反相高效液相色譜法同時測定愈酚偽麻待因口服溶液3組分含量

鄧 紅 ，陳睿妍 ，張 蜀 ，張 彧

(1.廣東藥學院藥物研究所·廣東省藥物新劑型重點實驗室，廣東 廣州 510006;2.深圳致君制藥有限公司，廣東 深圳 518110)

愈酚偽麻待因口服溶液由磷酸可待因、鹽酸偽麻黃堿及愈創木酚甘油醚組成，用于緩解無痰干咳或少痰的劇烈、頻繁咳嗽，并可減輕鼻塞等癥狀。筆者采用反相高效液相色譜法同時測定該復方制劑中3種主要成分的含量，現報道如下。

1 儀器與試藥

島津LC10-AD型液相色譜儀，SPD-M10A二極管陣列檢測器，Class LC-10A色譜工作站(日本Shimadzu公司);P680型高效液相色譜儀，UVD170U檢測器，Chromeleon-HPLC management software(美國Dionex公司)。愈酚偽麻待因口服溶液(深圳致君制藥有限公司，批號分別為070501，070502，070503，規格為100 mL中含磷酸可待因0.2 g、鹽酸偽麻黃堿0.6 g、愈創木酚甘油醚2 g);磷酸可待因、鹽酸偽麻黃堿、愈創木酚甘油醚對照品及游離愈創木酚均由深圳致君制藥有限公司提供;甲醇為色譜純，其他試劑為分析純，水為雙蒸水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:DiamonsidTM-C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm，迪馬公司);流動相:0.01 mol/L磷酸二氫鉀(含0.002 mol/L的庚烷磺酸鈉，磷酸調pH至3.0)-乙腈(70∶30，V/V);檢測波長:215 nm;流速:1 mL/min;進樣量:10 μL。理論塔板數按磷酸可待因、鹽酸偽麻黃堿、愈創木酚甘油醚計算均應不低于3000。

2.2 溶液制備

精密稱取磷酸可待因對照品0.04 g、鹽酸偽麻黃堿對照品0.12 g與愈創木酚甘油醚對照品0.4 g，置100 mL量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為混合對照品貯備液(實際配得的磷酸可待因、鹽酸偽麻黃堿與愈創木酚甘油醚的質量濃度分別為0.428，1.224，4.036 g/L)。精密量取上述貯備液1 mL，置10 mL量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得混合對照品溶液。精密吸取樣品1 mL(約相當于磷酸可待因2 mg、鹽酸偽麻黃堿6 mg與愈創木酚甘油醚20 mg)，置50 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。取處方中除主藥外的其余成分，配制成不含磷酸可待因、鹽酸偽麻黃堿及愈創木酚甘油醚的陰性樣品，取1 mL，按供試品溶液制備方法處理，即得陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

專屬性試驗:取混合對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液;另取已知雜質游離愈創木酚對照品適量，精密稱定，加水制成10 μg/mL的雜質溶液。分別進樣10 μL，記錄色譜圖。各組分峰分離度均符合要求，空白輔料無干擾(圖1)。

圖1 高效液相色譜圖

標準曲線制備:分別吸取適量的混合對照品貯備液，加水稀釋成含磷酸可待因 8.56，17.12，25.68，34.24，42.80，51.36，59.92，68.48 μg/mL，鹽酸偽麻黃堿 24.48，48.96，73.44.97.92，122.40，146.88，171.36，195.84 μg/mL，愈創木酚甘油醚為 80.72，161.44，242.16，322.88，403.60，484.32，565.04，645.76 μg/mL 的系列混合對照品溶液。依次進樣10 μL，以峰面積(A)對混合對照品溶液系列質量濃度(C)進行線性回歸，得磷酸可待因回歸方程 A=33689.18 C+27132.71，r=0.9999(n=8);鹽酸偽麻黃堿回歸方程 A=17339.06 C+16921.64，r=0.9999(n=8);愈創木酚甘油醚回歸方程 A=19082.88 C+157497.64，r=0.9999(n=8)。結果表明，磷酸可待因、鹽酸偽麻黃堿、愈創木酚甘油醚質量濃度分別在 8.56 ～68.48 μg/mL，24.48 ～195.84 μg/mL，80.72 ～645.76 μg/mL范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗:取混合對照品溶液，連續測定6次。結果磷酸可待因、鹽酸偽麻黃堿與愈創木酚甘油醚峰面積的 RSD分別為0.91%，0.79%，0.92%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，分別于配制0，0.5，1.0，2.5，4.0，8.0 h時進樣測定。結果磷酸可待因、鹽酸偽麻黃堿與愈創木酚甘油醚峰面積的 RSD分別為0.43%，0.61%，0.64%(n=6)，表明供試品溶液在8 h內穩定。

重復性試驗:取同一批(批號為070501)樣品6份，依法測定，以外標一點法計算含量。結果磷酸可待因、鹽酸偽麻黃堿及愈創木酚甘油醚含量的 RSD分別為0.49%，0.59%，0.55%(n=6)，表明方法重復性良好。

回收率試驗:精密吸取混合對照品貯備液4，5，6 mL各3份，分別置50 mL量瓶中，加入陰性樣品1 mL，加水稀釋至刻度，依法測定含量。結果見表1。

2.4 樣品含量測定

取3批樣品適量，依法測定，記錄峰面積，以外標一點法計算含量。結果見表2。

表1 回收率試驗結果(n=9)

3 討論

本試驗采用二極管陣列檢測器，通過對3組分進行在線光譜檢測，結果磷酸可待因在213 nm和285 nm、鹽酸偽麻黃堿在206 nm和257 nm、愈創木酚甘油醚在222 nm和273 nm波長處有最大吸收。由于本品中磷酸可待因的含量僅為愈創木酚甘油醚的1/10，為了能同時檢測3組分含量，決定以215 nm為檢測波長。在此波長處，3組分都有較大吸收，且有相對均衡的響應值。

本品是堿性藥物和中性藥物的混合物，同時須考慮游離愈創木酚等有關物質和矯味劑、防腐劑等輔料的干擾。為此，筆者參考文獻[1-3]，首先通過選擇緩沖鹽的種類、濃度及pH來優化色譜條件。結果隨著pH增大，其堿性藥物磷酸可待因和鹽酸偽麻黃堿的保留時間延長，但峰形變差，至pH偏酸性時，堿性藥物的保留很差，不能得到較好的分離。因此加入離子對試劑，使之與堿性藥物離子生成疏水性離子對，增加其保留時間及改變選擇性。在本試驗的色譜條件下，各組分能達到較好的分離，且峰形對稱，可用于本品中3個組分的同時測定。

表2 樣品含量測定結果(n=3)

[1]魏雪芳，杜銀簽.反相離子對HPLC法測定博士止咳露中多個成分的含量[J].廣東藥學院學報，1999，15(3):164-166.

[2]李永慶，田子新，趙 文，等.高效液相色譜法測定雷登泰口服液中愈創木酚甘油醚、鹽酸偽麻黃堿和氫溴酸右美沙芬的含量[J].藥物分析雜志，2000，20(2):97-99.

[3]杜碧瑩.HPLC法同時測定美敏偽麻口服溶液中3組分的含量[J].廣東藥學院學報，2008，24(3):249-250.