烏司他丁加甲基潑尼松龍對(duì)大鼠急性壞死性胰腺炎血清淀粉酶及細(xì)胞因子的影響

段志學(xué)

急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)，特別是急性重癥胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)，實(shí)質(zhì)上是一種全身性炎癥反應(yīng)綜合征，炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子在其發(fā)病機(jī)制中的作用受到越來(lái)越多的研究者的重視[1]。AP的發(fā)病機(jī)制相當(dāng)復(fù)雜，至今尚未完全闡明[2]。因此，筆者根據(jù)近年來(lái)對(duì)ANP發(fā)病機(jī)制的最新研究進(jìn)展，應(yīng)用烏司他丁和甲基強(qiáng)的松龍治療ANP大鼠模型，探討其藥理作用機(jī)理，為ANP臨床治療提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及材料 雄性Wistar大鼠150只，體重240～270g，由溫州醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供；注射用烏司他丁為廣東天普生化醫(yī)藥股份有限公司產(chǎn)品(批號(hào)：H19990134，1×105U/瓶)；甲基潑尼松龍注射液為Pfizer Manufacturing Belgium NV(輝瑞投資有限公司)產(chǎn)品(批號(hào)：H20060054，每支40mg/瓶)；I淀粉酶試劑盒購(gòu)自上海榮盛生物試劑廠；IL-6試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所；TNF-а試劑盒購(gòu)自上海森雄科技實(shí)業(yè)有限公司；酶標(biāo)儀為美國(guó)Bio-tekELx800公司產(chǎn)品。

1.2 分組及ANP動(dòng)物模型 150只雄性大鼠隨機(jī)分成A、B、C、D、E 5組，每組30只，各組的體重?zé)o顯著差異(P＞0.05)。用3%戊巴比妥鈉(30mg/kg)腹腔內(nèi)注射麻醉，腹部去毛，經(jīng)2%絡(luò)合碘消毒腹部皮膚，鋪無(wú)菌孔巾，取中上腹部正中切口。A組術(shù)中僅翻動(dòng)胰腺，未作特殊處理，縫合腹部切口。其它組提起十二指腸，顯露胰膽管的全程，無(wú)創(chuàng)傷性動(dòng)脈夾夾閉肝門(mén)區(qū)膽管，向胰管內(nèi)注射5%牛磺膽酸鈉，5min后可見(jiàn)整個(gè)胰腺出現(xiàn)明顯充血、水腫、片狀出血，證實(shí)ANP動(dòng)物模型已建立成功，移去小動(dòng)脈夾。B組按容積12.5ml/kg給予生理鹽水，C組按劑量20mg/kg、容積12.5ml/kg給予甲基潑尼松龍，D組按劑量10萬(wàn)U/kg、容積12.5ml/kg給予烏司他丁，E組劑量同上。分別于術(shù)后2、6h從下腔靜脈抽血1ml。

1.3 血清樣品采集和處理 取靜脈血0.5ml，置入普通塑料試管中，4℃離心10min(2000r/min)，分離血清后置于EP管中，放入-20℃冰箱中保存，待測(cè)。

1.4 血清淀粉酶和細(xì)胞因子的檢測(cè)方法 ①血清淀粉酶檢測(cè)：取血清樣品待測(cè)液，經(jīng)淀粉-碘比色法分別測(cè)定660nm波長(zhǎng)下測(cè)定管(加入血清樣品)和對(duì)照管(不含血清樣品)的吸光度(A)，計(jì)算淀粉酶活性。②血清IL-6、TNF-a測(cè)定：采用雙抗體夾心ABCELISA法檢測(cè)血清IL-6、TNF-a水平，按試劑盒說(shuō)明書(shū)要求操作。

表1 5組2h、6h血清AMS、IL-6、TNF-α比較(±s)

表1 5組2h、6h血清AMS、IL-6、TNF-α比較(±s)

注：與A、C、D、E組比較，▲P＜0.05；與B、C、D組比較，*P＜0.05；與B、C組比較，#P＜0.05；與2h組比較，◇P＜0.05。

組別 n 血清淀粉酶(IU/ml) IL-6(ng/L) TNF-α(pg/ml)2h 6h 2h 6h 2h 6h A組 30 130.31±30.45* 131.40±29.14*◇ 13.24±1.21* 11.25±2.68*◇ 11.06±2.44* 49.89±1.75*◇B組 30 485.37±40.27▲ 621.48±53.57▲◇ 48.67±8.62▲ 92.68±15.47▲◇ 152.29±24.32▲ 186.57±31.24▲◇C組 30 375.70±71.83 449.10±43.80◇ 32.65±8.47◇ 63.28±9.86◇ 128.93±13.39 150.4±21.05◇D組 30 373.46±58.72 447.28±34.64◇ 31.84±5.41 62.51±10.37◇ 126.62±12.48 148.3±19.64◇E組 30 213.20±41.96# 342.60±53.43#◇ 21.58±5.67#◇ 51.23±9.47#◇ 60.56±8.17#◇ 95.92±4.42#◇

2 結(jié)果

血清淀粉酶和IL-6、TNF-α的檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

3 討論

文獻(xiàn)報(bào)道[3]IL-6可由單核、巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞等多種細(xì)胞產(chǎn)生，參與到燒傷、膿毒癥、重大手術(shù)等機(jī)體的許多急性反應(yīng)。TNF-α早期升高后，可誘導(dǎo) IL-6、IL-8 及其自身的基因表達(dá)引起級(jí)聯(lián)反應(yīng)造成炎癥介質(zhì)的失控性釋放[4]。研究發(fā)現(xiàn)ANP模型大鼠與正常大鼠比較及模型大鼠的2h與6h組比較，AMS、IL-6、TNF-α均出現(xiàn)明顯升高(P＜0.05)，因此，IL-6、TNF-α在急性胰腺炎的發(fā)病中起重要作用。

烏司他丁是從人尿中分離純化出的一種糖蛋白,主要具有以下作用:(1)對(duì)多種蛋白酶、糖和脂水解酶的活性有明顯的抑制作用。(2)穩(wěn)定溶酶體膜,抑制溶酶體酶的釋放。(3)抑制炎性介質(zhì)和細(xì)胞因子的釋放,從而減輕ANP后全身炎癥反應(yīng)并預(yù)防多器官功能損害。文獻(xiàn)報(bào)道[5]，早期應(yīng)用甲基強(qiáng)的松龍可以改善胰腺及胰周的微循環(huán)，能穩(wěn)定胰腺腺泡，抑制胰腺外分泌及胰腺對(duì)各種介質(zhì)的反應(yīng)和其他藥物配合達(dá)到抗炎、中和毒素、抑制壞死、復(fù)蘇瀕臨死亡的胰腺組織作用。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)C組、D組、E組與B組比較AMS、IL-6、TNF-α均出現(xiàn)明顯下降(P＜0.05)。烏司他丁是一種蛋白酶抑制劑，能夠同時(shí)抑制胰蛋白酶、磷脂酶A2、透明質(zhì)酸酶、彈性蛋白酶等多種水解酶的活性[6]；糖皮質(zhì)激素甲基潑尼松龍可誘導(dǎo)IkB基因轉(zhuǎn)錄，從而增加IkB-α蛋白合成，抑制NF-κB向核內(nèi)的移位，減少細(xì)胞因子合成，阻斷機(jī)體免疫系統(tǒng)的激活[7]。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)E組與B、C組比較AMS、IL-6、TNF-α均出現(xiàn)明顯下降(P＜0.05)，因此，聯(lián)合應(yīng)用烏司他丁和甲基潑尼松龍治療大鼠急性壞死性胰腺炎比單獨(dú)用藥效果好，可有效的抑制AMS、IL-6、TNF-a的分泌、釋放，改善ANP的預(yù)后，但有待于臨床實(shí)踐進(jìn)一步研究證實(shí)。

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