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污灌與鎘脅迫對(duì)菠菜幾種抗氧化酶活性的影響

2010-09-12 08:02:46崔宏莉解靜芳楊彪韓琦范仁俊王愛英
生態(tài)毒理學(xué)報(bào) 2010年2期
關(guān)鍵詞:影響

崔宏莉,解靜芳,*,楊彪,韓琦,范仁俊,王愛英

1.山西大學(xué)環(huán)境與資源學(xué)院,太原030006

2.山西省農(nóng)科院植物保護(hù)研究所,太原030031

污灌與鎘脅迫對(duì)菠菜幾種抗氧化酶活性的影響

崔宏莉1,解靜芳1,*,楊彪1,韓琦1,范仁俊2,王愛英1

1.山西大學(xué)環(huán)境與資源學(xué)院,太原030006

2.山西省農(nóng)科院植物保護(hù)研究所,太原030031

為了探討污水灌溉與鎘脅迫對(duì)菠菜抗氧化酶活性的影響,采用盆栽試驗(yàn)的方法,分別用清水和生活污水配制不同濃度(0、1、5、10、50mg·L-1)的Cd2+溶液,對(duì)菠菜進(jìn)行受試處理,每5d灌噴1次,共處理5次.分別采用鄰苯二酚比色法、L-苯丙氨酸比色法、水楊酸比色法和高錳酸鉀滴定法,對(duì)菠菜葉片多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)、β-1,3葡聚糖酶(β-1,3 glucanase)和過氧化氫酶(CAT)活性進(jìn)行了測(cè)定.結(jié)果表明:1)清水處理系列:隨著鎘處理濃度的增大,與清水對(duì)照相比,PPO、PAL活性呈先升高后降低的趨勢(shì),CAT活性略有升高,β-1,3葡聚糖酶活性略有降低,各暴露組與清水對(duì)照組相比,均呈現(xiàn)顯著差異(p<0.05).2)污水處理系列:隨著鎘處理濃度的增大,與污水對(duì)照相比,PPO、PAL活性呈先升高后降低的趨勢(shì),CAT和β-1,3葡聚糖酶活性呈逐漸降低趨勢(shì);各暴露組與污水對(duì)照相比,均呈現(xiàn)顯著差異(p<0.05).3)相同Cd2+濃度下,與清水處理相比,各濃度污水處理PAL和PPO活性均明顯降低(p<0.05);而β-1,3葡聚糖酶明顯升高(p<0.05).以上結(jié)果顯示:?jiǎn)我绘k污染和生活污水與鎘復(fù)合污染對(duì)菠菜不同抗氧化系統(tǒng)酶具有不同影響,這可能與污水中各成分與鎘的相互作用有關(guān).

菠菜;鎘;多酚氧化酶;苯丙氨酸解氨酶;過氧化氫酶;β-1,3葡聚糖酶

Received 11 July 2009 accepted 22 September 2009

Abstract:To explore the effects of sewage irrigation and cadmium stresses on the activities of several antioxidant enzymes of spinach,spinach was exposed to sewage and clean water irrigation in different concentrations of cadmium(0, 1,5,10,50mg·L-1)by pot experiment.PAL,PPO,β-1,3 glucanase and CAT activities of spinach leaves were measured by Catechol assay,L-phenylalanine assay,Salicy acid assay and potassium permanganate titration.Results showed that 1)The clean water treatment series:compared with the water control group,with the increasing of Cd2+concentrations,PPO and PAL activities of spinach increased at the beginning and then decreased afterwards,CAT activity of spinach slightly increased,β-1,3 glucanase activity of spinach gradually decreased,and the significant difference was observed in the treatment groups(p<0.05);2)The sewage treatment series:compared with the sewage control group,with the increasing of Cd2+concentrations,PPO and PAL activities of spinach increased at the beginning and then decreased afterwards,CAT and β-1,3 glucanase activities of spinach gradually decreased,and there was significant difference between treatment groups and control groups(p<0.05);3)Compared with the control groups,PAL and PPO activities by sewage treatments significantly decreased(p<0.05)in the same concentration of Cd2+,while β-1,3 glucanase activity significantly increased(p<0.05).Above results indicated that single pollution of Cd and combined pollution of sewage and Cd had different effects on the various antioxidant enzymes of spinach,which was relating to the interaction between Cd and composition in sewage.

Keywords:spinach;cadmium;PPO;PAL;CAT;β-1,3 glucanase

1 引言(Introduction)

利用污水進(jìn)行農(nóng)業(yè)灌溉在世界許多地方已有近百年的歷史.污水灌溉除了提供水源和豐富的營(yíng)養(yǎng)元素外,其中的有害成分也會(huì)影響農(nóng)作物品質(zhì)(Chen et al.,2005;Blanchar et al.,2001;郭鳳臺(tái)等,2008).鎘(Cd)是環(huán)境中最具危害性的重金屬元素之一,可通過工業(yè)廢水排放、化肥施用、污泥農(nóng)用、污水灌溉等途徑進(jìn)入農(nóng)田系統(tǒng),導(dǎo)致鎘在土壤中積累,影響蔬菜品質(zhì),進(jìn)而通過食物鏈對(duì)人類健康構(gòu)成威脅(納明亮等,2008).Cd污染已成為威脅土壤生態(tài)安全和制約農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的重要因素(McLaughlin et al.,1999;Adams et al., 2004;Ranieri et al.,2005).抗氧化系統(tǒng)酶在參與活性氧的清除及機(jī)體的保護(hù)性防御反應(yīng)中具有重要作用.研究表明,水體和土壤中的Cd對(duì)蔬菜抗氧化系統(tǒng)酶具有顯著影響(楊海燕等,2009;王興明等,2006).

在我們進(jìn)行污灌區(qū)重金屬污染的研究中,發(fā)現(xiàn)污灌區(qū)土壤鎘積累較多.然而目前大多數(shù)研究?jī)H局限于單獨(dú)鎘污染對(duì)蔬菜抗氧化酶活性的影響,有關(guān)污水和鎘共同作用對(duì)蔬菜抗氧化酶活性的影響尚未見報(bào)道.菠菜(Spinacia oleracea Linn)是人們?nèi)粘I钪薪?jīng)常食用的蔬菜之一,對(duì)鎘污染相當(dāng)敏感,因此,本文從食品安全角度考慮,初步探討了菠菜在污水與鎘復(fù)合情況下抗氧化酶活性的變化,以期為污水與鎘復(fù)合污染機(jī)理研究提供一定的依據(jù).該研究對(duì)污水灌溉發(fā)展、保障人們的食品安全以及促進(jìn)蔬菜生產(chǎn)可持續(xù)發(fā)展均具有積極意義.

2 材料與方法(Materials and methods)

2.1 材料

供試種子為日本大葉菠菜(Spinacia oleracea Linn),由山西省太原市瑞利種子銷售部提供.供試土壤選自太原市小店區(qū)非污灌區(qū)0~20cm的表層中壤土,土壤過1cm篩,混勻備用.供試清水取自山西省太原市小店區(qū)自來水.供試污水取自用于灌溉的山西省太原市小店區(qū)北張退水渠污水,主要為生活污水.其基本理化性質(zhì)見表1.

表1 供試污水基本理化性質(zhì)Table 1 Basic physico-chemical properties of the sewage studied

2.2 主要試劑與儀器

氯化鎘CdCl2·2.5H2O(分析純):天津市化學(xué)試劑二廠;鄰苯二酚(分析純):湘中化學(xué)試劑開發(fā)中心;聚乙烯吡咯烷酮(pvp):Solarbio公司;L-苯丙氨酸(L-Phenylalanine):Solarbio公司;昆布多糖(Laminarin):Solarbio公司;3,5-二硝基水楊酸:成都科龍化工試劑廠.

HH-8數(shù)顯恒溫水浴箱:蘇州威爾實(shí)驗(yàn)用品有限公司;Z36HK大容量高速冷凍離心機(jī):德國(guó)Hermle公司;UV-2100紫外可見分光光度計(jì):尤尼科(上海)儀器有限公司;透析袋MD34:Solarbio公司.

2.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)于2009年3月~5月在山西省農(nóng)科院溫室通過盆栽試驗(yàn)完成.試驗(yàn)用土經(jīng)篩分、裝盆(約2kg左右),澆水后,于第二天進(jìn)行播種.每盆5~6株菠菜.待菠菜出現(xiàn)第四片真葉時(shí)開始處理.分別用清水和污水配制不同 Cd2+濃度(0、1、5、10、50mg·L-1)的處理溶液,試驗(yàn)共設(shè)10個(gè)處理,每個(gè)處理4組重復(fù).每隔5d灌噴1次,每次用水400mL(其中300mL澆灌,100mL噴灑在葉面上),至收獲時(shí),共處理5次,試驗(yàn)周期從菠菜播種開始至收獲共50d.

2.4 測(cè)定方法

2.4.1 PPO活性測(cè)定

方法參考李靖等(1991).取菠菜葉片鮮重0.2g,加0.4mL蒸餾水,在冰浴中研磨,5000×g離心5min,取上清液置冰箱中保存,用于活性測(cè)定.在小試管中依次加入0.02mol·L-1鄰苯二酚溶液1.5mL,0.05mol·L-1pH 6.8磷酸緩沖液1.5mL,酶液0.01mL;另取一小試管,加前兩種溶液,加蒸餾水0.01mL,作為對(duì)照.在30℃下反應(yīng)2min,398nm波長(zhǎng)下測(cè)吸光值(A值),酶活單位為ΔA·mg-1·min-1.

2.4.2 PAL活性測(cè)定

方法參考李靖等(1991).取菠菜葉片鮮重0.05g,加0.025mol·L-1pH 8.8硼酸鹽緩沖液1mL和少許聚乙烯毗咯烷酮,冰浴中研磨,5000×g離心5min,取上清液置冰箱中保存,用于活性的測(cè)定.在小試管中依次加入1.5×10-4mol·L-1pH 8.8硼酸鹽緩沖液0.8mL,5.625×10-5mol·L-1L-苯丙氨酸0.8mL,酶液0.2mL;對(duì)照即將酶液改為蒸餾水0.2mL,其他相同.在30℃下反應(yīng)30min,在290nm波長(zhǎng)下測(cè)吸光值,酶活單位為ΔA·mg-1·min-1.

2.4.3 β-1,3葡聚糖酶活性測(cè)定

方法參考趙曉芳等(2008).取菠菜葉片鮮重4g,加20mL 0.1mol·L-1的乙酸緩沖液(pH 5.0)勻漿,于10000×g離心10min,棄去沉淀.將上清液透析過夜后,10000×g離心10min,上清液4℃冷藏.以昆布多糖還原釋放出的還原糖量測(cè)定該酶的活性.0.2mL酶液加0.2mL含量1mg·mL-1的昆布多糖(溶于上述醋酸鈉緩沖液),40℃反應(yīng)1h,然后加0.15mL DNS試劑終止反應(yīng),沸水浴煮5min,冷卻后加5.4mL去離子水,混勻,測(cè)A500值.以反應(yīng)時(shí)間零作參比,1個(gè)酶單位定義為60s內(nèi)還原昆布多糖中釋放出1mol葡萄糖量所需的酶量,單位為ΔU·mg-1·h-1.

2.4.4 CAT活性測(cè)定

方法參考李合生等(2000).取菠菜葉片鮮重2.5g,加入少量pH 7.8的磷酸緩沖液,研磨成勻漿,轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中,用該緩沖液沖洗研缽,并將沖洗液轉(zhuǎn)入容量瓶中,用同一緩沖液定容,4000×g離心15min,上清液即為過氧化氫酶的粗提液;取50mL三角瓶4個(gè)(2個(gè)測(cè)定,2個(gè)對(duì)照),測(cè)定瓶中加入酶液2.5mL,對(duì)照瓶中加入煮死酶液2.5mL,再加入2.5mL 0.1mol·L-1H2O2,同時(shí)計(jì)時(shí),于 30℃恒溫水浴中保溫 10min,立即加入 10% H2SO42.5mL;用0.1mol·L-1KMnO4標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定H2O2,至出現(xiàn)粉紅色(在30s內(nèi)不消失)為終點(diǎn).酶活性用每克鮮重樣品1min內(nèi)分解H2O2的毫克數(shù)表示:

酶活(mg·g-1·min-1)=(A-B)×VT×1.7×VS-1×t-1×W-1

式中:A:對(duì)照KMnO4滴定毫升數(shù)(mL);B:酶反應(yīng)后KMnO4滴定毫升數(shù)(mL);VT:提取酶液總量(mL);VS:反應(yīng)時(shí)所用酶液量(mL);W:樣品鮮重(g);t:反應(yīng)時(shí)間(min);1.7為 1mL 0.1mol·L-1KMnO4相當(dāng)于1.7mg H2O2,酶活單位為mg·g-1·min-1.

2.5 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,采用SPSS 11.5和Microsoft Excel軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和繪圖.

3 結(jié)果與分析(Results and analysis)

3.1 清水、污水處理系列對(duì)菠菜PPO活性的影響

清水、污水處理系列對(duì)菠菜PPO活性的影響如圖1所示.由圖1可知,1)清水處理系列:與清水對(duì)照相比,隨著鎘處理濃度的增大,PPO活性呈現(xiàn)低濃度(1mg·L-1)升高,高濃度(5~50mg·L-1)逐漸下降趨勢(shì).統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明,升高或下降均具有顯著意義(p<0.05、p<0.01、p<0.001);2)污水處理系列:隨著鎘處理濃度的增大,PPO活性同樣呈現(xiàn)低濃度升高、高濃度降低趨勢(shì),各暴露組與污水對(duì)照組均差異顯著(p<0.05、p<0.01、p<0.001).3)污水處理系列PPO活性均顯著低于清水處理系列(p<0.05、p<0.01、p<0.001),表明與清水處理系列相比,污水處理對(duì)PPO活性具有抑制作用.

圖1 清水、污水處理系列對(duì)菠菜PPO活性的影響(*、**、***:與對(duì)照組相比,p<0.05、p<0.01、p<0.001;#、##、###:污水處理與清水處理系列相比,p<0.05、p<0.01、p<0.001)Fig.1 Effects of water,sewage treatment series on PPO activity of spinach(*、**、***:compared with the control,p<0.05, p<0.01,p<0.001;#、##、###:compared with the water treatment series, p<0.05,p<0.01,p<0.001)

3.2 清水、污水處理系列對(duì)菠菜PAL活性的影響

清水、污水處理系列對(duì)菠菜PAL活性的影響如圖2所示.由圖2可知,1)隨著鎘處理濃度的增大,無論清水處理系列,還是污水處理系列,與其對(duì)照相比,PAL活性變化規(guī)律與PPO活性的變化基本一致,均呈現(xiàn)低濃度升高,高濃度降低趨勢(shì),各暴露組與對(duì)照組均差異顯著(p<0.01、p<0.001).2)相同Cd2+濃度下,污水處理系列菠菜PAL活性均顯著低于清水系列(p<0.05、p<0.01、p<0.001).

圖2 清水、污水處理系列對(duì)菠菜PAL活性的影響(**、***:與對(duì)照組相比,p<0.01、p<0.001;#、##、###:污水處理與清水處理系列相比,p<0.05、p<0.01、p<0.001)Fig.2 Effects of water,sewage treatment series on PAL activity of spinach(**、***:compared with the control, p<0.01,p<0.001;#、##、###:compared with the water treatment series,p<0.05,p<0.01,p<0.001)

3.3 清水、污水處理系列對(duì)菠菜β-1,3葡聚糖酶活性的影響

清水、污水處理系列對(duì)菠菜β-1,3葡聚糖酶活性的影響如圖3所示.由圖3可知,清水處理系列和污水處理系列對(duì)菠菜β-1,3葡聚糖酶活性的影響基本一致:與各自對(duì)照組相比,當(dāng)Cd2+濃度為1mg·L-1時(shí),β-1,3葡聚糖酶活性無顯著變化(p> 0.05);當(dāng)Cd2+濃度為5~50mg·L-1時(shí),β-1,3葡聚糖酶活性顯著降低(p<0.05、p<0.01、p<0.001);相同Cd2+濃度下,污水處理菠菜PAL活性均顯著高于清水系列(p<0.05、p<0.01).

圖3 清水、污水處理系列對(duì)菠菜β-1,3葡聚糖酶活性的影響(*、**、***:與對(duì)照組相比,p<0.05、p<0.01、p<0.001;#、##:污水處理與清水處理系列相比,p<0.05、p<0.01)Fig.3 Effects of water,sewage treatment series on β-1,3 glucanase activity of spinach(*、**、***:compared with the control,p<0.05,p<0.01,p<0.001;#、##:compared with the water treatment series,p<0.05,p<0.01)

3.4 清水、污水處理系列對(duì)菠菜CAT活性的影響

清水、污水處理系列對(duì)菠菜CAT活性的影響如圖4所示.由圖4可知,1)清水處理系列:當(dāng)Cd2+濃度為1mg·L-1時(shí),CAT活性與清水對(duì)照無顯著差異(p>0.05);當(dāng)Cd2+濃度為5~50mg·L-1時(shí),CAT活性顯著升高(p<0.05);2)污水處理系列:當(dāng)Cd2+濃度為1、5mg·L-1時(shí),CAT活性與污水對(duì)照無顯著差異(p>0.05);當(dāng)Cd2+濃度為10~50mg·L-1時(shí),CAT活性顯著降低(p<0.05);3)相同Cd2+濃度下,除對(duì)照組外,污水處理菠菜PAL活性均低于清水系列,但只有當(dāng)Cd2+濃度達(dá)10、50mg·L-1時(shí),下降具有顯著性差異(p<0.05).

圖4 清水、污水處理系列對(duì)菠菜CAT活性的影響(*:與對(duì)照組相比,p<0.05;#:污水處理與清水處理系列相比,p<0.05)Fig.4 Effects of water,sewage treatment series on CAT activity of spinach(*:compared with the control,p<0.05; #:compared with the water treatment series,p<0.05)

4 討論(Discussion)

植物受到重金屬脅迫時(shí),會(huì)造成其體內(nèi)的活性氧代謝失調(diào),破壞植物自身自由基清除系統(tǒng)的協(xié)調(diào)性,使細(xì)胞內(nèi)自由基堆積,活性氧的水平升高,引起膜脂過氧化,對(duì)膜系統(tǒng)造成傷害.但由于植物體內(nèi)存在能去除過多活性氧的抗氧化系統(tǒng)酶,因此發(fā)生重金屬脅迫時(shí),酶活性會(huì)發(fā)生變化(秦文淑等,2008).這類抗氧化系統(tǒng)酶主要包括 PPO、PAL、β-1,3葡聚糖酶和CAT等.那么重金屬與污水灌溉復(fù)合作用情況下,蔬菜體內(nèi)這些酶活性如何變化,與單一重金屬污染是否相同?引起我們的關(guān)注.為此,本文研究了含不同濃度Cd2+的清水、污水處理系列對(duì)菠菜抗氧化酶活性的影響,發(fā)現(xiàn)污水與Cd2+復(fù)合污染對(duì)菠菜不同酶活性的影響不同.污水和Cd2+復(fù)合污染,PPO、PAL和CAT酶活性均受到抑制,只有β-1,3葡聚糖酶活性比清水系列高.這可能與植物體內(nèi)各種酶的結(jié)構(gòu)、功能和生物學(xué)作用各異有關(guān).

污水性質(zhì)復(fù)雜,其中含有一定數(shù)量的有機(jī)物,污水與重金屬Cd2+復(fù)合脅迫下,這些污水中的有機(jī)物在一定程度上可以與Cd2+形成螯合物或發(fā)生物理化學(xué)反應(yīng),進(jìn)而抑制或激發(fā)酶活性發(fā)生變化.在所研究的Cd2+濃度范圍之內(nèi),無論清水處理系列還是污水處理系列,菠菜PPO和PAL的變化趨勢(shì)基本相同.均為低濃度對(duì)酶活性有刺激作用,高濃度有抑制作用.對(duì)清水系列來說,隨著鎘濃度的變化,1mg·L-1和5mg·L-1分別為其對(duì)PPO和PAL影響的敏感點(diǎn),即低于此濃度有刺激作用,高于此濃度有抑制作用.對(duì)污水系列來說,鎘與污水的復(fù)合作用,使其對(duì)PPO和PAL影響的敏感點(diǎn)均為1mg·L-1.這可能是是因?yàn)榈蜐舛鹊腃d2+會(huì)造成植物體內(nèi)的活性氧增多,而PPO和PAL可催化氧化物,從而有效阻止氧化物的積累,限制這些氧化物自由基對(duì)膜脂過氧化的啟動(dòng)(Scandalios et al., 1993),因而酶活性顯著上升.但隨著Cd2+濃度的進(jìn)一步增大,植物處于極端脅迫條件下,本身的抗氧化系統(tǒng)的協(xié)調(diào)性逐漸喪失,酶活性開始下降.對(duì)于抗氧化酶活性隨重金屬濃度的增加呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì),在許多研究中也有報(bào)道,如史吉平等(1996)和Fayiga(2004)等.與同濃度的清水系列相比,同樣鎘濃度的污水處理對(duì)PPO和PAL活性均有抑制作用.這可能是因?yàn)槲鬯泻卸喾N有害成分(表1),與鎘產(chǎn)生協(xié)同作用,對(duì)菠菜造成了更嚴(yán)重的脅迫,導(dǎo)致PPO和PAL活性的進(jìn)一步減小.

β-1,3葡聚糖酶活性的變化不同于 PPO和PAL,無論清水處理系列還是污水處理系列,均隨著鎘濃度的增大,呈現(xiàn)下降趨勢(shì),但同濃度的污水處理系列較清水處理系列酶活性高,這一方面可能與該酶在菠菜體內(nèi)的活性較高有關(guān),另一方面也可能與該酶的結(jié)構(gòu)、功能以及生物學(xué)作用不同有關(guān).其詳細(xì)的機(jī)制有待進(jìn)一步研究.

CAT是植物細(xì)胞內(nèi)起清除過氧化氫(H2O2)作用的一種活性酶,它參與清除H2O2的積累來維持細(xì)胞內(nèi)H2O2的正常水平.主要是把H2O2分解成水和氧氣(2H2O2→2H2O+O2),植物組織中高濃度的H2O2主要靠CAT清除,其活性是H2O2轉(zhuǎn)化的重要信號(hào).對(duì)于單一的鎘污染,隨著鎘濃度的增大,CAT酶活性呈增高趨勢(shì),這是因?yàn)殒k對(duì)菠菜造成了脅迫,體內(nèi)積累了過多的H2O2,激發(fā)體內(nèi)產(chǎn)生了CAT酶,來清除過多的H2O2;但污水與鎘復(fù)合污染,CAT酶活性明顯受到抑制,說明污水與鎘的協(xié)同作用可能對(duì)CAT活性的產(chǎn)生機(jī)制產(chǎn)生了阻礙作用.

綜上所述,污水灌溉與鎘的復(fù)合作用與單獨(dú)鎘污染對(duì)蔬菜抗氧化酶的影響具有一定差異,在實(shí)際污灌條件下,這種復(fù)合作用更為常見,其對(duì)植物和農(nóng)作物的影響值得進(jìn)一步深入研究.

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Effects of Sewage Irrigation and Cadmium Stresses on the Activities of Several Antioxidant Enzymes of Spinach

CUI Hong-li1,XIE Jing-fang1,*,YANG Biao1,HAN Qi1,F(xiàn)AN Ren-jun2,WANG Ai-ying1
1.College of Environment and Resource,Shanxi University,Taiyuan 030006
2.Institute of Plant Protection,Shanxi Academy of Agricultural Sciences,Taiyuan 030031

1673-5897(2010)2-274-06

X131.3

A

解靜芳(1961—),女,山西臨猗人,博士,教授,碩士生導(dǎo)師,主要從事環(huán)境化學(xué)毒理學(xué)、環(huán)境有機(jī)污染物監(jiān)測(cè)與分析,環(huán)境有機(jī)污染物結(jié)構(gòu)與活性關(guān)系研究,發(fā)表相關(guān)研究論文30余篇.主要研究方向:環(huán)境化學(xué)與毒理學(xué).Tel:0351-7018807.

2009-07-11 錄用日期:2009-09-22

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.30740037);太原市環(huán)保局資助項(xiàng)目

崔宏莉(1984—),女,碩士研究生;*通訊作者(Corresponding author),E-mail:xiejf@sxu.edu.cn

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