美國白蛾核型多角體病毒增殖方法

劉玉書，祁振坤，曹占明，孔凡濤，劉鯤鵬

（1.薊縣林業局，天津 薊縣 301900；2.薊縣國營苗圃，天津 薊縣 301900）

美國白蛾核型多角體病毒，屬桿狀病毒科，核型多角體病毒屬Ⅰ型，是美國白蛾的天然病毒體，是美國白蛾的克星，為了獲得一定數量的病毒用于防治，2007～2009年我們在國營青甸苗圃、小屯苗圃連續進行了七次病毒增殖工作，摸索了一套簡單有效的病毒增殖方法。

1 增殖病毒場地選擇及養蟲臺的搭建

1.1 場地選擇

一是病毒增殖場地要選在交通方便地區；二是周圍要有充足的天然或人工栽植的植物飼料；三是增殖室要求面積不低于100 m2，通風透光，封閉性好，有照明設施；四是室內或附近有水源，方便配制病毒藥液，便于進行病毒增殖工作。

1.2 搭建病毒增殖平臺

在增殖室內搭建幼蟲養殖平臺進行病毒增殖，可使單位面積使用效率倍增，有利于添加飼料，有利于幼蟲生長發育，便于感染病毒死蟲的收集。

1.2.1 材料與工具

搭建平臺的材料有：竹竿（粗1.5～2 cm）、塑料布條、挷絲；工具有：剪刀、盒尺、鉗子、鋼鋸。

1.2.2 搭建平臺規格

病毒增殖平臺呈立體梯形。高100 cm，長因地制宜而定，上寬80 cm、下寬85 cm。分上下兩層，下層距地面15 cm。增殖室內可搭幾個平臺，平臺之間留寬1 m的工作道。

2 采集美國白蛾幼蟲

2.1 采蟲工具及方法

剪枝手剪、高枝剪、裝蟲袋子、扎口繩。根據養殖幼蟲數量，確定采蟲人員及工具。

2.2 采蟲時期

用于病毒增殖的美國白蛾幼蟲齡期應在2～2.5齡為宜，偏早或偏晚都會影響病毒增殖工作的質量，幼蟲采集工作應在1～2 d內突擊完成。

2.3 采蟲包裝及運輸

采蟲時隨采隨裝，剪掉粗1 cm以上的枝條并去掉無蟲枝葉，自然裝滿為好，扎緊袋子口，存蔭涼處。運輸時間盡可能縮短，到達病毒增殖場地立即將蟲枝取出，以免采集的幼蟲窒息死亡。

3 病毒接種

3.1 增殖室溫濕度要求

病毒增殖室溫度在25℃左右；相對濕度70%～85%最為適宜。如溫度低于10℃以下，蟲體僵硬而死，核型多角體病毒含量低，此時應采取增溫措施。

3.2 幼蟲擺放密度

運輸到增殖地的美國白蛾幼蟲要及時擺放到增殖室平臺上，做到蟲體分布均勻，合理密度為 3 500頭/m2。

3.3 病毒接種時期及濃度

按合理的密度擺放幼蟲，立即向幼蟲體及葉片上噴施病毒液 （接種病毒），使其盡快感染病毒，盡可能縮短病毒增殖的時間。幼蟲接種病毒理想的濃度為美國白蛾核型多角體病毒1 000萬個/ml。每天早晚兩次連噴3 d即可。

3.4 增殖用白蛾幼蟲的喂養

增殖用美國白蛾幼蟲需注意添加食料，食料為新鮮的枝葉，一般需喂養15～18 d。根據蟲口密度，決定喂食數量及次數。

4 致病死蟲的收集與保存

接種病毒7 d后，個別齡期小的幼蟲開始死亡，這時要及時撿拾致病死蟲，并收集保存。接種病毒10 d后，死蟲開始進入高峰，自然致死蟲內核型多角體病毒含量高、質量好，所以不死的幼蟲暫不撿。幼蟲接種病毒17 d后的活蟲可全部收撿。致病死蟲收集工作完成后，收集容器密封，于0～4℃下保存，待提取病毒。

5 清理增殖室

在白蛾病毒增殖過程中，要時刻保證增殖室在封閉狀態，防止白蛾幼蟲逃逸，病毒增殖工作結束后，及時清理室內枝葉，并銷毀。

6 病毒的提取與貯存

6.1 病毒液的提取

將低溫保存的蟲尸在研磨破碎前3 d放入容器加適量無菌水，以淹沒蟲尸為宜。用勻漿破碎機研磨粉碎，研磨時加入少量水，避免產生高溫。勻漿液用120目的紗網過濾，過濾出的殘渣進行二次研磨，再用同樣紗網過濾，即成為美國白蛾多角體病毒液。

6.2 病毒液濃度的檢測

取混合均勻的病毒原液1 ml，稀釋1 000倍后，用血球計數板在電子顯微鏡下計數，計數時在計數板一個視野里見到的病毒量太少（每視野低于5個），可再降低稀釋倍數；反之，提高稀釋倍數（每視野多于20個）。

病毒濃度=（80 小格內數量÷80）×400×104×稀釋倍數

6.3 病毒懸液的保存

病毒懸液在密閉容器中0～4℃保存，在用于防治時按照施用濃度兌水配置即可。