大葉醉魚草快繁技術初探

劉 琦，陳 曄，詹壽發*

（1.九江市教研室，江西 九江 332000；2.九江學院生命科學學院，江西 九江 332000）

大葉醉魚草快繁技術初探

劉 琦1，陳 曄2，詹壽發2*

（1.九江市教研室，江西 九江 332000；2.九江學院生命科學學院，江西 九江 332000）

以廬山野生植物大葉醉魚草的莖段為材料，對芽、叢生芽及生根培養方面進行了初步的研究.結果表明：MS＋6-BA 0.5 mg/L＋NAA 0 mg/L的培養基適宜誘導醉魚草莖段芽和叢生芽生長，MS＋NAA 0.2 mg/L的培養基適宜醉魚草莖段生根.

大葉醉魚草；莖段；組織培養；快速繁殖

0 引 言

大葉醉魚草（Buddleia davidii）為馬錢科植物，別名鬧魚花，落葉灌木，既具有很好的園林觀賞價值，又具有殺蟲、殺蛆、滅孑孓等作用，因此，備受人們的關注.醉魚草屬植物中有些種容易進行人工繁殖（如種子、扦插等），但也有少數種（如大葉醉魚草）的種子在土中多年不發芽，難以繁殖[1].近年來國內一些研究者對醉魚草屬中的一些種進行了組織培養繁殖研究，以其莖段或芽作為外植體，以MS培養基作為基本培養基并添加適當濃度的細胞分裂素和生長素，可誘導出試管苗.如段新玲等[2-3]對白花和藍花大葉醉魚草進行組培快繁的研究已取得成果；曾春霞等[4]對花葉日本醉魚草進行了組織培養研究并申請了專利；陳賢等[5-6]對野生的柱穗醉魚草進行了組織培養研究，建立了植株再生和快速繁殖體系.國外研究者對大葉醉魚草的組培快繁研究也已取得成果[7]，但國內卻未見相關報道.為了進一步篩選、提取和研究大葉醉魚草中具有殺蟲活性的次生代謝產物，本文對廬山野生植物大葉醉魚草[8]進行了組織培養快繁技術的初步研究，為其開發利用提供一定的參考.

1 材料與方法

1.1 材料

大葉醉魚草一般生長于海拔20～1 000 m的山坡林緣、溝邊、水旁，在廬山及周邊地區均有分布.供試的醉魚草采自廬山山下蓮花洞國家森林公園.

1.2 實驗方法

2008年秋季在蓮花洞國家森林公園內選擇健康無病害的大葉醉魚草，采取10 cm長幼嫩的帶有飽滿側芽的醉魚草莖段帶回實驗室進行實驗.將莖段用清水沖洗3 h后用70%乙醇消毒30s，0.1%升汞消毒15min之后用無菌水沖洗3次，切取120個相同的1 cm長并帶有兩個側芽的莖段，分別接種在添加4種不同濃度激素配比的A、B、C、D組MS培養基上，配方見表1.每瓶培養基中接種3個莖段，每種培養基10瓶，培養溫度控制在（24±2）℃，每日光照持續12 h.接種后觀察統計莖段培養25 d時出芽等生長情況，并將生長25 d的單個芽體轉入繼代培養基中進行繼代增殖培養以誘導叢生芽，以后每隔30 d繼代1次.將繼代培養中苗高3～4 cm，并有3～4片展開葉的健壯小苗轉到生根培養基中誘導生根，再經過煉苗移栽，以得到完整的植株[9-12].

表1 培養基配方

2 結果與分析

2.1 無菌芽體的誘導

將經消毒過的1 cm長并帶有兩個側芽的莖段接種于A、B、C、D四組培養基中進行出芽誘導培養.接種25 d時觀察結果見表2.從表2可以看出，四種培養基中莖段的成活率均較高，且其基部都產生少量愈傷組織，但A、B組芽的誘導率明顯高于C、D組，均達到了38%以上.觀察比較發現A、B組愈傷組織塊也明顯較C、D組大，其中A組的側芽已分化出叢生芽，且較B、C、D組差異顯著.由此可見，大葉醉魚草芽誘導的培養基中最佳激素濃度配比為6-BA 0.5 mg/L＋NAA 0 mg/L.

表2 不同培養基莖段生長情況

2.2 莖段繼代培養

將2.1節中大葉醉魚草莖段誘導生成的單芽剪切成帶有1葉（非展開葉）1芽的莖段，接種于A-E、B-F、C-G、D-H四組培養基（配方見表1）中進行繼代培養.培養30～35 d，觀察發現最初轉入繼代培養時，莖段的芽體數增加緩慢，形成叢生芽的數目少，經過2～3次繼代培養后，叢生芽率逐漸增大.A-E組培養基容易誘導莖段叢生芽（叢生芽率100%）和多芽體的發生，并且呈矮小密集狀生長.表明繼代培養時，莖段逐漸適應了相應的培養條件，也可能是體內逐步積累了較多的細胞分裂素和生長素，同時也對外部環境中激素的需求有所降低[3].從表3可以看出，四組培養基中經繼代培養的莖段的成活率均達到了100%（培養30 d所統計的莖段成活率）.A-E、B-F組培養基中莖段的分化率均達到100%，但B-F組培養基的叢生芽率較低（50%）；C-G組培養基中莖段的分化率偏低，但誘導叢生芽率為75%；D-H組培養基的分化率最低，未形成叢生芽.表明高濃度6-BA和NAA的激素組合會抑制叢生芽的生長，因此A-E組培養基是大葉醉魚草莖段繼代培養較為理想的培養基，即添加激素的配比為6-BA 0.5 mg/L＋NAA 0 mg/L的MS培養基.

表3 不同培養基莖段繼代培養生長情況

2.3 生根培養

當繼代培養基中單株小苗高度達到3～4 cm并有3～4片展開葉時，即可進行生根培養.挑取長勢良好的健壯單株小苗分別接種于M、N兩種不同激素配比的生根培養基（配方見表1）中進行生根培養，30 d時觀察并統計生根情況，結果見表4.M組培養基中苗的生根率、平均根數以及最大根長均明顯高于N組培養基，其中生根率達到了100%，而N組培養基的生根率為80%.表明添加NAA濃度為0.1～0.4 mg/L的培養基均可用于誘導大葉醉魚草莖段生根，但濃度為0.2 mg/L的誘導效果最佳.

表4 不同NAA濃度對莖段生根的影響

2.4 試管苗移栽

將生根的組培苗取出組培室，煉苗1周左右后，打開瓶蓋1～2 d后取出苗（不要傷根）.洗凈瓊脂后移栽到煉苗基質中，移栽前先將基質澆足水分，移栽后澆水，完成后罩上塑料薄膜.第1周，每天用小噴霧器噴灑MS培養液（按照水與MS培養液的體積比為2:1配制）1次；1周后，移去塑料薄膜.觀察發現大葉醉魚草試管苗適應外界環境能力較強，1周后，成活率達90%以上.

3 結 語

本實驗結果表明大葉醉魚草莖段最佳芽誘導和繼代培養的培養基均為MS＋6-BA 0.5 mg/L，而較易生根的培養基則為MS＋NAA 0.2 mg/L，選擇大葉醉魚草帶芽莖段作為外植體較易誘導芽的萌發.因此，在選用適當激素配比的條件下，用組培方法可以使大葉醉魚草快速繁殖，以便滿足從大量大葉醉魚草植物中篩選、提取和研究具有殺蟲活性的次生代謝產物的需要，為開發植物型環保農藥提供一定的依據，同時可以解決園林綠地大量栽培需求的問題，也可以更好地保護廬山野生大葉醉魚草資源.

[1] 孔衛邦，孔繁才.紫花醉魚草種子萌發條件的研究[J].種子，2002（6）：8-9.

[2] 段新玲，蘇雪痕.藍花大葉醉魚草組培快速繁殖的研究[J].林業科技通訊，1999（10）：17-19.

[3] 段新玲，任歲動，于軍.白花大葉醉魚草的離體培養和植株再生[J].植物生理學報，2002（12）：533.

[4] 曾春霞，孫衛邦.花葉日本醉魚草的微型快繁[J].植物生理學通訊，2004，40（2）：199.

[5] 陳賢，楊德，關文靈.野生柱穗醉魚草組培快繁技術體系的研究（Ⅰ）外植體的誘導培養[J].云南農業大學學報， 2008， 23（1）： 19-21.

[6] 陳賢，龔元圣，楊德，等.野生柱穗醉魚草嫩芽的組培技術研究[J].西部林業科學，2007，36（4）： 74-79.

[7] Miller A.The distribution and ecology of Buddleia davidii Fr in Britain， with particular reference to condition supporting germination and the establishment of seeding[M].D Phil thesis.CNAA：Oxford Polytecnic， 1984.

[8] 詹壽發，樊有賦，王萍蘭，等.廬山野生殺蟲植物資源調查初報[J].安徽農業科學，2007，35（36）： 11 886-11 889.

[9] 季蒙.互葉醉魚草引種及繁殖栽培技術研究[J].遼寧林業科技，1996（4）：5-7.

[10]劉慶昌，吳國良.植物細胞組織培養[M].北京：中國農業大學出版社，2003.

[11]潘瑞熾.植物組織培養[M].3版.廣州：廣東高等教育出版社，2003.

[12]李成才.繁花優品醉魚草[J].園林，2002（11）：18.

Abstract：The stem sections of wild Buddleia davidii in Mountain Lushan are taken as materials to conduct a preliminary research on callus induction and the proposed method makes the stem section and root grow rapidly.The results show that,MS+6-BA 0.5 mg/L has a significant effect on Buddleia davidii callus induction and the stem section and root propagates rapidly.

Key words：Buddleia davidii； stem section； tissue culture； rapid propagation

Preliminary Research on Rapid Propagation of Buddleia Davidii

LIU Qi1， CHENYe2， ZHANShou-fa2*

（1.Jiujiang Science of Education Research Institute， Jiujiang 332000， Jiangxi， China； 2.College of Life Science，Jiujiang University， Jiujiang 332000， Jiangxi， China）

Q 945.52

B

1001-4217（2010）02-0076-05

2009-10-26

劉琦（1966-），男，江西九江人，高級教師.研究方向：生物教學和生物資源.E-mail：jjlq095@sina.com；*通訊聯系人E-mail：zhan9630@126.com

江西省教育廳科技項目（GJJ09353）