鸚鵡熱衣原體基因工程亞單位疫苗免疫羊抗體產生動力曲線*

李巖偉,楊鳳寶,宋立華,馬桂花,朱 虹,端 青

2.寧夏回族自治區鹽池縣灘羊選育場;

3.寧夏回族自治區鹽池縣動物疾病預防控制中心

鸚鵡熱衣原體基因工程亞單位疫苗免疫羊抗體產生動力曲線*

李巖偉1,楊鳳寶2,宋立華1,馬桂花3,朱 虹1,端 青1

目的觀察鸚鵡熱衣原體基因工程亞單位疫苗免疫羊后產生的動力學曲線。方法 用不同劑量鸚鵡熱衣原體主要外膜蛋白基因工程亞單位疫苗免疫綿羊,免疫前及免疫后不同時間采血檢測抗體情況,觀察綿羊抗體的產生和變化水平。結果 免疫劑量為0.5mg/只頸部肌肉多點注射,具有良好的免疫效果。結論 鸚鵡熱衣原體基因工程亞單位疫苗免疫劑量為0.5mg/只頸部肌肉多點注射,在綿羊整個妊娠期內具有保護作用。

衣原體亞單位疫苗;免疫;動力曲線

2.寧夏回族自治區鹽池縣灘羊選育場;

3.寧夏回族自治區鹽池縣動物疾病預防控制中心

鸚鵡熱衣原體(Chlamydia psittaci,Cps)是造成羊地方性流產的主要病原菌之一,首次感染Cps的受孕綿羊和山羊的流產率分別高達30%和70%,給許多國家畜牧業造成重大損失〔1〕。我國禽類和畜類Cps感染也十分嚴重,我們自1989年以來多次為北京地區雞場、種雞場、兔場和進口病羊診斷Cps感染。我國引種頻繁的集約化飼養畜禽場的Cps感染率在8%～50%之間,發生過感染的畜禽場中,動物群的流產率和死胎率遠高于安全場。另外,近年來從國外引進的動物種群攜帶并感染有Cps的已有多起報道。因此,Cps感染以及局部爆發流行已對我國畜牧業形成嚴重威協,爆發流行時經濟損失慘重,已成為國內外人獸共患病研究的重要課題。

疫苗研究一直是預防病原感染的重要手段,基因工程亞單位疫苗由于其安全,容易大規模生產,而越來越受到人們的青睞。Cps主要外膜蛋白(MOMP)是種特異性抗原,通過基因工程表達的rCps-MOMP具有良好的免疫原性〔2〕,并對小鼠和肉雞顯示了良好的免疫保護作用〔3-4〕。

本實驗將我們自主研制的rCps-MOMP制成亞單位疫苗,于配種前免疫母羊,觀察疫苗的安全性和相關抗體產生及其變化規律。

1 材料方法

1.1 動物 12月齡雌性綿羊34只,品種為多賽特和小尾寒羊雜交1代,由北京市門頭溝種羊場提供。

1.2 疫苗 rCps-MOMP(0.25mg/mL)與白油乳化亞單位疫苗,軍事醫學科學院微生物流行病研究所研制。

1.3 試劑 鸚鵡熱抗體快速檢測試劑(膠體金法),軍事醫學科學院微生物流行病研究所研制。

1.4 免疫 rCps-MOMP免疫動物實驗分組及免疫劑量見表1。動物在配種前25d進行頸部肌肉多點注射免疫,高劑量組僅免疫1次,中劑量和低劑量組動物在第1次免疫80d后加強免疫1次,免疫劑量和途徑同前。

表1 rCps-MOMP免疫動物實驗分組及免疫劑量Table 1 Groups and doses of experimental animalsvaccinated rCps-MOMP

1.5 血清抗體檢測 分別在免疫前和第一次免疫后 14d 、30 d、60 d 、90 d、120 d 、150 d 和 180 d 采血 ,分離收集血清。血清抗體滴度檢測按照試劑使用說明操作。

1.6 統計方法 抗體水平采用抗體稀釋度的對數表示,不同劑量組和不同免疫時間的抗體水平采用10只綿羊抗體水平的平均值,用(±s)表示。選用能處理具有一個重復測量兩因素設計定量資料的方差分析處理數據,在SAS軟件中操作。

2 結 果

2.1 rCps-MOMP亞單位疫苗的安全性 rCps-MOMP亞單位疫苗免疫動物后,免疫部位未見紅腫和結節,飲食和精神狀況良好,受孕正常,無不良反應,說明疫苗是安全的。

2.2 rCps-MOMP亞單位疫苗免疫羊抗體產生的動力學曲線 免疫前實驗組綿羊Cps抗體檢測均為陰性,對照組綿羊每次采血檢測Cps抗體均為陰性。各劑量免疫組動物不同時間抗體平均水平作圖1～3。從圖1可以看出,高劑量組動物抗體在免疫后27～28d達到最高水平,平均效價為1∶8 000,之后慢慢降低,60d后進入平臺期,仍維持在較高的抗體水平(1∶2 000以上),個別綿羊270d還能檢測到1∶100的抗體;中劑量組動物抗體在免疫后14d達到最大值1∶400,之后迅速降低,80d加強免疫后,其抗體最高水平仍低于14d最大值,在分娩前抗體水平已降至1∶10以下;低劑量組動物抗體在免疫后14d抗體水平達到最大值1∶80,明顯低于其他兩組,加強免疫后抗體水平仍沒有提高,且降低迅速,分娩前30d大部分動物抗體檢測陰性。以上結果經統計學分析,各免疫劑量組之間的動物抗體平均水平差異顯著(P＜0.005),高劑量組動物的抗體水平達到了良好的免疫效果。

3 討 論

預防Cps感染最好的辦法是免疫接種,最初的Cps疫苗是從接種的雞胚中提取并滅活的Cps菌體疫苗,這種疫苗雖然也能起到一定的保護作用,但存在許多弊端,如不易大規模生產、成本高不易推廣、存在變態反應原等。近年來發現Cps-MOMP具有良好的免疫保護性,以其為基礎研制基因工程亞單位疫苗的實驗已在一些國家開展〔5〕。

本實驗用不同劑量rCps-MOMP亞單位疫苗于配種前25d免疫母羊,觀察不同時間抗體產生水平。實驗結果表明,免疫劑量為0.5mg/只頸部肌肉多點注射,動物抗體滴度于免疫后27～28d達到最高水平,平均效價為1∶8 000,之后慢慢降低,60d后進入平臺期,仍維持在較高的抗體水平直至分娩,顯示了良好的免疫效果。

〔1〕Rodolakis A.Les infections àChlamy dia psittaci:acquisitions récentes et applications au diagnostic et à l' é pidémiologie des chlamydioses aviaires,canines et felines〔J〕.Prat Mé d Chir Anim Comp,1993,28(3):321-330.

〔2〕劉向偉,張浩杰,王效義,等.重組鸚鵡熱衣原體主要外膜蛋白的抗原性研究〔J〕.生命科學研究,2002,3(6):267-269.

〔3〕朱虹,張浩杰,何君,等.鸚鵡熱衣原體重組主要外膜蛋白誘導小鼠免疫應答的觀察〔J〕.微生物學免疫學進展,2003,31(3):35-36.

〔4〕郝永新,何誠,趙德明,等.鸚鵡熱衣原體重組主要外膜蛋白誘導肉雞免疫應答觀察〔J〕.中國人獸共患病雜志,2004,20(12):1065-1067.

〔5〕Longbottom D,Living stone M.Vaccination against chlamydial infections of man and animals〔J〕.Vet J,2006,171:263 – 275.

Kinetics curve of antibody responses in ewes immunized with subunit vaccine of genetically engineeredChlamydia psittaci

LI Yan-wei,YANG Feng-bao,SONG Li-hua,MA Gui-hua,ZH U Hong,DUAN Qing
(State Key Laboratory of Pathogen and Biosecurity,Institute of Microbiology and Epidemiology,Academy of Military Medical Science,Beijing100071,China)

This study analyzed antibody responses in ewes vaccinated with three different doses of major outer-membrane protein subunit vaccine from genetically engineeredChlamydia psittaci.Sera of ewes were detected before vaccination and at different times post-vaccination.Experimental results indicated that multilocus intramuscular injection in the neck region with dose of 0.5 mg per ewe could stimulate good immune response.

chlamydial subunit vaccine;immune;kinetic curve

R374

A

1002-2694(2010)09-0835-02

*艾滋病和病毒性肝炎等重大傳染病防治(2008ZX10004-003)

端青,Email:duanq@nic.bmi.ac.cn

1.軍事醫學科學院微生物流行病研究所病原微生物生物安全國家重點實驗室,北京 100071;

2010-03-28;

2010-06-18