親子鑒定中男性個體Amelogenin基因座X片斷缺失一例報道

胡錫階，劉祖林，萬衛紅

(1.遵義醫學院附屬醫院貴州省細胞工程重點實驗室；2.遵義醫學院附屬醫院法醫學鑒定中心法醫物證鑒定技術室，貴州遵義563003)

親子鑒定中男性個體Amelogenin基因座X片斷缺失一例報道

胡錫階1，2，劉祖林1，2，萬衛紅1，2

(1.遵義醫學院附屬醫院貴州省細胞工程重點實驗室；2.遵義醫學院附屬醫院法醫學鑒定中心法醫物證鑒定技術室，貴州遵義563003)

男性個體；Amelogenin基因座；X片斷缺失；報道

我鑒定中心對親子鑒定案例進行鑒定分析時，檢出1例男性個體Amelogenin基因座X片斷缺失，其STR分型圖上只存在Y染色體Amelogenin擴增產物，而無X染色體Amelogenin特異性擴增產物，出現AMELX等位基因缺失，現報道如下。

1 對象和方法

1.1 對象親子鑒定受檢者爭議父37歲(實驗室編號：2008-0035-1),子5歲(實驗室編號：2008-0035-2)。

1.2 方法DNA的提取采用固相法提取，檢材為EDTA-K2抗凝靜脈血；試劑為Qiagen公司的Generation Capture Column；用美國ABI公司的產品AmpFlSTR誖IdentifilerTM試劑分別對15個STR基因座(D8S1179、D21S11、D7S820、CSF1PO、D3S1358、TH01、D13S317、D16S539D、2S1338、D19S433、vWA、TPOX、D18S51、D5S818、FGA、)和1個性別基因座Amelogenin按技術手冊所給條件進行PCR復合擴增，3100 Avant遺傳分析儀進行電泳分離，并通過GeneScan Software V3.7軟件、Genotyper Software V3.7軟件進行DNA的STR基因分型。后加做Promega公司的PowerPlex16體系,除Amelogenin等相同基因座外，增加其獨有的Penta D、Penta E基因座，使檢測基因座增加到17個。等位基因分型結果見表1，Amelogenin基因座分型圖譜見圖1、圖2。

2 結果和討論

表1 STR基因分型結果

圖1 Identifile體系STR分型的Amelogenin基因座圖譜A：等位基因分型標準物ladder；B：父；C：子。父親檢樣的AMELX等位基因缺失，只存在AMELY等位基因

從表1分析可以看到，常染色體上的17個STR基因座的分型在此案例中都符合孟德爾遺傳規律，經計算其PI（父權指數）為5243925.22，RCP（父權相對機會）為99.999980930%；盡管父親的X染色體上Amelogenin等位基因缺失，但大多數情況下在STR分型中Amelogenin只是生物樣本性別鑒別的有效方法，并不用于親權指數的計算，也不影響親權結論的得出，因此在這個案例中我們作出的是認定親生血緣關系的結論。

圖2 PowerPlex16體系STR分型的Amelogenin基因座圖譜A：子；B：父；C：等位基因分型標準物ladder。父親檢樣的AMELX等位基因缺失，只存在AMELY等位基因

Amelogenin是編碼牙釉蛋白的基因，為X、Y染色體同源基因,其特異PCR引物最早由FSS（英國法庭科學服務部）設計，這種引物PCR擴增X和Y染色體可同時分別得到106pb和112bp的特異性產物[1]。正常男性的Amelogenin基因座分型表現為XY，正常女性則分型表現為XX。本案例在用Identifiler體系進行分析時，發現爭議父的Amelogenin基因座的分型圖譜上只存在Y特異片段的譜帶，而無X特異片段的譜帶，出現AMELX等位基因缺失。不同公司設計的引物有可能存在差異，利用不同公司試劑盒檢測相同基因座能在較大程度上避免產生無效等位基因,因此，為了避免不同STR商品試劑盒中引物帶來的影響，我們用PowerPlex16體系來再次驗證分析結果，性別基因座Amelogenin上同樣是X片斷缺失，兩個不同公司試劑盒檢測結果一致，可以不考慮“假”突變。

本鑒定中心是首次發現這種缺失，有資料顯示這一現象在男性的檢驗中是3/7000的比例[1]。通常情況下，無論是具有正常染色體核型的男性（46，XY）和女性（46，XX），還是性反轉病人（46，XX男性和46，XY女性），因都不可能缺少X染色體，所以AMELX等位基因缺失變異不會導致性別的錯判，但如果在產前診斷中，通過這種方法進行性染色體數目異常定量檢測[2]，對一些核型是47，XXY（Klinefelter綜合征）的胚胎，可造成染色體數目判斷錯誤，從而干擾產前診斷的結果。陳愛萍等對這種AMELX等位基因缺失的樣本進行了序列分析，結果顯示在其引物結合區發生了兩種類型的點突變，并報道其突變率為0.042%[3]，這些突變影響了引物與DNA模板的結合和DNA鏈的延伸,導致擴增失敗，造成AMELX等位基因的缺失。另外，STR分型時Amelogenin基因座的非正常結果不僅出現在X染色體上，Y染色體上也有Amelogenin等位基因的缺失[4]，AMELY等位基因的缺失常導致DNA的STR分型時男性被誤判為女性,如果用此方法進行產前性別鑒定[5]，可造成伴性遺傳病胎兒出生的風險，也可在一些刑偵案件上造成性別錯判,因此，對于這些個案，我們應引起高度的重視。在這次鑒定分析中，爭議父除了進行DNA的STR分型，還作了染色體核型分析，其核型為正常的46，XY。

[1]布爾特爾（John M.Butler）.法醫DNA分型[M].北京:科學出版社，2007.84-85.

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[3]陳愛萍，陳勇，王會品，等.中國人群Amelogenin基因的突變頻率和突變類型[J].中華醫學遺傳學雜志，2007，24（6）：615-619.

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R394.3[文獻標識碼]B[文章編號]1000-2715（2010）01-0079-02

2009-12-30]