薄層色譜“一條”法檢測99Tcm藥物的放化純度

王吉欣,張艷華

(北京大學臨床腫瘤學院北京腫瘤醫院暨北京市腫瘤防治研究所,北京 100142)

99Tcm-MDP作為一種有效的骨顯像劑,在臨床已應用多年,但99Tcm-MDP注入體內后,全身放射性本底很高,需等待2～3 h本底下降后,才能進行骨顯像。懷疑是由于99Tcm-MDP放化純度偏低導致。薄層色譜(TLC)“一條(onestrip)”法[1-2],可以在一條硅膠板上將主產品及多種雜質如游離锝、锝錫膠體及可能存在的相對分子質量相差較大的其他雜質分離清楚后,按組分分段測定放射性,并計算放化純度。此“一條”法曾用于檢測99Tcm-PYM,具有分離組分準確、可信,分離效果較好的優點。故于2002年采用此法試測由原子高科股份有限公司(京原)提供的99Tcm-MDP,用傳統的放射性自顯影(Radioautography,簡稱自顯影)觀察斑點,按锝錫膠體、標記物、游離锝分離清楚的三段,分別刮板測放射性,并計算其放化純度為26%。2008年采用免洗膠片自顯影法,檢查99Tcm-MDP等6種常見锝藥物用此“一條”法的分離效果,并定性估測99Tcm-MDP的放化純度。2009年用同法復查3種锝藥物,目的是試用一種方法測定多種锝藥物,達到放化純度檢測的規范化和統一化。

1 實驗材料

2008 年 用99Tcm-MDP、99TcmO4-、99Tcm-DTPA 、99Tcm-EC 、99Tcm-MIBI 和99Tcm-MAA 6種藥物由北京欣科思達醫藥科技有限公司(簡稱京欣)提供,2009年用99Tcm-DTPA和99Tcm-MIBI均為京欣產品,99Tcm-MDP為京原與京欣兩種產品,所有藥物注射液的pH均接近生理鹽水(4.5～7.0);SG硅膠板:青島海洋化工廠產品,切成1 cm×10 cm硅膠條備用;曝光用免洗膠片:ISP International Specialty Products Inc提供,切成1 cm×10 cm;其他化學試劑均為北京化工廠產品。

2 實驗方法

采用上行TLC法,固定相為硅膠條,流動相為V(10%醋酸銨)∶V(甲醇)=1∶1。用微量注射器分別取材料中所提供的6種锝藥物,每次2μL,分3～5次點樣,斑點直徑小于4mm,趁斑點未干時立即放入色譜槽的流動相中,展開約6 cm取出,用吹風機干燥后,將硅膠條與免洗膠片全部緊密接觸,用兩條比硅膠條大些的玻璃片夾住,并用橡皮筋纏緊,自顯影24 h,取下膠片,測量膠片上各斑點中心與原點的距離,計算R f,實驗重復4次,取平均值,以±s表示。

3 結 果

3.1 6種常見99Tcm藥物的自顯影

2008年,TLC“一條”法后的自顯影采用免洗膠片代替傳統的X光膠片,共測定了6種锝藥物(含99TcmO4-),99Tcm-DTPA 測 2次,其余各測1次,結果示于圖1。由圖1可以看出,除99Tcm-MAA保留在原點未被分開外,另5種锝藥物的組分均可被分開。按在硅膠條上展開后,標記主要產物與原點間的距離由大到小依次為99TcmO4-、99Tcm-EC 、99Tcm-MDP 、99Tcm-DTPA(1為2009-05-13產品,2為2009-05-16產品)和99Tcm-MIBI,表明移動距離與標記物的相對分子質量相關,也進一步說明此法可用于檢測多種锝藥物。按圖1計算99Tcm-MDP的Rf為0.7,肉眼觀察其放化純度偏低,但高于2002年測定結果;99Tcm-DTPA 2次自顯影的斑點顏色深淺不同,表明其放化純度有差異。

圖1 6種常用锝藥物的放射性自顯影

3.2 部分99Tcm藥物的復查

2009年用上述方法對99Tcm-MDP、99Tcm-DTPA和99Tcm-MIBI進行復查,每種藥物重復4次,其自顯影圖像示于圖2。由 4次圖像計算Rf,結果顯示,99Tcm-DTPA 和99Tcm-MIBI均與2008年檢測結果相同,分別為 0.78±0.02和0.39±0.03;99Tcm-MDP的檢測結果與2008年的相差甚大,其自顯影斑點始終在原點附近,Rf接近于零,其組分未被分開。

圖2 3種锝藥物的TLC自顯影

4 討論與建議

4.1 99Tcm標記藥物應先被分離完全,再定量測定其放化純度

上述結果表明,用自顯影法檢查 TLC,除99Tcm-MAA外,實驗所用“一條”法可以將锝藥物的各種組分分開,與Vera的圖示分析結果[3]相符合。此后按各組分分段檢測放射性計數,進而可定量計算藥物的放化純度。

4.2 即使在藥盒保質期內,也應在標記完成后檢測其放化純度

2002年和2008年99Tcm-MDP的放化純度都偏低,但其組分可以分開,而2009年觀察到組分未分開,這可能是由于99Tcm-MDP是具有锝錫膠體特性的復合物,因標記用MDP藥盒有效期為52周,藥盒內氯化亞錫含量隨貯存時間增加而降低,因此可能導致標記產品的R f發生顯著變化。這種變化用兩條法(一條測游離锝,另一條測锝錫膠體)難以測出,且其所測定的放化純度通常＞90%。因此,即使在MDP藥盒貯存有效期內進行標記,也要在標記后用于臨床前檢測其放化純度。

4.3 發展檢測99Tcm藥物放化純度的高效薄層色譜法

2005年Lep ri等[4]提出了改善分離效率的高效薄層色譜法(HPTLC法),此法采用顆粒度較小(2～10μm)的硅膠板和較小的點樣體積(0.1～0.2μL,點樣原點約1.0 mm);Gocan[5]和張玉奎[6]等認為,限制點樣原點尺寸是 TLC分離和精確定量的關鍵。與HPTLC法相比,本方法的不足之處是試樣溶液的放射性濃度較低,加樣總體積也較小,只有2 m L,雖然多次點樣,點樣直徑也未達到1.0mm的要求。

生產單位擁有眾多的專業放化人才、大量放射性濃度的锝藥物和檢測放化純度必需的儀器設備,有條件繼續研究此項工作。可以比較多種固定相與流動相的組合,找出最佳層析體系及簡便的操作方法,并進一步促進锝藥物放化純度檢測方法的規范化。

致謝:本工作承蒙中國人民解放軍總醫院附一院核醫學科歐陽巧洪主任、藩茹等同志長期來提供場所、試樣和北方免疫試劑研究所孟福英同志的大力支持,北京大學第一醫院核醫學科王榮福主任、張春麗副主任、閻萍同志及本院藥劑科、放療科物理組等有關同志的鼎力幫助,在此表示衷心感謝!

[1] 張艷華,黃天貴,黃俊星,等.99Tcm-PYM的制備、動物實驗及臨床研究[J].北京醫科大學學報,1997,29:150-152.

[2] Huang TQ,Zhang YH,Wang JX,et al.Pingyangmycin as a99mTCCarrier in Tumor Localization[J].Nucl Med Biol,1995,22:537-542.

[3] Vera DR.Radionuclide p roduction&radiopharmaceuticals[R/OL].[2008-01-31].http:∥dep ts.washington.edu/uwm ip/Week-5/Radiopharms.pdf.

[4] Lepri L,Cincinelli A.TLC Sorbents[C]//Cazes J.Encyclopedia of Chromatography:Vol.Ⅱ.2nd ed.New York:Tay lor&Francis G roup,2005:1 645-1 649.

[5] Gocan S.Sample app lication in TLC[C]//Cazes J.Encyclopedia of chromatography:Vol.Ⅱ.2nd ed.New York:Taylor&Francis Group LLC,2005:1 480-1 486.

[6] 張玉奎,張維冰,鄒漢法主編.分析化學手冊:第六分冊[M].第二版.北京:化學工業出版社,2000:118-125.