雪貂葡萄球菌的分離與鑒定

張麗芳，佟 巍，劉先菊，代小偉，王艷蓉，劉云波

(中國醫學科學院北京協和醫學院醫學實驗動物研究所 衛生部實驗動物檢測中心，北京 100021)

雪貂葡萄球菌的分離與鑒定

張麗芳，佟 巍，劉先菊，代小偉，王艷蓉，劉云波

(中國醫學科學院北京協和醫學院醫學實驗動物研究所 衛生部實驗動物檢測中心，北京 100021)

目的 對雪貂分離菌株進行鑒定。方法 通過菌落、菌體形態、生化特征等細菌學檢測方法和藥敏實驗對所分離菌株進行鑒定。結果 根據生物學特性和藥敏實驗確定所分離菌株為金黃色葡萄球菌和中間葡萄球菌。結論 分離菌株為金黃色葡萄球菌和中間葡萄球菌。

金黃色葡萄球菌;中間葡萄球菌;鑒定;雪貂

1 材料

1.1 材料

1.1.1 培養基及試劑:營養瓊脂培養基、MH肉湯培養基及微量生化管由陸橋生物技術公司提供，藥敏紙片購自北京天壇藥物生物技術開發公司。

1.1.2 菌株:金黃色葡萄球菌26003，本室保存。

2 方法

2.1 細菌學檢測

2.1.1 觸片染色鏡檢 :雪貂眼部分泌物觸片，染色鏡檢。

2.1.2 分離培養:無菌棉簽蘸取眼內黃色分泌物接種血瓊脂平板，37℃培養18～24 h，挑可疑菌落純培養并涂片鏡檢。

2.1.3 生化鑒定:取純培養物接種相關微量生化管37℃培養18～24 h觀察結果。

2.2 藥敏試驗

參照文獻［1］進行。

2.3 血漿凝固酶試驗

參照文獻［2］，金黃色葡萄球菌26003作為質控菌株。

3 結果

3.1 細菌學檢測

3.1.1 觸片染色鏡檢:眼部分泌物姬姆薩染色可見藍紫色葡萄球菌。

3.1.2 形態特征:血平板上出現兩種菌落，一種白稍黃(SA)，一種白色(SI)，直徑均為1mm左右，圓形，凸起，邊緣整齊，光滑濕潤，菌落周圍有明顯 β溶血環，兩種菌落分別涂片革蘭染色鏡檢，均可見革蘭陽性球菌，呈葡萄狀排列。

3.1.3 生化特征:見表1。

表1 分離菌株生化實驗結果Tab.1 The biochemical characteristics of the isolated strains

3.2 藥敏結果 見表2

表2 分離菌株藥敏實驗結果Tab.2 Sensitivity test of the isolated strains

“S”:敏感 “R”:耐藥Note:“S”:Sensitive; “R”:Resistant

綜上所述，通過菌落菌體形態、生化反應結果和藥敏試驗，確定從雪貂眼部分泌物中分離到的菌株分別為金黃色葡萄球菌和中間葡萄球菌。

4 討論

本研究通過菌落菌體形態、生化反應結果和藥敏試驗，確定從雪貂眼部分泌物中分離到的菌株分別為金黃色葡萄球菌和中間葡萄球菌。

葡萄球菌(Staphyloccocus)廣泛分布于自然界，空氣、土壤、水、物品及人和動物的皮膚及與外界相通的腔道中均有，能引起皮膚黏膜、多種組織器官的化膿性炎癥。葡萄球菌分為金黃色葡萄球菌、腐生葡萄球菌和表皮葡萄球菌等20多種，其中常見的動物致病菌有金黃色葡萄球菌、金黃色葡萄球菌厭氧亞種、中間葡萄球菌及豬葡萄球菌，其中金黃色葡萄球菌作為條件致病菌已列為SPF級嚙齒類實驗動物必須排除的致病菌［3］，中間葡萄球菌是動物源性細菌，近年來成為人類(尤其是動物愛好者)感染常見的葡萄球菌，已有動物傳染給人中間葡萄球菌的確切證據［5］。實驗動物國家標準中將β溶血，血漿凝固酶陽性和甘露醇陽性作為鑒別金黃色葡萄球菌的特征性生化指標［2］，血漿凝固酶陽性，甘露醇陰性的葡萄球菌又被視為金黃色葡萄球菌一種變種［4］。中間葡萄球菌具有 β溶血，血漿凝固酶陽性，甘露醇不確定的生化特征，與金黃色葡萄球菌極易混淆，自1976年將中間葡萄球菌從金黃色葡萄球菌中分出，列為葡萄球菌的一個新種，已有多篇報道研究二者的鑒別方法［6，7］。金黃色葡萄球菌3-羥丁酮、透明質酸酶陽性，多粘菌素耐藥是與中間葡萄球菌區別的主要生化指標。本研究通過透明質酸酶和多粘菌素兩項指標區別2種葡萄球菌。

本研究中分離的金黃色葡萄球菌菌落白色稍黃，中間葡萄球菌為白色，但依據菌落顏色不能區別金黃色葡萄球菌與中間葡萄球菌。金黃色葡萄球菌產色素，中間葡萄球菌不產色素，金黃色葡萄球菌菌落色澤依菌株而異，呈白色、檸檬色、或黃色，由于實驗人員的主觀判斷因素常見中間葡萄球菌被描述為黃色菌落。

金黃色葡萄球菌可引起嚙齒類實驗動物多種化膿性疾病，包括化膿性結膜炎和角膜炎，中間葡萄球菌的致病性未見報道，不排除中間葡萄球菌的可能性。作者認為在今后的金黃色葡萄球菌鑒定工作中應考慮中間葡萄球菌。

雪貂由于獨特的生理解剖結構已廣泛應用于病毒學、生殖生理、藥理學等研究，逐漸實驗動物化，國外已開展雪貂實驗動物化及相關條件標準化的研究，如美國Taconic公司已制定了雪貂微生物和寄生蟲學檢測標準，而我國尚未制定雪貂的國家及地方質量控制標準。本文從雪貂中分離到金黃色葡萄球菌和中間葡萄球菌為雪貂微生物檢測提供了理論依據。

［1］朱忠勇，主編.實用醫學檢驗學［M］.北京:人民軍醫出版社.1992:543－549.

［2］中華人民共和國國家標準.GB/T14926-2001實驗動物微生物學檢測方法(2)［S］.北京:2001.

［3］中華人民共和國國家標準.GB/T14922.2-2001實驗動物微生物學等級及檢測［S］，北京:2001.

［4］陸承平，主編.獸醫微生物學(第3版)［M］.北京:中國農業出版社.2002:200－204.

［5］Tanner MA.， Everett CL， Youvan DC.， et al， Molecular phylogenetic evidence for noninvasive zoonotic transmission of Staphylococcus intermedius from a canine pet to a human［J］J Clin Microbiol，2000，38(4):1628－1631.

［6］Roberson JR，Fox LK，Hancock D D，et al.Evaluation of methods for differentiation of coagulase-positive staphylococci［J］1992，J Clin.Microbiol，30:3217－3219.

［7］Wakita Y，Wano JK，Shimazu A，et al，Development of a PCR test for the identification of Staphyloccocus intermedius based on the 16S rDNA sequence［J］.J Vet Med Sci，2002，64(7):603－605.

Identification of the Staphylococcus Strains Isolated from Ferret

ZHANG Li-fang，TONG Wei，LIU Xian-ju，DAI Xiao-wei，WANG Yan-rong，LIU Yun-bo
(Institute of Laboratory Animal Science，Chinese Academy of Medical Sciences(CAMS)＆ Peking Union Medical Collage(PUMC)，Monitoring Center for Laboratory Animals of Ministry of Health，Beijing 100021，China)

Objective To detect and identify the bacterial stains isolated from ferrets.Methods Identification of the stains according to their colony shape，thallus features，biochemical characteristics and their sensitivity to medications.Results The biochemical characteristics and drug sensitivities of the isolated strains were consistent with S.aureus and S.intermedius.Conclusions The bacterial stains isolated from ferrets are S.aureus and S.intermedius.

Staphylococcus aureus，Staphyloccocus intermedius，Identification，Ferret北京某動物室實驗用雪貂眼部出現膿性分泌物，送我們實驗室進行細菌學檢測，通過菌落、菌體形態、生化特征等細菌學檢測方法和藥敏實驗對所分離菌株進行鑒定，確定為金黃色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus，S.aureus)和中間葡萄球菌(Staphyloccocus intermedius，S intermedius)混合感染所導致的細菌性疾病，現報告如下。

R-33

A

1671-7856(2010)08-0050-03

2010-03-08

中央級公益性科研院所基本科研業務費專項資金項目(DWS200906)。

張麗芳(1971－)，女，助理研究員，研究方向:實驗動物微生物學。

劉云波(1962－)，男，研究員，Email:liu-yunbo@263.net。