頂空氣相色譜法測定美羅培南中有機溶劑的殘留量

宋更申，姜建國，劉紅莉，孫 婷（河北省藥品檢驗所，石家莊市 050011）

美羅培南（Meropenem）是在美國上市的第2個非腸道給藥的半合成碳青霉烯類抗生素，其對腎脫氫酶（DHP-1）穩定，在臨床上可以單獨使用。美羅培南在合成過程中，使用了甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、二氯甲烷、正丁醇等有機溶劑，但關于其有機溶劑殘留的研究，國內尚未見文獻報道。筆者根據ICH[1]的指導原則和2005年版《中國藥典》的相關規定[2]，并參考有關文獻[3]，采用頂空氣相色譜法，以水為溶劑，同時測定上述6種溶劑殘留量。結果表明，本方法簡單、準確、靈敏度高、重復性好，可用于美羅培南中有機溶劑殘留量的測定。

1 儀器與試藥

6890型氣相色譜儀、7694E型頂空進樣器均由美國Agilent公司提供；BP 211D型電子天平（德國Sartorius公司）。

美羅培南原料藥（河北巖峰醫藥科技有限公司，批號：080601、080602、080603，含量分別為98.9%、99.0%、98.9%）；甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、二氯甲烷、正丁醇均為色譜純（天津光復精細化工廠）；水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：DB-624石英毛細管柱（60 m×530 μm×1 μm）；柱溫：采取程序升溫，70℃維持10 min，以10℃·min－1的速度升至120℃，維持2 min；檢測器：氫火焰離子化檢測器（FID）；檢測器溫度：250 ℃；分流比：1∶1；進樣口溫度：200 ℃；載氣：氮氣；流速：3.0 mL·min－1；頂空進樣，平衡溫度：90 ℃，平衡時間：30 min；頂空瓶加壓時間：0.2 min；進樣時間：1 min；定量環體積：1 mL；定量環溫度：100℃；傳輸線溫度：110℃；水為溶劑。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品貯備液的制備：精密稱取甲醇60 mg、乙醇100 mg、丙酮100 mg、乙腈 8.2 mg、二氯甲烷12 mg、正丁醇100 mg，置于同一100 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得。2.2.2 對照品溶液的制備：精密量取對照品貯備液10 mL，置于100 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。精密量取對照品溶液5 mL，置于20 mL頂空進樣瓶中，密封，搖勻，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備：精密稱取本品約0.1 g，于20 mL頂空進樣瓶中，精密加水5 mL，密封，振搖使溶解，即得。

2.3 系統適用性試驗

精密量取“2.2”項下對照品、供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進行分析，記錄色譜，詳見圖1。

圖1 頂空氣相色譜圖Fig 1 Headspace GC chromatography

由圖1可知，甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、二氯甲烷、正丁醇分離良好，理論板數均不低于5 000。

2.4 標準曲線的制備

精密量取對照品貯備液10、10、5、5、5、2 mL，分別置于10、25、25、50、100、100 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取5 mL，置于20 mL頂空進樣瓶中，密封，搖勻，按“2.1”項下色譜條件進行分析，以峰面積（A）為縱坐標，濃度（C）為橫坐標，進行線性回歸，結果見表1。

表1 線性關系考察結果（n＝6）Tab 1 Linear range（n＝6）

2.5 精密度試驗

精密量取對照品溶液5 mL，置于20 mL頂空進樣瓶中，共6份，密封，搖勻，按“2.1”項下色譜條件進行分析，計算甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、二氯甲烷、正丁醇峰面積的RSD分別為1.0%、2.2%、0.9%、2.2%、1.6%、1.1%。

2.6 重復性試驗

精密稱取本品（批號：080601）約0.1g，置于20 mL頂空進樣瓶中，共6份，精密加水5 mL，密封，搖勻，按“2.1”項下的色譜條件進行分析，檢出本品中甲醇為0.1%，RSD＝1.5%；乙醇為0.4%，RSD＝1.2%；丙酮、乙腈、二氯甲烷、正丁醇均未檢出。

2.7 穩定性試驗

精密量取“2.2”項下對照品溶液，于室溫下放置0、1、2、4、8、12 h，分別按“2.1”項下色譜條件進行分析。結果，甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、二氯甲烷、正丁醇在12 h內的RSD分別為0.5%、1.1%、1.0%、1.7%、2.0%、1.2%，表明本溶液在12 h內穩定。

2.8 回收率試驗

精密稱取已知各溶劑含量的樣品（批號：080601）0.1 g，置于20 mL頂空進樣瓶中，共9份，各精密加入對照品貯備液0.4、0.5、0.6 mL，各3份，再分別用水稀釋至5.0 mL，密封，搖勻，按“2.1”項下色譜條件進行分析，以外標法計算，結果見表2。

表2 回收率試驗結果（n＝9）Tab 2 Results of recovery tests（n＝9）

2.9 最低檢出限

采用逐步稀釋法進行測定，以信噪比約為3時計算甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、二氯甲烷、正丁醇的最低檢出限。結果，最低檢出限分別為0.41、0.43、0.09、0.08、0.06、0.25 ng。

2.10 樣品中有機溶劑殘留量的測定

取3批樣品，按“2.2”項下方法制備對照品、供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進行分析，再以外標法計算6種溶劑的含量。結果，樣品中甲醇的殘留量均為0.1%，乙醇的殘留量為0.4%，其它溶劑均未檢出，均符合2005年版《中國藥典》中的相關要求。

3 討論

本文采用了頂空進樣法，可以通過控制溫度使待測溶劑有效汽化，避免了直接進樣時樣品和水對進樣口及色譜柱的污染，同時也減小了主成分對分離測定的干擾。美羅培南（陰性對照）在該頂空條件下不汽化，在色譜圖中亦無響應，不干擾殘留溶劑的測定。

筆者曾考察了不同的頂空溫度和頂空時間對樣品測定的影響。結果，樣品在70、80、90℃的頂空溫度下均穩定，為了提高檢測靈敏度，本試驗選擇90℃作為頂空溫度；本品在30、40 min的頂空平衡時間內得到的峰面積基本一致，故本試驗選擇30 min作為頂空平衡時間。

[1]周海鈞主譯.藥品注冊的國際技術要求（質量部分）[M].北京：人民衛生出版社，2001：343.

[2]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（二部）[S].2005年版.北京：化學工業出版社，2005：54～57.

[3]李珂珂，譚豐蘋.毛細管氣相色譜法測定拉米夫定中有機溶劑的殘留量[J].中國藥房，2007，18（19）：1 502.