穿黃消炎膠囊的制備及質量標準研究

狄永良

(江蘇省溧陽市中醫院，江蘇 常州 213300)

穿黃消炎膠囊由穿心蓮和一枝黃花組成[1]，具清熱解毒之功效，用于治療急性上呼吸道感染、急性扁桃體炎、咽喉炎等熱毒壅盛證，穿心蓮內酯與脫水穿心蓮內酯為其主要有效成分，為進一步嚴格控制質量，筆者對其質量標準進行了補充研究，現報道如下。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀(日本島津)，包括LC-10ATVP型溶劑輸送泵，SPD-10AVP型紫外-可見檢測器;HW-2000型色譜工作站(南京千譜軟件有限公司)。脫水穿心蓮內酯對照品(批號為110854-200705)，穿心蓮內酯對照品(批號為110797-200707)，穿心蓮對照藥材(批號為121082-200702)，一枝黃花對照藥材(批號為121433-200801)，均購自中國藥品生物制品檢定所;硅膠G和GF254(薄層色譜用，青島海洋化工廠);甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 處方和制備

處方:穿心蓮750 g，一枝黃花1 250 g，淀粉116 g，制成1 000粒。

制備:按處方量取以上2味藥材，將穿心蓮200 g粉碎成細粉，其余穿心蓮與一枝黃花一起加水煎煮2次，第1次2h，第2次1.5 h，合并煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.14～1.16(85℃)的清膏，放冷，加乙醇成含醇量為60%，攪拌，靜置48 h，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.31～1.35(60～80℃)的稠膏，加入上述穿心蓮細粉及淀粉，混勻，干燥，粉碎成細粉，混勻，裝入膠囊，即得。

2.2 一般質量控制

性狀:本品為膠囊劑，內容物為灰綠色的粉末，味苦。

檢查:應符合2005年版《中國藥典(一部)》附錄ⅠD膠囊劑項下各有關規定。

2.3 薄層色譜鑒別

穿心蓮:參考穿黃消炎片質量標準和2005年版《中國藥典(一部)》[2]穿心蓮項下鑒別方法。取本品內容物1 g，加乙醇20 mL，加熱回流30 min，濾過，濾液濃縮至1 mL，即得供試品溶液。取穿心蓮對照藥材1 g，按供試品溶液制備方法制備，即得對照藥材溶液。取脫水穿心蓮內酯、穿心蓮內酯對照品，加無水乙醇制成每1 mL各含1 mg的混合溶液，即得對照品溶液。取不含穿心蓮的陰性樣品1 g，按供試品溶液制備方法制備，即得陰性對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述4種溶液各5 μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠GF254薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯(4∶5)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254 nm)下檢視。結果供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜和對照品溶液色譜相應位置上分別顯相同顏色的斑點，陰性對照品溶液無干擾(圖 1 A)。

一枝黃花:取本品內容物4 g，加甲醇-水(1∶1)60 mL加熱回流1 h，趁熱濾過，濾液濃縮至約20 mL，加水10 mL，再加稀硫酸約0.5 mL，繼續回流1 h，放冷，用醋酸乙酯振搖提取2次，每次30 mL，合并醋酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，即得供試品溶液。取一枝黃花對照藥材6 g，按供試品溶液制備方法制備，即得對照藥材溶液。取不含一枝黃花的陰性樣品4 g，按供試品溶液制備方法制備，即得陰性對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述3種溶液各10 μL，分別點于用1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上以甲苯-醋酸乙酯 -甲酸(5∶4∶1)為展開劑，噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，熱風吹干置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上顯相同顏色的熒光主斑點，陰性對照品溶液無干擾(圖 1 B)。

圖1 薄層色譜圖

2.4 含量測定[3]

2.4.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱:Shim-packVP-ODS柱(150mm×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇 -水(55 ∶45);檢測波長:250 nm;流速:1.0 mL/min;靈敏度:0.02 AUFS。在上述條件下，脫水穿心蓮內酯和樣品中其他組分色譜峰達到基線分離，理論板數按脫水穿心蓮內酯峰計算應不低于4 000。色譜圖見圖2。

2.4.2 溶液制備

取本品內容物適量，混勻，取約1 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入40%甲醇 50 mL，稱定質量，浸泡 1 h，超聲(功率160 W，頻率40 kHz)處理30 min，放冷，再稱定質量，用40%甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，精密量取續濾液10 mL，置中性氧化鋁柱(200～300 目，5 g，內徑 1.5 cm)上，用甲醇20 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解，轉移至10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，取續濾液，即得供試品溶液。取不含穿心蓮的陰性樣品，同法制備陰性對照品溶液。精密稱取脫水穿心蓮內酯對照品15.0 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液;精密吸取該液適量，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

圖2 高效液相色譜圖

2.4.3 方法學考察

干擾試驗:分別吸取供試品溶液、陰性對照品溶液及對照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，進行測定。結果色譜圖中在脫水穿心蓮內酯峰位置無其他干擾出現(圖2)。

標準曲線制備:分別精密吸取對照品貯備液 1，2，3，4，5 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，吸取10 μL，注入高效液相色譜儀測定峰面積。以對照品質量濃度(X)對峰面積積分值(Y)進行線性回歸，得回歸方程 Y=7 673 873.333 33 X-7 858.6，r=0.999 9(n=5)。結果表明，脫水穿心蓮內酯質量濃度在0.03～0.15 g/L范圍內與峰面積積分值有良好的線性關系。

精密度試驗:精密吸取對照品溶液(0.12 g/L)10 μL，按上述色譜條件，連續進樣6次。結果平均峰面積積分值為918 952，RSD=0.54%(n=6)，表明方法精密度良好。

穩定性試驗:精密吸取同一批(批號為080101)供試品溶液，按上述色譜條件，分別在 0，1，2，3，4，5，6，7，8，24 h 時進樣測定。結果平均峰面積積分值為795 830，RSD=0.53%(n=10)，表明供試品溶液24 h內基本穩定。

重復性試驗:取同一批(批號為080101)供試品，按樣品含量測定方法操作，平行制備5份，按上述色譜條件測定含量。結果脫水穿心蓮內酯平均含量為1.99 mg/粒，RSD=1.3%(n=5)，表明方法重復性良好。

加樣回收試驗:精密稱取已知含量的樣品(批號為080101，含量為1.99 mg/粒)適量，精密加入質量濃度為0.5 g/L的脫水穿心蓮內酯對照品溶液5 mL，依法測定其含量，計算回收率。結果見表1。

2.4.4 樣品含量測定

分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液10 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積，計算含量。結果見表2。根據10批樣品的檢測結果，結合穿黃消炎片標準中脫水穿心蓮內酯含量測定限度規定，暫訂本品每粒含穿心蓮以脫水穿心蓮內酯(以C20H28O4計)不得少于1.40 mg。

表1 脫水穿心蓮內酯加樣回收試驗結果(n=5)

表2 樣品含量測定結果(n=10)

3 討論

對脫水穿心蓮內酯對照品的甲醇溶液進行紫外掃描，發現其在250 nm波長處有強吸收，與2005年版《中國藥典(一部)》中穿心蓮含量測定項下脫水穿心蓮內酯檢測波長254 nm接近，故選擇250 nm作為檢測波長。

脫水穿心蓮內酯易溶于甲醇、乙醇或含水甲醇、含水乙醇，故樣品制備可采用一定濃度的甲醇或乙醇作為提取溶劑。原穿黃消炎片質量標準中含量測定項下樣品制備采用70%乙醇浸漬過夜，因脂溶性成分和葉綠素較多，故采用正己烷振搖提取，脫去脂溶性成分和葉綠素，處理步驟較煩瑣。參考2005年版《中國藥典(一部)》穿心蓮藥材含量測定項下樣品制備方法，采用40%甲醇超聲提取，脂溶性成分和葉綠素提出較少，可省去正己烷振搖提取脫脂溶性成分和葉綠素步驟。對供試品溶液制備過程中超聲時間(15，30，45，60 min)及柱洗脫溶劑體積(10，20，30，40 mL)分別進行考察，結果超聲提取30 min、洗脫溶劑用量為20 mL時含量基本不再增加，最終確定超聲時間為30 min，柱洗脫用甲醇體積為20 mL。

曾參考原穿黃消炎片質量標準項下一枝黃花的鑒別進行試驗，供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照品溶液無干擾。但供試品溶液和對照藥材溶液色譜清晰度均較差，經加大點樣量，斑點仍不夠清晰。色譜照片較難拍攝清晰。改用文中所述方法進行試驗后，熒光斑點清晰易辨。

[1]中華人民共和國衛生部藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:人民衛生出版社，1977:1.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學工業出版社，2005:189-190.

[3]WS-11053(ZD-1053)-2002，國家中成藥標準匯編(中成藥地方標準上升國家標準部分)內科肺系(一)分冊[S].