頂空毛細管氣相色譜法測定醋酸氯地孕酮中有機溶劑殘留量

張曉川，李志浩

(鄖陽醫學院附屬東風醫院藥劑部，湖北 十堰 442008)

為保護患者免受藥物中殘留有機溶劑的傷害，須對藥品生產過程中引入的有機溶劑殘留量進行檢測[1]。醋酸氯地孕酮為口服強效孕激素，并無雌激素和雄激素活性，其抗排卵作用為炔諾酮的18.4倍，與長效雌激素炔雌醚配伍組成復方炔雌醚片，可作為長效口服避孕藥。該藥物在合成過程中使用了乙醇、氯仿和N，N-二甲基甲酰胺(DMF)等有機溶劑，這些有機溶劑殘留量超標將影響藥品質量和用藥安全。目前，對殘留溶劑的測定多采用氣相色譜法[2]。筆者采用毛細管色譜柱、頂空進樣、程序升溫法同時測定醋酸氯地孕酮中3種有機溶劑殘留量，并進行了方法學考察，報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 6890N型氣相色譜儀(氫離子火焰檢測器);AEU-210型電子天平(d=0.1 mg，日本島津)。醋酸氯地孕酮精制品(武漢三晶化工有限公司，批號為 080703，080705，080710);乙醇、DMF、氯仿為分析純，水為雙蒸水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:HP-5毛細管柱(30 m ×0.32 mm，0.25 μm);分流比:10∶1;柱溫:60℃(5 min，30℃ /min)→200℃;瓶溫:80℃，平衡時間為30 min;載氣:氮氣;流速:1.0 mL/min;進樣口溫度:210℃;檢測器溫度:250℃;氫氣流速:45.0 mL/min;空氣流速:400.0 mL/min;尾吹:25.0 mL/min;進樣量:1 μL。

2.2 溶液制備

分別取乙醇、氯仿和DMF適量，精密稱定，用水稀釋成質量濃度分別為2.682，0.047，0.763 g/L的混合溶液A[質量濃度設計參照2005年版《中國藥典(二部)》規定的有機溶劑殘留限度及預試驗結果]。精密量取5 mL混合溶液A，置100 mL量瓶中，用水定容，搖勻，得混合溶液B。取醋酸氯地孕酮原料藥約0.2 g，精密稱定，置頂空進樣瓶中，精密加水2 mL使溶解，加蓋，密封，作為供試品溶液。

2.3 方法學考察

線性關系考察:分別精密量取1，3，5，8，10mL對照品混合溶液A，置25 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻。分別精密量取2 mL，置頂空進樣瓶中，密封，進樣檢測。以峰面積(A)對質量濃度(C)進行線性回歸。乙醇、氯仿和DMF的回歸方程分別為 A=873.82 C+3.741(r=0.999 9)，A=2 074.32C+0.408(r=0.999 1)，A=123.78C+1.054(r=0.999 7)，線性范圍分別為 0.107 3～1.072 8 g/L，0.001 9～0.018 8 g/L，0.030 5～0.305 2 g/L。

最低檢測限確定:將質量濃度最低的對照品溶液逐步稀釋，按上述色譜條件取1 μL進樣檢測，按基線噪音的3倍(S/N≈3)計算。結果乙醇、氯仿及 DMF的最低檢測限分別為1.082，1.275，16.84 μg/mL。

精密度試驗:精密量取2 mL對照品混合溶液B，共6份，分別置頂空進樣瓶中，密封，按以上色譜條件進樣測定。再精密量取2 mL混合溶液B，共6份，分別置頂空進樣瓶中，密封，按以上色譜條件連續3 d測定中間精密度。結果乙醇、氯仿及DMF日內精密度的RSD分別為2.4%，1.8%，2.2%(n=6);日間精密度的 RSD分別為 4.8%，3.9%，5.2%(n=6)。

加樣回收試驗:取已測定乙醇、氯仿、DMF含量的醋酸氯地孕酮約0.1 g，精密稱定，共5份，分別置頂空進樣瓶中，各精密加入2 mL混合對照品溶液B，按上述色譜條件測定。結果乙醇、氯仿及DMF的平均回收率分別為101.7%，92.8%，104.6%;RSD分別為2.3%，2.9%，1.8%(n=5)。

2.4 樣品檢測

取樣品3批，照2.2項下方法制備供試品溶液，按2.1項下色譜條件測定有機溶劑殘留量，記錄色譜圖(圖1);按外標法以峰面積計算殘留量，結果見表1。

3 討論

采用頂空進樣法可提高有機物檢出的靈敏度和準確度，從而更加嚴格地控制藥物中有機溶劑的殘留量，提高藥品質量。醋酸氯地孕酮在水中的溶解度較好，采用本法時水不影響待測溶劑的檢測，故用水作溶劑。

圖1 氣相色譜圖

表1 樣品中有機溶劑殘留量測定結果(%，n=3)

考慮到待測有機溶劑殘留溶劑的沸點均小于80℃，故將頂空瓶加熱溫度選為80℃;在此條件下，對頂空瓶平衡時間進行篩選，發現平衡30 min后，峰面積基本不再改變，因此選擇在80℃下平衡30 min。

藥品中有機溶劑殘留種類因生產工藝不同而異。文中各有機溶劑限度均參照了人用藥品注冊技術規范國際協調組織(ICH)[3]和2005年版《中國藥典(二部)》[4]，氯仿和 DMF列為Ⅱ類有機溶劑，乙醇列為Ⅲ類有機溶劑，安全限度分別為0.006%，0.088%，0.5%。從3批樣品測定結果來看，均符合2005年版《中國藥典(二部)》的限度要求。

采用頂空毛細管氣相法測定醋酸氯地孕酮中3種有機溶劑殘留量，色譜分離良好，無干擾，精密度符合2005年版《中國藥典(二部)》的規定，方法準確、可靠、快速、簡便。

[1]王 衛.藥品中有機溶劑殘留量及其測定[J].天津藥學，2001，13(3):26-27.

[2]王翰華，王向軍，曾 蘇，等.頂空毛細管氣相法測定雞肝散提取物中有機溶劑殘留量[J].藥物分析雜志，2008，28(2):267-269.

[3]李 眉，馬玉楠.簡介ICH關于藥品中溶劑殘留量的指導原則[J].中國藥師，1998，1(3):119-120.

[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:化學工業出版社，2005:附錄54.