子宮內膜樣腺癌組織中NF-κB p65與ERα的表達及意義

李 偉 章明放 張云莎

細胞核因子kappa B（nuclear factor-kappa B,NF-κB）p65也被稱為人類應激反應的中心調節劑[1]。近年來人們發現其在調節炎癥反應之外，還能夠在促進血管生成，腫瘤發生、侵襲和轉移過程中發揮關鍵作用[2]。子宮內膜癌是較常見的婦科惡性腫瘤，其發病機制目前尚不清楚。本研究通過檢測不同類型子宮內膜組織中NF-κB p65蛋白和雌激素受體（ER）α蛋白的表達，旨在探討二者在子宮內膜樣腺癌發病過程中的作用及二者間的相互關系。

1 對象與方法

1.1 研究對象 收集天津醫科大學總醫院病理科2006年6月—2008年12月診刮活檢的子宮內膜組織標本90例。其中正常子宮內膜10例（增殖期和分泌期各5例），取自子宮肌瘤術前診刮的患者，年齡24~47歲，平均（39.2±7.4）歲，其月經規則，無性激素類藥物使用史。子宮內膜增生癥60例，年齡21~79歲，平均（47.4±12.2）歲，包括單純性增生、復雜性增生和非典型增生各20例。子宮內膜樣腺癌20例，年齡15~78歲，平均（52.6±17.1）歲，子宮內膜增生癥和子宮內膜樣腺癌的子宮內膜組織取自因陰道異常出血行刮宮術的患者，術前均未經化療、放療或性激素治療。

1.2 方法 所有組織標本均經10%福爾馬林固定，石蠟包埋，4 μm厚連續切片。鼠抗人NF-κB p65單克隆抗體（sc-8008）、ERα單克隆抗體（zm-0104）購自美國Santa Cruz公司，工作濃度均為1∶150。二抗PV6000購自北京中杉生物技術有限公司。免疫組化采用二步法進行染色：石蠟切片經常規二甲苯脫蠟、梯度乙醇脫水后，用PBS沖洗3次，5 min/次；枸櫞酸鹽緩沖液微波爐抗原熱修復95℃10 min；3%H2O2室溫孵育10 min；PBS沖洗2次，3 min/次；正常山羊血清工作液封閉10 min；滴加一抗工作液，4℃冰箱過夜；恢復室溫30℃，PBS沖洗2次，3 min/次；滴加二抗工作液，37℃溫箱孵育60 min，PBS沖洗2次，3 min/次；DAB顯色。顯色充分后應用蘇木素復染細胞核，乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。NF-κB p65染色陽性信號定位于胞漿或胞核，ERα染色陽性信號定位于胞核，二者均以胞核染色為陽性，呈棕黃色或棕褐色。選取內膜腺體上皮細胞密集的區域，連續觀察5個高倍視野（×400），計數每視野中100個腺上皮細胞中的陽性細胞數，以“%”表示，取5次計數均值。

1.3 統計學方法 采用SPSS 13.0統計軟件進行分析，數據符合正態分布時，以x±s表示，多組比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用q檢驗。數據不符合正態分布時，以中位數（四分位數間距）表示，多組間比較采用Kruskal-Wallis test秩和檢驗，兩兩比較采用Mann-Whitney test，相關性分析采用Spearman秩相關，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同類型子宮內膜組織腺上皮細胞核中NF-κB p65和ERα蛋白表達比較 3組NF-κB p65蛋白、ERα蛋白表達率差別有統計學意義，兩兩比較差異亦有統計學意義（P<0.05或P<0.01），見表1。

表1 不同類型子宮內膜組織中NF-κB p65與ERα蛋白的表達比較 （%）

2.2 不同子宮內膜增生類型NF-κB p65與ERα蛋白表達比較 3組NF-κB p65蛋白表達率差別有統計學意義，兩兩比較差別亦有統計學意義（P<0.05或P<0.01）；3組ERα蛋白表達率差別有統計學意義（P<0.01），單純性增生組與非典型增生組、復雜性增生組與非典型增生組之間差異均有統計學意義（P<0.05或 P<0.01），見表 2。

表2 子宮內膜增生癥中NF-κB p65與ERα蛋白的表達比較 （n=20，%）

2.3 子宮內膜樣腺癌組織中NF-κB p65與ERα表達的關系 子宮內膜樣腺癌組織中NF-κB p65蛋白的表達與ERα蛋白的表達呈負相關（r=-0.491，tr=2．391，P ＝ 0.028）。

3 討論

子宮內膜增生癥與子宮內膜樣腺癌是一個連續的過程，子宮內膜增生癥包括單純性、復雜性和非典型增生，有不同的比例可發展為癌。NF-κB為一個轉錄因子家族，在哺乳動物中該家族包括p50、p52、p65、c-Rel和Rel-B，并形成同型或異質二聚體轉錄復合物。在哺乳動物中最常見的Rel/NF-κB二聚體含有p50和p65，并被明確地稱為NF-κB[1]。已有報道在結腸癌和前列腺癌中存在NF-κB持續的核表達[3-4]。本研究表明，在子宮內膜組織由增生癥到內膜樣腺癌的發展過程中，NF-κB p65的核陽性染色比率逐漸增加，提示NF-κB p65蛋白可能在子宮內膜樣腺癌的發展過程中起重要作用。Pallares等[5]研究表明子宮內膜癌中NF-κB的核表達率為16.5%，且p50和p65表達之間顯著相關，提示NF-κB表達于子宮內膜癌中。但他們同時認為ER表達增加與p65的核表達一致，這點與本研究結果是相悖的。

ERα在子宮內膜樣腺癌的發生過程中起重要作用，這已被諸多學者所證實。Hu等[6]研究發現，從正常增殖期到子宮內膜單純性增生，以及子宮內膜復雜性增生過程中，ERα的表達是上升的；而由子宮內膜非典型增生向子宮內膜樣腺癌過渡過程中表達卻顯著下降，甚至在后者中的表達是缺失的。這與本研究結果類似，提示在子宮內膜過度增生向惡變轉變的過程中，ERα會出現不同程度的減少，對雌激素失去了正常的識別功能，并有可能參與了子宮內膜樣腺癌的發生。此外筆者還發現隨著NF-κB蛋白的表達增加，ERα蛋白表達減少，兩者之間存在相關性。還有研究證實，在ER陽性的Ishikawa子宮內膜癌細胞系中，使用白細胞介素（IL）-1處理后能夠抑制ER介導的受體基因的轉錄[7]，由于IL-1能夠誘導NF-κB，所以推斷NF-κB在這種細胞環境中抑制ER的轉錄活性。ER可能和NF-κB復合定位于DNA上，這種相互作用與類固醇激素（GR）、孕激素（PR）是相似的，且NF-κB對于激素受體的這種抑制作用與腫瘤向不依賴激素的方向進展是有關的。據此筆者認為，NF-κB p65蛋白的表達增加，很可能抑制了ERα的活性，使其表達下降。與之相反，Ozlem等[8]研究認為，ERα能夠直接阻止NF-κB與DNA結合，從而抑制其活性。由此可見兩者的關系是相互的，稱之為交互調節作用。

總之，NF-κB p65蛋白在子宮內膜樣腺癌細胞核中的表達率顯著增高，提示在子宮內膜樣腺癌的演變過程中，NF-κB的變化可能促進了癌癥的形成和進展，且在該過程中與ERα相互作用。NF-κB p65可能抑制了ERα的表達，從而使子宮內膜樣腺癌演變成非激素依賴的狀態。

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