豬源乳酸菌的分離、篩選、鑒定及產(chǎn)酸性能的研究

郭志杰 李 杰 李 鑫 張德曉 王曉翠

乳酸菌在替代腹瀉、促生長、抗生素等綜合方面一定程度上起到良好的作用，被人們認(rèn)為是理想綠色添加劑。人們根據(jù)乳酸菌生理功能，將其應(yīng)用到仔豬腹瀉的防治上，起到了顯著降低腹瀉率，促生長的效果，提高了養(yǎng)豬的經(jīng)濟(jì)效益[1]。理想的益生素菌種最好來自同源動物的腸道。Timmerman等（2006）研究表明，同源性乳酸菌對宿主的益生作用優(yōu)于異源菌株[2]。由于動物種類和環(huán)境的不同定植腸道的種類和數(shù)量相差很大，定植的能力也不盡相同，相應(yīng)在糞便里也不盡相同[3]。然而得到并篩選出同源且抗逆性強(qiáng)的菌株尤為重要。故分離并篩選耐受性和抑菌效果良好的菌株為研究仔豬防腹瀉、促增長的微生態(tài)制劑提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料與設(shè)備

1.1.1 病原指示菌

大腸桿菌和沙門氏菌均由東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院贈送。

1.1.2 培養(yǎng)基

MRS液體和固體培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯、LB培養(yǎng)基。

1.1.3 生化鑒定試劑

5%過氧化氫（v/v）、奈示試劑、PY基礎(chǔ)培養(yǎng)液、檸檬酸鐵氨、v-p試劑、明膠、細(xì)菌微量生化反應(yīng)管。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 菌株分離與命名

取28日齡新鮮斷奶仔豬糞便0.5 g置于4.5 ml滅菌生理鹽水中，搖勻。進(jìn)行梯度稀釋，稀釋至第7個梯度，吸取 10-5、10-6、10-7梯度稀釋液 200 μl于固體MRS培養(yǎng)基平板上均勻涂布。將上述平板置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱（5%CO2）培養(yǎng) 48 h，挑去健壯、活性高的單菌落30株。反復(fù)劃線純化到獲得純菌株為止。

進(jìn)行革蘭氏染色、鏡檢。選擇革蘭氏陽性菌且無芽孢的菌株為后備菌株。將菌液與滅菌甘油按1：1混合置于-20℃冰箱進(jìn)行菌種保藏。……