奧沙利鉑原料藥3種含量測定方法比較

費瑞娟，陳祥峰，任 鳳

（1.江蘇省電業職工療養院，江蘇無錫 214164；2.江蘇奧賽康藥業有限公司，江蘇南京 211112）

奧沙利鉑原料藥3種含量測定方法比較

費瑞娟1，陳祥峰2，任 鳳2

（1.江蘇省電業職工療養院，江蘇無錫 214164；2.江蘇奧賽康藥業有限公司，江蘇南京 211112）

目的：建立奧沙利鉑原料藥的含量測定方法。方法：采用反相高效液相色譜法測定奧沙利鉑原料藥的含量，并與UV法及熾灼殘渣法進行比較。結果：3種檢測方法均具可行性。結論：高效液相色譜法測定干擾小，操作方便，結果準確。

奧沙利鉑；HPLC；含量測定

奧沙利鉑(Oxaliplatin)為為繼順鉑、卡鉑之后，由法國Sanofi Winthrop公司開發，并于1996年首次在法國上市的第三代鉑類抗癌藥物[1]。該藥是對結、直腸轉移癌，尤其是對耐氟尿嘧啶的結、直腸癌有較好療效的第一個鉑類藥物。2004年1月FDA批準了奧沙利鉑聯合方案作為晚期結直腸癌的一線方案[2]。此外Missct JL[3]報道，奧沙利鉑對卵巢癌、淋巴瘤、非小細胞肺癌、頭頸部腫瘤也有比較客觀的療效[4]。本文主要依據奧沙利鉑分子結構特點并參照文獻資料以及中國藥典2000年版二部上原料藥的有關規定及新藥(西藥)的審批要求進行[5]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC-10A高效液相色譜儀系統（包括LC-10AT泵，SPD-10A紫外檢測器，C-R6A色譜數據處理儀）、756MC紫外分光光度儀（上海第三分析儀器廠）。

1.2 試藥

甲醇（色譜純）、奧沙利鉑（合肥海通藥物研究所，980807、980811、980815）、對照品（上述奧沙利鉑原料經重結晶三次，經檢查符合奧沙利鉑對照品暫訂質量標準）。

2 方法與結果

2.1 高效液相色譜法(HPLC)

2.1.1 色譜條件

色譜柱：C18柱，150×4.6 mm，5 μm（phnomenex U.S.A）；流動相：甲醇-水(5∶95)；檢測波長：250 nm；流速：1 ml/min；進樣量：20 μl。

2.1.2 系統適用性試驗

按上述色譜條件，分別量取含量測定項下對照品溶液及供試品溶液各20 μl注入液相色譜儀，理論板數按奧沙利鉑峰計算不低于3000。

2.1.3 標準曲線

取奧沙利鉑對照品適量(約18 mg)，精密稱定，置25 ml量瓶中，加流動相適量振搖使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取 1、2、3、4、5 ml于 10 ml量瓶中，流動相稀釋至刻度，搖勻，分別量取20 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以進樣量為橫坐標，奧沙利鉑峰峰面積為縱坐標進行線性回歸，回歸方程為：A=20778.0C-250.3，r=0.999 7，表明奧沙利鉑在1.384～6.920 μg范圍內呈線性關系。

2.1.4 進樣精密度

取奧沙利鉑適量，配制一樣品溶液，連續進樣5次，計算精密度RSD為0.39%。

2.1.5 精密度試驗

取同一批號奧沙利鉑原料5份，約20 mg，精密稱定，置100 ml量瓶中，照含量測定項下方法測定，并計算奧沙利鉑的含量，結果奧沙利鉑峰面積的RSD為0.18%，表明進樣精密度良好。

2.1.6 含量測定

取本品約20 mg，精密稱定，置100 ml量瓶中，加流動相適量振搖使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取奧沙利鉑對照品適量，精密稱定，同法制成每1毫升中約含奧沙利鉑0.2 mg的溶液為對照品溶液。分別量取供試品及對照品溶液各20 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測定奧沙利鉑峰峰面積，計算即得，測定本品三批（980807、980811、980815）的含量分別為 99.72%，103.1%，101.1%。

2.2 紫外分光光度法(UV法)

2.2.1 標準曲線

取奧沙利鉑對照品適量，精密稱定，用水溶解，制成每1毫升約含奧沙利鉑0.5 mg的標準貯備液，精密量取標準貯備液 1、3、5、7、10 ml，置 25 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，照紫外分光光度法(中國藥典2000年版二部附錄ⅣA)于250 nm波長處，測定各溶液的吸收度，以奧沙利鉑濃度(C)為橫坐標，吸收度(A)為縱坐標，進行線性回歸，回歸方程為A=-0.00282+0.00664 C，r=0.999 9。結果顯示奧沙利鉑在18.56～185.6 μg/ml濃度范圍內有較好的線性關系。

2.2.2 溶液穩定性試驗

取標準曲線項下的標準溶液置室溫下，立即測定，并分別在 1、2、4、6、8 h 及 1、2、3、4 d 測定溶液的吸收度， 以 0 小時的吸收值為100%計算4 d內溶液的穩定性，結果顯示日內差的RSD為0.15%，日間差的RSD為0.13%，溶液在4 d內吸收度沒有明顯的變化。

2.2.3 精密度試驗

2.2.3.1 重復性試驗 取同一批號奧沙利鉑原料5份，約25 mg，精密稱定，置50 ml量瓶中，加水振搖使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取該溶液5 ml置25 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，照含量測定項下的方法測定各樣品中奧沙利鉑的含量，結果含量測定的平均值為99.61%，RSD為0.20%，表明本方法的重現性良好。

2.2.3.2 中間精密度 分別于不同時間和不同的儀器上，照含量測定項下方法進行同一批號樣品（批號：980807）的含量測定，測得平均含量為（99.42±0.15）%，RSD 為 0.15%。

2.2.4 含量測定

取本品約25 mg，精密稱定，置50 ml量瓶中，加水適量振搖（或超聲）使溶解，并定容至刻度，搖勻，精密量取5 ml置25 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液；另取奧沙利鉑對照品適量，精密稱定，同法制成每1毫升中約含奧沙利鉑100 μg的溶液為對照品溶液，照分光光度法（中國藥典2000年版二部附錄ⅣA）于250 nm波長處測定供試品及對照品溶液的吸收度，計算，得本品三批樣品（980807、980811、980815）測定結果分別為 99.56%、99.43%、99.27%。

2.3 熾灼殘渣法

2.3.1 精密度試驗

取同一批號樣品(批號:980807)5份，精密稱定，照含量測定項下的方法操作，計算含量，測定結果奧沙利鉑峰面積的RSD為0.68%，表明進樣精密度良好。

2.3.2 含量測定

取本品約1.0 g，照中國藥典2000年版二部附錄ⅧN熾灼殘渣檢查法操作，置已熾灼至恒重的坩鍋中，精密稱定，緩緩熾灼至完全炭化，放冷至室溫，在400℃熾灼使完全灰化，移置干燥器內，放冷至室溫，精密稱定后，再在400℃熾灼至恒重，測得本品 3 批（980807，980811，980815）的含量為 99.65%，99.95，99.42%。

3 討論

分別采用高效液相色譜法（HPLC）[6]、紫外分光光度法（UV）和熾灼殘渣法進行本品含量測定。奧沙利鉑分子結構內存在共軛體系，在紫外光區有明顯的特征吸收，因此可采用紫外分光光度法測定本品含量。中國藥典2000年版二部收載的順鉑為本品的同類化合物，其含量測定采用熾灼殘渣的方法，因此可采用此方法進行本品的含量測定。結果顯示：3種方法的測定結果無顯著性差異。

考慮到本品為原料藥，且高效液相色譜法進行含量測定干擾較小，因此推薦選用高效液相色譜法進行本品的含量測定。

[1]郭德嵩.第三代鉑類抗癌藥物奧沙利鉑的研究進展[J].國外醫學:藥學分冊,1999,26(1):4-5,7．

[2]張文.晚期結直腸癌的化療進展[J].中國癌癥雜志,2004,14(4):380．

[3]Missct JL.Oxaliolatin in practice[J].Br J Cancer,1998,77(Suppl4):S4-S7．

[4]任鵬，孫堅彤，沈云玉,等.反相高效液相色譜法測定奧沙利鉑的含量[J].抗感染藥學,2005,2(1):24-26.

[5]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:化學工業出版社,2005:附錄 XI,XA1．

[6]田琳.HPLC法測定注射用奧沙利鉑主藥含量[J].中外醫療,2009,28(14):14.

Determination of Oxaliplatin by three methods

FEI Ruijuan1,CHEN Xiangfeng2,REN Feng2
(1.Jiangsu employee arcadia resorts of electricity power,Jiangsu Province,Wuxi214164,China;2.Jiangsu Aosaikang Pharmaceutical Co.,Ltd,Jiangsu Province,Nanjing 211112,China)

Objective:To develop a method for determining the content of oxaliplatin.Methods:RP-HPLC,UV and residue on ignition method were used to determine oxaliplaitin,respectively,and the results were compared with each other..ResultsAll the three mothods were feasible for determining oxaliplatin.Conclusion:RP-HPLC method is simple and more accurate.

Oxaliplatin；HPLC；Content

R943

B

1674-4721（2010）12（a）-057-02

2010-10-29）