高效液相色譜法測定酮康唑乳膏中酮康唑含量

李 霞，李 繼，張秉華，劉海靜

（陜西省食品藥品檢驗所，陜西 西安 710061）

2005年版《中國藥典（二部）》采用紫外分光光度（UV）法測定酮康唑乳膏含量[1]802，樣品處理采用0.1 mol/L的鹽酸水浴加熱提取后用氯仿反復萃取的方法。也有人采用加內標高效液相色譜（HPLC）法測定酮康唑乳膏中酮康唑含量[2-3]。按照國家藥典委員會2010年版藥典標準提高工作要求，我所共收集了11個不同生產廠家的樣品，根據廠家反映，2005年版《中國藥典（二部）》的含量測定方法操作較復雜、費時，且損失較大。筆者在試驗過程中也發現，由于各個廠家生產工藝存在較大差異，有些廠家的樣品在用0.1 mol/L的鹽酸水浴加熱提取后非常難以過濾，且樣品損失較大，方法重現性較差。因此，筆者采用HPLC法對該品種進行了含量測定，并簡化了樣品前處理方法，結果準確可靠，方法操作簡單、重現性好、專屬性強。

1 儀器與試藥

Waters Alliance HT液相色譜儀，包括Waters 2487型檢測器；Mettler AE 240型電子天平。乙酸銨、二異丙胺為分析純；甲醇為色譜純；水為超純水；酮康唑對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為0294-9801）；酮康唑乳膏樣品11批，由11個生產廠家提供。

2 方法與結果

2.1 色譜條件及系統適用性試驗

色譜柱：Capcell PAK C18柱（150 mm ×4.6 mm，5μm）；流動相：0.5%醋酸銨溶液-0.2%二異丙銨的甲醇溶液（23∶77）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：240 nm；進樣量：10μL。在此條件下，色譜圖見圖1，酮康唑峰的保留時間為5.3 min，理論塔板數為4082，拖尾因子為1.1。

2.2 溶液制備

取酮康唑對照品0.5011 g，精密稱定，置50 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液，備用。取樣品2.5 g，精密稱定，置燒杯中，加甲醇-氯仿（1∶1）20 mL，置80℃水浴中振搖使溶解，加甲醇-氯仿（1∶1）適量，移至50 mL量瓶中，放冷至室溫，用甲醇-氯仿（1∶1）定容至刻度，搖勻，冰浴中冷卻1 h待基質析出后放至室溫，濾過，取續濾液作為供試品溶液。

2.3 方法學考察

耐用性試驗：選用了3種品牌的色譜柱進行試驗，分別為Capcell PAK C18柱 （150 mm ×4.6 mm，5μm），Diamonsil（鉆石）C18柱（150 mm×4.6 mm，5μm）和 Agela Technologies C18柱（150 mm×4.6 mm，5μm）。結果酮康唑的峰形均良好，理論塔板數均在2000以上，說明該系統的耐用性較好。

專屬性試驗：取空白試劑溶液及陰性對照品溶液，照2.1項下的色譜條件進行測定。結果處方中所用輔料及配制樣品所用溶劑對測定結果均無干擾，說明該方法的專屬性較好（見圖1）。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察：精密吸取2.2項下對照品貯備液，用溶劑逐級稀釋，即得系列質量濃度的對照品溶液，依法各進樣2次，以峰面積為縱坐標、質量濃度（mg/mL）為橫坐標進行線性回歸。回歸方程為Y=2 ×107X+143661（r=0.9999），線性范圍為 0.1 ～2.0 mg/mL。

加樣回收試驗：精密稱取樣品（廈門金日制藥有限公司，批號為060501）1.25 g，分別精密加入對照品貯備液（10.022 mg/mL）1.5，2.5，3.5 mL，照供試品溶液配制方法制備，每種濃度各配制3份，依法測定。結果見表1。

表1 酮康唑加樣回收試驗結果（n=3）

精密度試驗：取對照品溶液（質量濃度為1 mg/mL），依法測定酮康唑的峰面積。結果的 RSD為0.3%（n=6），表明方法的精密度良好。

最小檢測限確定：取一定質量濃度的對照品溶液逐級稀釋、進樣。結果按3倍信噪比計算，酮康唑的最小檢測限為0.2μg/mL。

最小定量限測定：取一定質量濃度的對照品溶液逐級稀釋、進樣。結果按10倍信噪比計算，酮康唑的最小定量限為1.0μg/mL。

重現性試驗：取同一批號（廈門金日制藥有限公司，批號為060501）樣品6份，依法測定。結果酮康唑平均含量為101.1%，RSD 為 1.6%（n=6）。

穩定性試驗：同一供試品溶液，分別于24 h內每隔2 h進樣測定。結果酮康唑含量的 RSD為0.4%（n=13），表明供試品溶液在24 h內穩定性良好。

2.4 樣品含量測定

取11個廠家各1批樣品，依法測定含量，同時將新起草的標準和原標準進行了比較，結果見表2。

表2 樣品含量測定結果（%，n=3）

3 討論

樣品前處理：文獻[2]采用四氫呋喃作為溶劑將乳膏分散后用甲醇稀釋樣品。筆者在試驗中發現部分廠家的樣品加四氫呋喃后乳膏無法分散或溶解。根據文獻[1]，酮康唑原料在氯仿中易溶、在甲醇中溶解，結合多次試驗，最終選擇氯仿-甲醇（1∶1）為提取溶劑，采用80℃水浴溶解并定容后，冰浴1 h后過濾，能有效提取酮康唑和去除基質。結果發現采用新方法所測酮康唑含量比原方法有所提高，且方法操作簡單，回收率、精密度等都較好。

色譜條件確定：曾參考文獻[1]436，采用甲醇-水為流動相進行含量測定，但結果發現只有使用Capcell PAK C18柱（150 mm×4.6 mm，5μm）時，酮康唑的峰形較好，理論塔板數超過2000，而采用Diamonsil（鉆石）C18柱和Agela Technologies C18柱時酮康唑的峰形都較差，理論塔板數根本達不到2000，說明該流動相的系統耐用性較差，不適合該樣品的含量測定；參照文獻[4-5]，采用0.5%的醋酸銨溶液-甲醇（23∶77）為流動相，發現酮康唑峰形有拖尾現象，而在甲醇中加入一定量的二異丙胺后，拖尾現象明顯減輕。最終選擇0.5%的醋酸銨溶液-0.2%的二異丙胺的甲醇溶液（23∶77）為流動相，以上述3種型號的柱子為固定相，峰形均較好，理論塔板數均超過2000；且適當改變流動相比例、柱溫及流速，除酮康唑的保留時間有少許變動外，峰形均較好。最終確定了上述色譜條件。

檢測波長選擇：參照文獻[4-5]酮康唑片劑和洗劑的質量標準，選擇240 nm為檢測波長，此時溶劑及輔料均無干擾。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[M].北京：化學工業出版社，2005.

[2]楊 欣，屈平定，繩金房.HPLC法測定酮康唑乳膏中酮康唑含量[J].中國抗生素雜志，2004，29（7）：401-402.

[3]李文東，龐青云，余 立，等.HPLC法測定酮康唑乳膏中酮康唑含量[J].中國藥品標準，2007，8（1）：36-38.

[4]WS1-（X-422）-2003Z，國家食品藥品監督管理局國家藥品標準新藥轉正標準[S].

[5]WS1-（X-515）-2003Z，國家食品藥品監督管理局國家藥品標準新藥轉正標準[S].