反相高效液相色譜法測定鹽酸奧洛他定片的含量

崔志紅，周慶英，王 穎，張健翔

（1.魯南制藥集團股份有限公司，山東 臨沂 276006； 2.山東省臨沂市藥品檢驗所，山東 臨沂 276001）

鹽酸奧洛他定為選擇性H1受體拮抗劑，對化學(xué)遞質(zhì)白三烯、凝血激肽、血小板活化因子的產(chǎn)生及游離均有抑制作用，對神經(jīng)遞質(zhì)速激肽的游離也有抑制作用，用于治療過敏性鼻炎、蕁麻疹、濕疹、皮炎、癢疹、皮膚瘙癢癥、尋常型干癬、多形性滲出性紅斑伴發(fā)的瘙癢[1-2]。筆者擬建立一種測定鹽酸奧洛他定片中鹽酸奧洛他定含量的高效液相色譜法，使鹽酸奧洛他定和分解產(chǎn)物得以分離，以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；UV2401型紫外-可見分光光度計（日本島津公司）；FA1104型電子天平（上海天平儀器廠）。鹽酸奧洛他定對照品（北京天衡藥物研究院，含量為100%，批號為060826）；鹽酸奧洛他定片（北京天衡藥物研究院，批號為 061101，061102，061103）；乙腈（色譜純，F(xiàn)isher Chemicals，批號為 063507）；蒸餾水（自制）；其他試劑為色譜純。所有試液使用前均經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[3]

色譜柱：Zorbax SB-C18柱（250 mm×4.5 mm，5μm，美國安捷倫公司）；流動相：0.02 mol/L磷酸二氫鈉溶液（含0.2%辛烷基磺酸鈉，用濃磷酸調(diào) pH 至 3.0）-乙腈（65 ∶35）；流速：1.5 mL/min；檢測波長：210 nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：10μL。在此條件下，鹽酸奧洛他定的保留時間為9.29 min，理論板數(shù)約為9600。

2.2 溶液制備

精密稱取經(jīng)105℃干燥至恒重的鹽酸奧洛他定對照品25 mg，加流動相溶解并稀釋制成每1 mL含0.25 mg的溶液，作為對照品溶液。取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于鹽酸奧洛他定12.5 mg），置50 mL量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗：精密稱取空白輔料適量（約相當(dāng)于鹽酸奧洛他定12.5 mg），置50 mL量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液測定。結(jié)果空白輔料溶液在鹽酸奧洛他定主峰保留時間處不出峰，對鹽酸奧洛他定的含量測定無干擾。空白輔料、供試品溶液色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：稱取105℃干燥至恒重的鹽酸奧洛他定對照品約50 mg，精密稱定，置100 mL量瓶中，加流動相適量，振搖使溶解，加流動相稀釋至刻度，搖勻；分別精密量取 1，2，3，4，5，6，7 mL，置10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL中分別含 0.05，0.10，0.15，0.20，0.25，0.30，0.35 mg的對照品溶液，分別精密量取10μL注入液相色譜儀，記錄色譜峰峰面積（A）。將峰面積（A）對相應(yīng)的質(zhì)量濃度（C）進(jìn)行回歸處理，得回歸方程 A=29.943 C+17.152，r=0.9999（ n=7）。結(jié)果表明，鹽酸奧洛他定質(zhì)量濃度在0.05～0.35 g/L范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗：取線性關(guān)系考察項下質(zhì)量濃度為0.20，0.25，0.30 mg的對照品溶液，按擬訂的色譜條件，每個質(zhì)量濃度連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣5次。結(jié)果的 RSD分別為0.10%，0.10%，0.12% （n=5），表明方法精密度良好。

重現(xiàn)性試驗：取同一批（批號為061101）樣品，依法制備供試品溶液并測定峰面積，計算標(biāo)示含量。結(jié)果平均標(biāo)示百分含量為99.63%，RSD=0.55% （n=6）。

加樣回收試驗：取已知含量的樣品（批號為061101，含量為2.51%）20片，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于鹽酸奧洛他定12.5 mg），置100 mL量瓶中，平行制備6份，同時精密加入105℃干燥至恒重的鹽酸奧洛他定對照品，按供試品溶液制備方法制備溶液，并依法測定峰面積，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗結(jié)果（n=6）

2.4 樣品含量測定

取3批樣品，依法制備供試品溶液，分別取10 μL注入液相色譜儀，按擬訂的色譜條件進(jìn)行測定，以外標(biāo)法計算標(biāo)示百分含量。結(jié)果批號為061101，061102，061103的3批樣品中，鹽酸奧洛他定的標(biāo)示百分含量分別為99.63%，99.22%，99.55%。

3 討論

以流動相為溶劑，配制適當(dāng)質(zhì)量濃度的鹽酸奧洛他定對照品溶液，在200～400 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果最大吸收波長為206 nm，故選擇檢測波長為210 nm。試驗中曾以C18柱為固定相，乙腈-0.02 mol/L磷酸二氫鈉為流動相，通過調(diào)節(jié)流動相比例和水相的酸度進(jìn)行了一系列試驗，結(jié)果表明該流動相體系下主峰拖尾嚴(yán)重，理論板數(shù)低，主峰與最近雜質(zhì)峰的分離度較小。因此，加入離子對試劑辛烷基磺酸鈉，即以0.02 mol/L磷酸二氫鈉溶液（含0.2%辛烷基磺酸鈉，用濃磷酸調(diào)pH至3.0）-乙腈為流動相，當(dāng)水相、有機相比例為65：35時，主峰保留時間適宜，柱效較高，最近雜質(zhì)峰能夠較好地分離，方法專屬性強，線性范圍寬，可以用于鹽酸奧洛他定片的含量測定。

[1]孫晉瑞，孫 倩，于 靜 .奧洛他定[J].齊魯藥事，2006，25（10）：636-638.

[2]徐維盛，牛長群.鹽酸奧洛他定中有關(guān)物質(zhì)的HPLC測定[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2007，38（12）：870-871.

[3]梁 偉，周 輝，劉東陽，等.HPLC-MS/MS聯(lián)用技術(shù)定量測定人血漿中奧洛他定濃度[J]. 質(zhì)譜學(xué)報，2006，27（4）：193-197.