組織切片用胃粘膜固定方法的技術改進

玄 兵 ，嚴 祥 ，李仁閣 ，貢繼尚 ，劉 英

（1.甘肅農業大學動物醫學院，甘肅 蘭州 730070；2.蘭州大學第一附屬醫院老年科，甘肅 蘭州 730000；3.蘭州市畜牧獸醫研究所，甘肅 蘭州 730050）

胃腸道是養分消化吸收的主要場所[1]，胃粘膜層是胃進行化學性消化最重要的部位[2]，所以胃粘膜具有很重要的生理作用。在胃的臨床病理學的研究中，許多病例與粘膜層的病變有關[3]。其中組織切片技術是開展胃組織解剖學診斷病因的最基本的方法之一。而一張好的切片與對胃組織的固定技術密切相關[4]。常規的固定方法多會導致胃粘膜不同程度的破損，給研究診斷工作造成困難。為了解決這個問題，筆者分別運用常規固定方法、自創的部分胃分離后去渣固定方法和切口去渣縫合后充盈固定方法對兔、狗和豬的胃進行了固定，并對這幾種固定方法進行了比較觀察，以期對胃粘膜切片的固定方法進行優化改進。

1 材料與方法

1.1 材料

選用兔和豬作為試驗動物。兔子結果分析中未涉及的胃均采自動物市場的成年健康家兔和土狗，放血致死后取出胃。豬胃購自蘭州肉聯廠的屠宰場，將健康成年育肥豬常規致死后，取出。

1.2 試驗設計

1.2.1 常規固定方法 取新鮮動物胃，切取一塊胃組織放于固定液中固定，或將切取的胃組織塊，粘膜面向上平鋪于泡沫板上，并用大頭針固定，粘膜面朝下浸于固定液中。

1.2.2 部分胃分離后去渣固定方法 將分離后的部分胃去除內容物，然后整體的放入固定液中固定。把采到的兔、豬或狗胃進行標記，從角切跡的下緣將整個胃一分為二，前部為胃底和胃體部，后部為幽門部。將兩部分均放入清水中，同時從賁門口和幽門口緩慢地注入清水，內容物被水浸透，變得松散而稀薄，逐漸的從斷口處涌出。同時，小心地用鑷子在此處去除大塊的胃內容物，切忌把內容物清洗一空。用大頭針，把斷口處的周緣胃壁固定在泡沫板上，然后浸入固定液中。由于幽門部比較厚，可以保持自身的形狀，所以只需用繩子把其吊起，將斷口端朝下浸入固定液中。固定48～72 h后取出，放入新的固定液中繼續固定。固定1周后，進行采樣。

1.2.3 切口去渣縫合后充盈固定方法 在豬或狗胃上做一切口，從切口中，輕輕地去除大部分胃內容物，同時注入固定液充盈胃腔，并且將胃的切口縫合好，然后將整個胃放入盛有固定液的容器中固定。將采到的兔胃置于有水的托盤中，在胃體接近小彎側、大彎側，或胃底大彎側，用手術刀劃3～4 cm長的切口，再分別從賁門口或幽門口緩慢注入清水，使內容物松散，并與胃壁分離，同時用鑷子小心地取出胃內容物。待到胃內基本上沒有大團食物殘留時，注入固定液后，將胃切口縫合。固定48～72 h后取出胃，放入新的固定液中繼續固定。固定1周后，進行采樣。

1.3 方法

1.3.1 采樣位置 在固定好的胃的適當部位取長為0.4 cm，寬為0.3 cm的組織塊，作為制作石蠟切片的材料。

1.3.2 組織形態學觀察 將所取組織材料按常規方法進行石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡觀察。

2 結果與分析

2.1 常規固定方法

如圖1所示，經常規方法固定的胃，用肉眼觀察可以看到，胃粘膜形態不規整。光鏡觀察胃粘膜形態不完整，有很多地方出現明顯的破損；粘膜層的各層結構模糊，有時出現很大程度的斷裂。

2.2 部分胃分離后去渣固定方法

如圖2所示，經過胃部分分離后去渣固定方法固定的胃，除切口部位組織有損傷外，分離的各部分胃形態基本保持原狀。光鏡下觀察發現，粘膜基本上都很完整，胃小凹清晰可見，固有層內的腺體結構清楚；高倍鏡下，粘膜的基本結構顯示清楚。

2.3 切口去渣縫合后充盈固定方法

如圖3所示，經過切口去渣縫合后充盈固定方法固定的胃，肉眼觀察時，胃的外部形態保持完整，在胃腔內部，胃粘膜褶凸向胃腔內，粘膜外形規整。用光鏡觀察時，粘膜很完整，粘膜層各層結構清晰。需要注意的是，切口部位組織損傷嚴重，該部位的組織不能用于制作切片的材料。

圖1 兔胃粘膜石蠟切片（常規固定）

圖2 兔胃粘膜石蠟切片（部分胃分離后去渣固定）

圖3 豬胃粘膜的石蠟切片(切口去渣縫合后充盈固定）

3 討論

3.1 常規固定方法的缺點

常規的固定方法是現場采樣時，只要切取一塊胃組織，置于固定液中固定好后就可以切片。該方法簡單迅速，但常常造成組織塊蜷曲和胃粘膜的腐敗、脫落或損傷。如果將胃組織塊固定在泡沫板上，再投放到固定液中，這就避免了粘膜之間的相互擠壓。但是在操作過程中，需要特別小心，尤其是將胃剪開，清除內容物的時候，稍有不慎就會損傷粘膜，并且被切取的組織塊四周的粘膜也會由于切取時刀具的切壓而受到很大程度的破壞，致使固定后很難獲得良好的粘膜切片。

3.2 部分胃分離后去渣固定方法的優點

胃部分分離后去渣固定方法是將胃切分為前后兩部分，然后從切口處抖去大塊的胃內容物，再根據需要，將分好的一半或整個胃組織放入固定液中固定好后，切取小塊組織，進行石蠟切片。其特點是切開的胃便于在不損傷胃粘膜的情況下去除胃內容物，以便固定液充分與粘膜等組織滲透，固定效果良好。并且一半或大塊的胃組織在固定液中固定，胃組織和粘膜的原有形態得到了保護。待到固定好后，再用鋒利的刀具切取組織塊進行包埋，石蠟切片，可以防止在常規固定法固定時，對胃組織的切壓造成的損傷。因此這種方法簡單實用，效果好。其缺點是需要整個胃或半個胃取材固定。為了使胃組織不受到其他組織的擠壓，固定用的容器要大，最好是一個胃單獨在一個容器中進行固定。由于家兔的胃無論限飼多久，胃內總留有一定量的食物，從食管端注水沖洗無法清除[5-6]，所以很適合用該方法固定。

3.3 切口去渣縫合后充盈固定方法的優點

胃切口去渣縫合后充盈固定方法是將新鮮的動物胃整體取出，沿胃大彎處切一口子，從口子中取出大塊胃內容物，然后將固定液灌入胃中，待胃充盈后，將切口嚴密縫合，不能讓固定液流出。再將整個胃放入盛有固定液的容器中固定。待固定好后，在胃的任何部位根據需要切塊，用石蠟切片法或其他方法進行組織學研究。這種方法的特點是，對胃在保持原有形狀前提下進行從內固定粘膜，從外固定肌肉的雙重固定方法。固定效果良好。這種方法具有除部分胃分離后去渣固定方法的優點外，還具有保持胃的自然形態不變的特點。因此，用這種方法固定的胃，不但可以用于制作組織切片，還可以用于采用肉眼或大體解剖的方法對胃進行觀察研究。

上述兩種改良的固定方法，都是比較好的固定胃組織的方法。可用于對胃粘膜的研究，也可以用作對胃的其他方面的組織學研究。

[1]王 磊，王康寧.影響豬胃腸道發育因素的研究進展[J].飼料工業，2006，27（5）：13-16.

[2]陳 杰.家畜生理學（第四版）[M].北京：中國農業出版社，2003.

[3]李仁閣，嚴 祥，趙海濤.動物單室胃肌層分層剝離解剖方法[J].甘肅農業大學學報，2009，2（1）：49-51.

[4]周庚寅.組織病理學技術[M].北京：北京大學醫學出版社，2006.

[5]張心如，羅宜熟.家兔的食糞特性與消化道疾病[J].四川畜牧獸醫，2002，29（12）：48.

[6]梅懋華.消化道生理學與臨床 [M].北京：人民衛生出版社，1990.