高效液相色譜法測定頭孢氨芐緩釋片的含量

梁曉燕

（廣東省佛山市中醫(yī)院，廣東 佛山 528000）

頭孢氨芐為半合成的第一代口服頭孢菌素，特點是耐酸、口服吸收良好[1]。2005 年版《中國藥典（二部）》[2]收載的頭孢氨芐部分制劑的含量測定方法為高效液相色譜法，但頭孢氨芐緩釋片的含量測定方法仍為滴定法[3]。滴定法操作煩瑣、費時，誤差比較大，為此筆者采用高效液相色譜法測定頭孢氨芐緩釋片的含量。

1 儀器與試藥

Waters 510型高效液相色譜儀；Mettler AE 240型電子天平。頭孢氨芐對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為130408-200209，含量為94.2%）；頭孢氨芐緩釋片（某公司，批號分別為080502，080622，080705，規(guī)格均為 0.25 g）；磷酸二氫鉀及磷酸氫二鉀（分析純，廣州化學(xué)試劑廠）；甲醇（色譜醇，天津市四友精細(xì)化學(xué)品有限公司）；水（超純水）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：大連依利特Hypersil ODS2分析柱（200 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：磷酸鹽緩沖液 （pH=7.4）-甲醇（75 ∶25）；檢測波長：254 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：35 ℃；進樣量：20μL。理論板數(shù)按頭孢氨芐峰計算應(yīng)不低于1500。在此條件下，色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

精密稱取頭孢氨芐對照品20 mg，置20 mL量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取10 mL，置50 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，得對照品溶液。取本品10片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于頭孢氨芐50 mg），置50 mL量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取10 mL，置50 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，得供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密量取頭孢氨芐對照品溶液（0.973 g/L）0.25，0.50，1.00，2.50，5.00 mL，分別置 10 mL 量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻。精密量取20μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖（圖1）。以質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=14482140.22 X+53334.569，r=0.9999（n=5）。結(jié)果表明，頭孢氨芐質(zhì)量濃度在0.024～0.487 g/L范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗：取對照品溶液，注入高效液相色譜儀，重復(fù)進樣5次。結(jié)果峰面積平均值為3045471，RSD為0.8%（n=5）。

穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液，分別于制備后的0，2，4，8，24 h時測定。結(jié)果表明，供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定，RSD為0.7%（n=5）。

重復(fù)性試驗：取同一批樣品5份，平行測定。結(jié)果含量平均值為104.9%，RSD為0.7%（n=5）。

加樣回收試驗：取已知含量樣品，精密加入頭孢氨芐對照品適量，按樣品測定方法測定含量，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗結(jié)果（n=6）

2.4 樣品含量測定

分別精密量取對照品溶液和供試品溶液各20μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。以外標(biāo)法計算含量，并與滴定法結(jié)果比較，詳見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果（%，n=3）

3 討論

溶解時，超聲處理有助于提高頭孢氨芐溶解速率。本法快速準(zhǔn)確、靈敏度高、簡單易行、流動相穩(wěn)定且廉價易得，樣品組分保留時間短，分析速度快，重現(xiàn)性、精密度均良好，分離效果佳，賦形劑對含量測定無干擾，符合制劑含量測定要求，故可用于頭孢氨芐緩釋片的含量測定。

[1]陳新謙，金有豫，湯 光.新編藥物學(xué)[M].第15版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2003：58.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：151.

[3]WS-086（X-074）-96，中華人民共和國衛(wèi)生部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)（試行）[S].