5 μL/mL，1.0 μL/mL 和 5 μL/mL。

④標準曲線與檢出限 按上述色譜操作條件進行測定得到6個霜霉威標準溶液的氣相色譜圖，見圖1。以標準樣品的濃度為橫坐標，對應的峰面積為縱坐標，得到霜霉威的標準曲線及相關系數。標準曲線呈現較好的線性關系，在濃度范圍0.01～5 μL/mL內線性方程為y=1 534.7+15 333.9x，線性相關系數為0.994，本方法的最小檢出限為0.01 μL/mL，表明本方法可以對霜霉威進行準確定性與定量分析。

圖1 1.0 μL/mL霜霉威標準溶液氣相色譜

表1 5個黃瓜品種的霜霉威殘留量

⑤樣品溶液制備 a.提取與凈化。稱取待測成熟商品黃瓜果實500 g，在組織搗碎機中搗碎，稱取25.0 g，加入 80 mL 丙酮∶水為 7∶1（V/V）混合液，高速勻質器中勻質5 min，抽濾，濾渣用丙酮∶水為7∶1（V/V）混合液洗滌后再重復上述操作，合并濾液在45℃以下濃縮至約40 mL。

移入預先注入50 mL乙醚和5 g氯化鈉的250 mL的分液漏斗中，震蕩，靜置，下層水相移入200 mL三角瓶中，上層有機相移入250 mL三角瓶中。水相中加入50 mL乙醚，按上述操作重復2次，合并乙醚層置于上述250 mL三角瓶中。置于層析柱中（內置約2 cm無水硫酸鈉）脫水。

b.濃縮。65℃用旋轉蒸發儀將提取液濃縮至近干，用甲醇定容至1 mmol/L，待上機檢測。

2 結果與分析

2.1 樣品檢測分析

分別對5種類型的黃瓜品種進行分析，其中兩種的色譜分析結果如圖2，圖3，表1所示。

2.2 方法的準確度和精密度

在空白黃瓜樣品中，分別添加濃度為0.1 μL/mL、1.0 μL/mL、5.0 μL/mL 的霜霉威標準溶液， 每個濃度作3次重復。其結果見表2。

試驗結果表明，霜霉威在黃瓜中的添加回收率為85%～94%，相對標準偏差是在1%～2%，可以滿足殘留量定量檢測的要求[5]。

表2 黃瓜中不同濃度霜霉威的添加回收率

圖2 D0351氣相色譜

圖3 D9320-2樣品氣相色譜

3 討論

利用氣相色譜FID檢測器能夠有效地分析不同黃瓜的霜霉威殘留量。減少霜霉威的損耗、精確檢測霜霉威的殘留量是分析的關鍵。近幾年有關文獻報道，也可先用酸堿法對霜霉威進行處理后再進行分析[6]。根據試驗結果可以看出，本文所用的檢測方法，分離度好、最低檢出限、回收率、準確度和精密度均符合農殘分析的要求。

根據結果顯示，D9320-2、北進等華南型、華北型鮮用黃瓜的霜霉威農殘量相對較高，D0351等腌漬型黃瓜的霜霉威農殘量則相對較低，這驗證了本教研室劉芳芳[7]的檢測結果。研究發現，相同的噴灑條件與種植條件下，瓜葉面積大、主莖粗的華南、華北型黃瓜霜霉威農殘量比D0351等腌漬型黃瓜的農殘量高了十幾倍。這說明不同生態類型的黃瓜種質，殘留量的高低明顯不同。

4 結論

本試驗對黃瓜的霜霉威殘留量進行研究，采用島津 GC-2010 氣相色譜儀，Rtx-1（30 m×0.25 mm×0.25 μm）石英毛細管柱對黃瓜中霜霉威的含量進行了測定，在10.800 min左右出峰，且分離度好，回收率、準確度和精密度均符合農藥分析的要求。節省了樣品的檢測時間，是一種快速檢測黃瓜中霜霉威農藥殘留有效的新方法。

[1]高利，龐金安.黃瓜主要病害抗性遺傳研究進展[J].中國蔬菜，2004（1）：63-66.

[2]華小梅，單正軍.我國農藥的生產，使用狀況及其污染環境因子分析[J].環境科學進展，1996，4（2）：33-44.

[3]黃健坤，戚佩坤.廣州地區黃瓜疫病病原菌的鑒定及防治研究[J].華南農學院學報：自然科學版，1982，3（2）：36-43.

[4]趙為武.農產品農藥殘留問題及治理對策[J].植物醫生，2001，14（3）：10-13.

[5]富恩承.出口商品中農藥、獸藥殘留量及生物毒素檢驗方法標準編寫的基本規定[S].SN/T0001-1995.

[6]劉偉，吳文君，于福利，等.霜霉威鹽酸鹽的分析方法[J].農藥分析，2009，48（3）：193-196.

[7]劉芳芳.黃瓜種質資源低農藥殘留性評價[D].哈爾濱：東北農業大學，2008.