反相高效液相色譜法測定多索茶堿血濃度

林 玳，鄭懷宇

(浙江省舟山醫院城北院區藥劑科，浙江 舟山 316000)

多索茶堿是一種新型的甲基黃嘌呤衍生物，具有平喘、抗炎和鎮咳作用，療效較茶堿強，不良反應較茶堿少。其血藥濃度測定多采用高效液相色譜法，但條件各異。筆者參照有關文獻[1-4]，并經多次試驗，最終確定用反相高效液相色譜法，以苯巴比妥作內標，乙腈-水為流動相，采用梯度洗脫方法對血清中多索茶堿濃度的測定方法進行改進研究，并對用藥患者進行多索茶堿血濃度的測定，效果很好，報道如下。

1 儀器與試藥

Beckman Coulter高效液相色譜儀，包括125泵、166檢測器。乙醚(分析純，上海化學試劑總廠，批號為070901);乙腈為高效液相色譜淋洗液(國藥集團化學試劑有限公司，批號為20090413);多索茶堿(浙江北生藥業有限公司，批號為070901，純度大于99%);苯巴比妥(上海新亞藥業有限公司，批號為081003，純度大于98.5%);水為純化水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:Ultrasphere C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，Ultrasphere C18保護柱(45 mm×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈-水，0～8 min為17%乙腈，8～9 min為17%乙腈-45%乙腈，9～15 min為 45%乙腈，15～18 min為45%乙腈-17%乙腈;流速:1.0 mL/min;柱溫:室溫;檢測波長:210 nm;進樣量:20 μL。

2.2 血樣處理

取血清100 μL置具塞試管中，加內標液 20 μL，混勻，加乙醚 5 mL，旋渦混合2 min，放置 15 min，以 4 000 r/min 轉速離心15 min，取乙醚提取液4 mL，置離心管中，氮吹揮干乙醚，用50%乙腈100 μL復溶，進樣測定，高效液相色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 方法學考察

標準曲線繪制:精密稱取苯巴比妥適量，配成質量濃度為40 mg/L的溶液，作為內標液;精密稱取多索茶堿適量，用甲醇配成質量濃度為500 mg/L的溶液，吸取0.15 mL至試管中，用氮氣吹干甲醇，加3 mL空白血漿超聲復溶，再用空白血漿依次稀釋成 25.00，12.50，6.25，3.125，1.56，0.78，0.39 mg/L的多索茶堿標準血樣，按血樣處理方法處理含多索茶堿的標準血樣。結果多索茶堿質量濃度在0.39～25.00 mg/L范圍內，與多索茶堿跟內標峰面積比值的線性關系良好，回歸方程為 Y=7.509 8 X-0.130 0，r=0.999 8(n=7)。多索茶堿的最低檢測濃度為0.2 mg/L(S/N≥3)。

回收率與精密度試驗:選用0.78，6.25，25.00 mg/L不同質量濃度的對照品溶液進行回收率與精密度測定(n=5)。結果見表1。

2.4 樣品檢測

對臨床靜脈滴注多索茶堿注射液0.2 g+0.9%氯化鈉注射液100 mL的6例患者，于滴注完畢后15 min取靜脈血進行測定，測得質量濃度分別為 5.54，4.67，4.40，3.40，0.78，0.59 mg/L，平均3.23 mg/L，與有效質量濃度5～20 mg/L有一定的差距，與文獻[2，4]報道的基本一致。1例患者靜脈滴注多索茶堿注射液0.2 g，20 h后取血測定，測得血藥濃度為0.64 mg/L。這些均提示臨床用藥劑量與方法有待改進。可以確定的是，患者合用的茶堿、二羥丙茶堿、甲強龍、氫化潑尼松、地塞米松、氨溴索、多潘立酮、頭孢呋辛、頭孢西丁、頭孢唑肟、阿奇霉素、卡巴克洛、非洛地平、維生素C、維生素B6對測定均無干擾。

表1 多索茶堿的回收率、日內和日間精密度試驗結果(n=5)

3 討論

反相高效液相色譜法能很好地分離多索茶堿、內標、血漿雜質及茶堿，其線性范圍、回歸系數、回收率和日內、日間精密度的 RSD均符合生物樣本分析方法的要求，可用于多索茶堿血濃度的測定。

文獻報道的內標有咖啡因、茶堿、苯巴比妥，有些食物含咖啡因。茶堿為多索茶堿的微量代謝物，作為內標不合適，因此選用與多索茶堿合用幾率很小的苯巴比妥作為內標。選用乙腈-水作為流動相，在乙腈-水的體積比為17∶83時多索茶堿與血漿雜質、茶堿分離較好，保留時間適宜，但與巴比妥的保留時間相差大。在多索茶堿出峰后提高流動相中乙腈的比例，可使苯巴比妥出峰時間提前并縮短分析時間。

致謝:衷心感謝舟山醫院呼吸內科李略副主任醫師對多索茶堿血濃度測定工作的支持！

[1]陳錦珊，杜青云，黃惠麗，等.反相高效液相色譜法測定血清中多索茶堿濃度[J].海峽藥學，2003，15(4):28.

[2]王淑群，吳歷峰，熊建華，等.HPLC法測定血清中多索茶堿濃度[J].中國臨床藥學雜志，2003，12(6):347.

[3]付世江，霍寶方，孫吉臻，等.口服多索茶堿片Ⅰ期臨床試驗研究[J].中國臨床藥理學雜志，1998，14(4):222.

[4]孔秋芹，楊水新.茶堿類藥物的血藥濃度監測方法與應用[J].福建醫藥雜志，2005，27(6):149.