腎細胞癌患者T淋巴細胞亞群動態分析

葉興龍,宋玉國

(北華大學附屬醫院泌尿外科,吉林吉林132011)

腎細胞癌具有癥狀隱匿、難以早期發現、易轉移等特點,對人類健康構成極大威脅?？鼓[瘤免疫以細胞免疫為主,所以T淋巴細胞的作用尤為重要。T淋巴細胞亞群的相對比例與病人的免疫功能狀態及病情進展密切相關[1]。T細胞膜表面分子是T細胞識別抗原和與其他免疫細胞相互作用的物質基礎,主要是白細胞分化抗原(CD)等各種膜表面分子。有文獻報道[2],惡性腫瘤病人T淋巴細胞存在一定的變化特征,其中CD4+/CD8+的比值是反應機體免疫功能紊亂的敏感指標。本文對確診的腎癌病例在治療前,治療過程中進行T淋巴細胞亞群動態分析,以期闡明在不同臨床階段T淋巴細胞亞群的變化特征。

1 材料與方法

1.1 對象 2007年11月至2008年11月在北華大學附屬醫院泌尿外科住院,并經病理檢查確診的腎細胞癌病例21例,男17例,女4例,年齡37-71歲,平均58歲。所有病例均為我院初診病例,治療前均未應用化療、放療和其他對免疫功能有影響的藥物。正常對照組20例,為我院體檢中心正常體檢者,年齡21-55歲,均 37歲。

1.2 主要儀器設備 美國Beckman Coulter公司EPLCS-XL型流式細胞儀。

1.3 主要試劑 三色熒光標記的T淋巴細胞亞群熒光抗體,CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PEcy5。同型陰性對照IgG1FITC/IgG1-PE/IgG1-PEcy5,以及甲酸溶血劑均購于 Beckman Coulter公司。Beckman Coulter公司甲酸溶血劑。

1.4 實驗方法

①對研究病例及對照組用EDTAK2抗凝真空管采血2 ml。

②針對每一個標本,取2支流式細胞儀專用試管,分別標記為測定管和對照管。測定管中加入T淋巴細胞亞群檢測熒光抗體20 μ l,加入全血100 μ l;在對照管中加入同型陰性對照20 μ l,加入同一人份全血100 μ l,混勻;兩試管同時放于室溫避光標記30 min。

③溶血:在每管中加入溶血劑甲,振蕩7秒后立即加入溶血劑乙,振蕩混均。

④洗滌細胞:在溶血后,加入4 ml PBS,混勻,1 000 rpm離心5 min,棄上清,加入 1 ml PBS,混勻,待上機檢測。

⑤流式細胞儀檢測:用同型陰性對照調節流式細胞儀電壓,使該細胞群充滿整個3區但不能超過界線到1、2、4區,如圖1所示。調節電壓后,將測定管放于流式細胞儀樣品架上進行檢測。

2 結果

2.1 用同型陰性對照管調節流式細胞儀電壓,結果見圖1,細胞充滿整個3區,1、2、4區沒有細胞或極少量細胞。測定管檢測結果見圖2和圖3。在圖2或圖3中,1區細胞數與2區細胞數之和為CD3總數;在圖2中2區為CD4+T細胞百分數,在圖3中,2區為CD8+T細胞百分數。

圖1 3區為同型陰性對照

圖2 2區為CD4+T細胞

圖3 2區為CD8+T細胞

2.2 腎細胞癌患者手術治療前與正常對照組T淋巴細胞亞群檢測結果比較,檢測結果見表1。

表1 腎細胞癌組術前與正常對照組T淋巴細胞亞群檢測結果(±s,%)

表1 腎細胞癌組術前與正常對照組T淋巴細胞亞群檢測結果(±s,%)

組別 n CD3 CD4 CD8 CD4/CD8腎細胞癌 21 59.84±4.56 27.67±3.16 28.78±3.56 0.97±0.18正常 20 67.66±4.02 38.47±4.12 23.7±3.12 1.43±0.13 P＜0.01 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01

表2 21例腎細胞癌手術前后T淋巴細胞亞群檢測結果比較(±s,%)

表2 21例腎細胞癌手術前后T淋巴細胞亞群檢測結果比較(±s,%)

組別 n CD3 CD4 CD8 CD4/CD8手術前 21 59.84±4.56 27.67±3.16 28.78±3.56 0.97±0.18手術后 21 65.43±3.72 36.47±4.01 27.34±3.12 1.23±0.22 P＜0.01 ＜0.01 ＞0.05 ＜0.01

3 討論

在腎惡性腫瘤中,腎細胞癌即腎癌約占85%左右[3],是最常見的腎實質惡性腫瘤。腫瘤的發生發展及其預后與機體的免疫監視及免疫清除功能障礙密切相關。腎細胞癌的治療以外科手術治療為主,術后配合免疫治療取得了令人滿意的結果。在抗腫瘤免疫中,細胞免疫尤其是T淋巴細胞的作用更為重要。T淋巴細胞參與機體的抗腫瘤免疫應答,T淋巴細胞亞群的數量是反映機體免疫功能的重要指標。

一些研究結果證實[4,5],T淋巴細胞中各亞群的相對比例與更能反映患者的免疫,可以估測病情的進展情況。有關文獻還報道[6]在膀胱癌等泌尿系腫瘤癌組織周圍有淋巴細胞侵潤的患者預后相對較好。這種細胞主要是CD4+T淋巴細胞和CD8+T淋巴細胞。本文應用流式細胞術對我院收治的21例腎細胞癌患者的外周血T淋巴細胞亞群進行了動態監測與分析,在手術治療前與20例正常對照組對比分析了T淋巴細胞亞群百分率的變化特征,結果可見腎細胞癌患者CD3+T淋巴細胞和CD4+T淋巴細胞顯著于正常對照組(P＜0.01),切CD4/CD8比值也低于對照組,而CD8+T淋巴細胞相對高于正常對照組,尚于正常參考值的上線。此結果與文獻[2]報道一致。該結果說明腎細胞癌患者體內存在細胞功能紊亂,不能有效地清除癌細胞腫瘤的發生。21例腎細胞癌患者手術后也進行T淋巴細胞亞群檢測,并與術前進行了對照分析,結果CD3+T淋巴細胞和CD4+T淋巴細胞較術前明顯升高,CD4/CD8比值也升高,而CD8改變不明顯。此結果與Schwaab[7]報道的結果相近。手術雖然不能清除體內的所有癌細胞,卻能有效地去除瘤負荷,使機體的免疫功能得以恢復,表現為T淋巴細胞亞群中CD3+T淋巴細胞和CD4+T淋巴細胞升高,CD4/CD8比值倒置現象得以逆轉。隨著對這些病例進行動態監測T淋巴細胞亞群,可能會得出T淋巴細胞亞群的變化特征與患者預后的相互關系。

[1]Kahan A,Picar F,Amalities of T lymphocyte subsets in systemic sclerosis demonstrated with anti-CD45 RA and anti-CD29 monoclonal antibodies[J].Ann rheum Dis,1991,50(6):354.

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[7]Schwaab Thomas,Heaney John A,Schned Alan R,et al.A randomizer phaseⅡtrial comparing two different sequence combinations of autologous va-ccine and human recombinant interferon(gamma)and human recombinant in-terferon(alpha)2b therapy in patients with metastatic renal cell carcinoma:clinical outcome and analysis of immunological parameters[J].J Urol,2000,163(4):1322.