駝乳對慢性腎功能衰竭大鼠的影響

潘 蕾，王 晶，王 娟，何俊霞，李建美，吉日木圖,*

(1.內蒙古農業大學 乳品生物技術與工程教育部重點實驗室，內蒙古 呼和浩特 010018；2.內蒙古駱駝保護學會，內蒙古 呼和浩特 010018)

駝乳對慢性腎功能衰竭大鼠的影響

潘 蕾1，王 晶2，王 娟2，何俊霞2，李建美2，吉日木圖1,*

(1.內蒙古農業大學 乳品生物技術與工程教育部重點實驗室，內蒙古 呼和浩特 010018；2.內蒙古駱駝保護學會，內蒙古 呼和浩特 010018)

目的：探討駝乳對腺嘌呤所致大鼠慢性腎功能衰竭的作用。方法：采用腺嘌呤復制慢性腎功能衰竭大鼠模型，以駝乳作為受試物進行灌胃干預。通過檢測大鼠體質量、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、血清總蛋白(TP)、鈣(Ca)、磷(P)、24h尿量、尿蛋白(UP)及腎臟病理組織學變化，分析駝乳對慢性腎功能衰竭大鼠的影響。結果：駝乳可降低大鼠Scr、BUN水平，減緩UP，調節Ca、P的含量，提高SOD、TP水平，具有保護腎功能的作用。結論：駝乳對慢性腎功能衰竭大鼠的病情起到緩解作用。

駝乳；慢性腎功能衰竭；腺嘌呤

Abstract：Purpose:To figure out whether camel milk has the ability to alleviate adenine-induced chronic renal failure in rats or not. Methods:Rats with adenine-induced chronic renal failure received intragastric administration of camel milk, distilled water or Niaoduqing once a day for 28 consecutive days. As a normal control, normal rats were given distilled water. During this time, the average body weights of all the rats were measured periodically and they were subjected to determination of some blood and urine biochemical parameters, kidney coefficient calculation and renal histopathological observations at the end of administration. Results:Compared with distilled water, camel milk could reduce serum creatinine, blood urea nitrogen and urine 24-hour protein levels, regulate Ca and P levels and increase SOD and TP levels in rats with chronic renal failure after 28-day administration. Conclusion:camel milk has remarkable alleviating effect on chronic renal failure in rats.

Key words：camel milk；chronic renal failure；adenine

慢性腎功能衰竭(CRF)是多種慢性腎臟病發展的最終結局，臨床表現復雜，治療困難，死亡率極高[1]。透析和腎移植療法的問世已顯著提高晚期腎功能衰竭病人的生存率和生活質量。但是到目前為止，仍存在著一些薄弱環節，如透析治療并發癥多，技術復雜；而換腎則存在異體腎來源、成活率、經濟承受能力等問題。這兩種方法費用高、危險性大、成功率低。能夠接受上述治療的患者在發病人群中所占比例小，大多數CRF患者不得不尋求低廉的治療方式，非透析療法最終將成為我國CRF廣泛采用的治療措施[2]。長期以來，我國應用中西醫結合非透析療法以緩解CRF癥狀及延緩其病程一直受到重視，但藥物治療會對患者產生毒副作用，因此尋找一種可以緩解病程且適合CRF病人長期服用的安全食療法具有重要意義。

近年來，國內外對飲食療法延緩CRF病程的研究成為熱點，如豆類及其制品中的大豆蛋白能改變早期慢性腎臟疾病進程[3]。蒙古國貝格爾駝乳腎病療養院是唯一用駝乳針對腎病患者進行治療的場所。蒙古國科學院對當地土壤、植被、空氣進行系統研究發現，這里的地理條件與其他地區無明顯差異，同時蒙古國醫學院的研究證明駝乳與腎病的治愈率有直接的關系[4]。但有關駝乳對CRF的影響未見報道。本實驗以駝乳為研究對象，通過建立CRF大鼠病理模型，探討駝乳對CRF病程的影響，為駝乳緩解CRF病情的研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

健康Wistar雄性大鼠50只，SPF級，體質量為(240±20)g，購自內蒙古大學實驗動物研究中心。室溫(18±2)℃，濕度50%～60%，通風良好，自由進食飲水，飼料為全價顆粒。

駝乳：同一批采自新疆牧區；腺嘌呤(產品批號AD0013) 上海生工生物工程有限公司；尿毒清顆粒(產品批號20090615) 康巨藥業(內蒙古)有限責任公司；NO、SOD、TP、Ca、P、UP試劑盒(產品批號20090918)南京建成生物工程研究所。

灌胃器、注射器、常規解剖器械、載玻片、BT-244半自動生化分析儀、UV-1700分光光度計、切片機、蠟塊包埋機、顯微成像系統。

1.2 方法

1.2.1 動物分組、造模及給藥

將50只4周齡的Wistar雄性大鼠適應1周后，標記稱質量，隨機分為5組，即正常對照組、病理模型組、尿毒清干預組、駝乳高劑量組和駝乳低劑量組，每組10只。每日上午9點造模，除正常對照組外，其余各組大鼠給予質量分數為2%的腺嘌呤混懸液2mL灌胃給藥，正常對照組給予生理鹽水8mL/kg bw·d灌胃。同時下午15點灌胃駝乳，駝乳高劑量組灌予駝乳10 mL/kg bw·d、駝乳低劑量組灌予駝乳5mL/kg bw·d、尿毒清干預組灌予質量分數為25%尿毒清溶液10mL/kg·d、正常對照組和病理模型組分別灌予蒸餾水8mL/kg bw·d。每日1次，共28d。

1.2.2 觀察指標

觀察整個實驗期間大鼠的體質量、神態、毛發及活動的變化情況。于造模第7、14、21天至第28天結束，稱量體質量，將大鼠置于代謝籠中留取24h尿液，測定尿量和尿蛋白，第28天心臟采血留樣后，斷頸處死，解剖取雙腎稱質量、觀察其外觀并制作切片。

1.2.3 檢測方法

血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、血清總蛋白(TP)：采用BT-244意大利半自動生化分析儀測定；24h尿蛋白(UP)、NO、SOD、Ca和P：依照試劑盒說明書檢測；腎臟切片：10%甲醛固定，常規石蠟包埋、切片、HE染色，光鏡檢查。

1.3 統計學處理

采用SPSS for Windows 16.00統計軟件處理，數據均以“平均值±標準偏差(±s)”的形式表示，多組間比較采用方差分析。P＜0.05有統計學意義。

2 結果與分析

2.1 駱駝乳對CRF大鼠一般情況的影響

模型組及給藥組大鼠體質量增長緩慢，同時出現多飲、多尿、毛發干枯、精神萎靡等現象。從給藥第3周開始，給藥組大鼠癥狀逐漸改善，通過代謝籠子測得尿量減少、通過每日定量喂水表明喝水量減少，精神好轉。造模給藥大鼠體質量與正常組比較，有統計學意義(P＜0.01或P＜0.05)，結果見表1。從CRF大鼠的一般情況可以看出，造模成功，同時說明駝乳對CRF大鼠有一定的緩解作用。

2.2 駝乳對CRF大鼠BUN、Scr含量的影響

圖1 駝乳對血清肌酐(Scr)含量的影響Fig.1 Effect of camel milk on serum creatinine level in rats with chronic renal failure

由圖1可知，經過28d的灌胃干預后，病理模型組、駝乳高、低劑量組和尿毒清干預組中Scr水平明顯升高，與正常對照組比較均有極顯著性差異(P＜0.01)。駝乳低劑量組與病理模型組比較有顯著性差異(P＜0.05)，駝乳高劑量組、尿毒清干預組與病理模型組有極顯著性差異(P＜0.01)。駝乳高劑量組與尿毒清干預組比較無顯著性差異(P＞0.05)，駝乳低劑量組與尿毒清干預組比較有顯著性差異(P＜0.05)，駝乳高、低劑量組之間無顯著性差異(P＞0.05)。

表1 駝乳對腎功能衰竭大鼠平均體質量的影響Table 1 Effect of camel milk on average body weight of rats with chronic renal failure

圖2 駝乳對血尿素氮(BUN)含量的影響Fig.2 Effect of camel milk on blood urea nitrogen level in rats with chronic renal failure

由圖2可知，駝乳高劑量組和尿毒清干預組中BUN水平比病理模型組顯著降低，尿毒清干預組與病理模型組有極顯著性差異(P＜0.01)。駝乳低劑量組與病理模型組比較無顯著性差異(P＞0.05)。駝乳高、低劑量組間無顯著性差異，駝乳低劑量組與尿毒清干預組比較有顯著性差異(P＜0.05)，駝乳高劑量組與尿毒清干預組之間無顯著性差異。

由圖1、2可知，經過28d大鼠灌胃給藥后，病理模型組、駝乳高、低劑量組、尿毒清干預組中Scr、BUN與正常對照組相比有極顯著性差異(P＜0.01)，其中駝乳高、低劑量組大鼠Scr和BUN水平低于病理模型組大鼠，并且駝乳高劑量組較駝乳低劑量組作用明顯。

2.3 駝乳對CRF大鼠24h尿量和UP的影響

圖3 5組大鼠24h尿量Fig.3 Changes in urine 24-hour volume of rats from different trial groups

實驗前各組大鼠24h尿量沒有顯著差異。從圖3可知，在實驗過程中，病理模型組、尿毒清干預組、駝乳高、低劑量組大鼠24小時尿量有顯著增多趨勢，而正常對照組大鼠尿量增多不明顯。正常對照組與其他4組比較差異有統計學意義(P＜0.05)。

圖4 駝乳對大鼠慢性腎功能衰竭尿蛋白的影響Fig.4 Effect of camel milk on urine 24-hour protein level in rats with chronic renal failure

由圖4可知，5組大鼠尿蛋白檢測發現，病理模型組、駝乳高、低劑量組、尿毒清干預組尿蛋白含量明顯多于正常對照組，有極顯著性差異(P＜0.01)。駝乳高劑量組尿蛋白量顯著低于病理模型組，差異極顯著(P＜0.01)，與駝乳低劑量組、尿毒清干預組比較無顯著性差異(P＞0.05)。駝乳低劑量組與病理模型組、尿毒清干預組比較無顯著性差異。尿毒清干預組與病理模型組比較差異極顯著(P＜0.01)。

2.4 駝乳對CRF大鼠血清SOD、TP、NO的影響

表2 駝乳對CRF大鼠平均SOD、TP、NO的影響Table 2 Effect of camel milk on the levels of three serum biochemical parameters in rats with chronic renal failure

從表2可知，腺嘌呤致CRF大鼠血中SOD水平明顯降低(P＜0.01)，駝乳高劑量組大鼠血液中SOD水平明顯高于病理模型組(P＜0.05)，而且駝乳高劑量組與尿毒清干預組沒有差異，從而可看出駝乳可提高CRF大鼠血清SOD水平，減輕腎損害；駝乳高、低劑量組NO含量明顯低于病理模型組，與尿毒清干預組無差別，說明駝乳對體內NO的含量有一定的調節作用，從而減輕過高的NO腎臟的破壞作用；駝乳高、低劑量組血清總蛋白(TP)明顯高于病理模型組，其中駝乳高劑量組與病理模型組比較有顯著性差異(P＜0.05)。

2.5 駝乳對血清鈣、磷的影響

圖5 駝乳對CRF大鼠Ca、P含量的影響Fig.5 Effect of camel milk on serum Ca and P levels in rats with chronic renal failure

從圖5可知，病理模型組血鈣較正常對照組顯著降低，血磷較正常組顯著升高。病理模型組鈣含量與正常對照組比較明顯降低，具有極顯著性差異(P＜0.01)。駝乳低劑量組鈣含量較病理模型組升高，差異具有顯著性(P＜0.05)，駝乳高劑量組有極顯著性差異(P＜0.01)。駝乳低劑量組與正常對照組、駝乳高劑量組、尿毒清干預組比較差異無顯著性(P＞0.05)。

病理模型組、駝乳高、低劑量組、尿毒清干預組血磷含量較正常對照組升高，駝乳高、低劑量組血磷含量較病理模型組降低，差異具有極顯著性(P＜0.01)，駝乳低劑量組與駝乳高劑量組比較無顯著性差異(P＞0.05)，與尿毒清干預組比較差異有顯著(P＜0.05)。駝乳高劑量組與尿毒清干預組比較差異不顯著。

2.6 駝乳對大鼠腎臟的影響

2.6.1 駝乳對腎臟外在形態的影響

圖6 駝乳對大鼠腎臟形態的影響Fig.6 Kidneys of rats from different trial groups

從圖6可以看出，病理模型組：腎臟體積明顯增大，質量增加，呈大白腎，腎臟表面呈顆粒狀，切開時皮髓質分界不清。正常對照組：腎臟體積正常，呈褐色，質地堅實有光澤。尿毒清對照組：腎臟亦增大，顏色褐紅色，但較病理模型組程度輕。駝乳低劑量組：呈灰白腎，體積增大，質量增加，腎臟表面有顆粒狀。駝乳高劑量組：腎臟呈淺褐紅色，體積輕度增大，較病理模型組輕。

2.6.2 駝乳對腎臟系數的影響

由表3可發現，病理模型組、駝乳高、低劑量組、尿毒清干預組腎臟系數明顯高于正常對照組，差異顯著(P＜0.01)。駝乳低劑量組腎臟系數與病理模型組、駝乳高劑量組比較也無顯著性差異(P＞0.05)，與尿毒清干預組比較差異有極顯著性(P＜0.01)。駝乳高劑量組與病理模型組比較，差異極顯著(P＜0.01)，與尿毒清干預組比較，差異具有極顯著性(P＜0.01)。

2.6.3 對腎臟組織切片的觀察

圖7 不同處理28d后的大鼠腎臟病理切片形態的比較Fig.7 Histopathological observations on kidneys of rats from different trial groups

由圖7可知，正常對照組：腎小球和腎小管，無病理改變，管腔內無結晶物沉積。病理模型組：腎小球囊腔擴大，間質增生，透明樣變性。2,8-二羥基腺嘌呤黃色結晶占據整個腎小球、腎小管；少數腎小球輕度萎縮，個別小球代償性肥大，周圍腎小管擴張，小管上皮細胞濁腫，管腔內可見多數黃色結晶物沉積。尿毒清干預組：腎小管擴張、萎縮、囊腔擴大，小管上皮細胞濁腫，間質有炎細胞浸潤，腎小球、腎小管間質內2,8-二羥基腺嘌呤黃色結晶物沉積較病理模型組少，部分小管萎縮，基本正常腎小球較病理模型組多。駝乳高、低劑量組：腎小球囊腔擴大，腎小管擴張，曲管上皮腫脹，間質少量炎細胞浸潤，間質血管輕度擴張、腎小球、腎間質內2,8-二羥基腺嘌呤黃色結晶沉積較多，結構基本正常腎小球、腎小管數量較病理模型組多。

表3 駝乳對大鼠平均腎臟系數的影響Table 3 Effect of camel milk on average kidney coefficient in rats with chronic renal failure

3 討 論

經過28d的動物實驗表明，駝乳對慢性腎功能衰竭有緩解作用。從圖1、2可知，經過28d大鼠灌胃給藥后，病理模型組、駝乳高、低劑量組、尿毒清干預組中Scr、BUN與正常對照組相比有極顯著性差異，其中駝乳高低劑量組大鼠Scr和BUN水平低于病理模型組大鼠，并且駝乳高劑量組較駝乳低劑量組作用明顯，說明造模成功且駝乳對慢性腎功能衰竭大鼠的病情有緩解保護作用。

蛋白尿的含量和腎衰發展速率密切相關[3,5]。美國一組臨床前瞻性研究證實，蛋白尿的含量對慢性腎功能衰竭的發生發展有預示價值，而控制蛋白尿(如用血管緊張素轉化酶抑制劑等)含量可減緩慢性腎衰的惡化速率[6]。實驗結果說明駝乳可減緩大鼠尿蛋白的丟失，緩解腎功能的惡化。

SOD可通過清除自由基而保護血管內皮細胞[7]，而CRF機體抗氧化能力降低，氧自由基清除系統失代償或衰竭，自由基得不到清除[7-8]，對腎組織損傷日趨加重，最后導致尿毒癥。有人研究慢性腎衰竭大鼠體內總自由基含量顯著增高。自由基增加會對腎組織細胞的膜脂質和蛋白質產生嚴重的損傷，加重腎組織一系列病變。表2的數據說明駝乳能補充機體對蛋白質的需求，促進蛋白質的合成。

NO在一般情況下可以通過對腎臟血流動力學及交感神經活性的作用，參與腎臟血流動力學及交感神經活性的調節與腎素釋放的調節[9]。正常腎臟中NO是一種擴血管物質，具有利鈉、利尿、調節腎臟血流動力學、參與維持正常血液流量和腎小球濾過率的作用；抑制系膜細胞生長和腎小球內血栓形成，對腎臟具有保護作用，但過高或過低的NO反而對腎臟均有破壞作用[9-10]。在CRF時，在TNF、IL-1β、內毒素等多種刺激因子作用下產生大量NO，可導致組織損害，其機制可能是影響細胞能量代謝，使細胞修復和蛋白質合成障礙[11]，并生成過氧亞硝酸離子，引起毒性損害。慢性腎功能衰竭可引起低蛋白血癥，并可能抑制蛋白的合成[12-13]。從表2可知駝乳高、低劑量組NO含量明顯低于病理模型組，與尿毒清干預組無顯著差別，說明駝乳對體內NO的含量有一定的調節作用，從而減輕過高的NO腎臟的破壞作用。

鈣、磷代謝與腎臟有密切關系，鈣、磷代謝紊亂是CRF常見的并發癥[11]。腎功能減退時，腎小球的濾過率降低，引起高磷血癥和低鈣血癥，低鈣高磷促進甲狀旁腺素(parathyroid hormone，PTH)分泌增加繼而導致甲狀旁腺亢進，引起腎性骨病、神經病變、心血管系統等損害[14]，駝乳高、低劑量組血鈣比病理模型組高。說明駝乳可改善CRF引起的鈣、磷代謝紊亂，其機制有待于進一步研究。

許多研究表明駝乳具有很高的醫療價值，如駝乳乳清蛋白中富含溶菌酶、乳鐵蛋白、乳過氧化物酶和免疫球蛋白等各種保護性蛋白[15-19]，在機體的抗病機制方面也起著重要的作用。通過動物實驗發現：1)駝乳可緩解腎衰大鼠的一般情況，減緩蛋白尿，調節電解質；2)駝乳可降低大鼠血肌酐、尿素氮水平，保護腎功能；3)駝乳可調節大鼠血清TP、NO水平，提高SOD水平，加強對體內自由基的清除作用；4)從病理觀察可見，駝乳在一定程度上緩解了腎單位的惡化；5)在其效果上比較，駝乳高劑量組優于駝乳低劑量組，在一定程度上對慢性腎功能衰竭的惡化起到了延緩作用。

因此，長期飲用駝乳可預防和防止患腎疾病的危險，對腎病患者來說駝乳不失為一種對其病情有益的綠色食品。

[1] 劉文軍. 慢性腎功能衰竭[M]. 北京:科學技術文獻出版社, 2000:83.

[2] 李靈輝. 核桃真武湯防治慢性腎衰的實驗研究[J]. 福建中醫學報,2008(3):5-6.

[3] FAIR D E, OGBORN M R, WEILER H A, et al. Dietary soy protein attenuates renal disease progression after 1 and 3 weeks in Han:SPRD-cyweanling rats[J]. Nutr, 2004, 134:1504-1507.

[4] 王晶, 那仁巴圖, 哈斯蘇榮, 等. 駝乳對腎病人尿液成分的影響[J].食品科學, 2009, 30(19):304-306.

[5] OHGOM M R, NITSCHMANN E, WEILER H A, et al. Modification of polycystic kidney disease and fatty acid status by soy protein diet[J].Kidney Int, 2000, 57(1):159-166.

[6] SAKEMI T, IKEDA Y, SHIMAZU K, et al. Attenuating effect of a semipurified alcohol extract of soy protein on glomerular injury in spontaneous hypercholesterolemic male Imai rats[J]. Am J Kid Dis, 2001, 37(4):832-837.

[7] 董偉, 許樹槐. 慢性腎功能衰竭患者脂質過氧化損傷的研究[J]. 中華內科雜志, 1991, 30(2):79-81.

[8] 戴龍君, 李宏英, 丁鼎武. 自由基與缺血性腎臟損傷[J]. 國際泌尿系統雜志, 1986, 6(3):132-133.

[9] 錢桐蓀. 一氧化氮與腎臟病變[J]. 醫師進修雜志, 1998, 21(11):566-567.

[10] 陳慧男, 吳兆龍. 正常腎臟中NO生物合成和穩定內環境的作用[J].國外醫學:泌尿系統分冊, 1998, 18(1):1-3.

[11] 劉毅, 薛莎, 馬利, 等. 堅腎合劑對慢性腎衰竭血尿鈣磷影響的實驗研究[J]. 中國中西醫結合腎病雜志, 2000, 1(4):203-205.

[12] 樣星東, 張云霞. 腎病中醫診斷療養護[M]. 北京:人民軍醫出版社:2007.

[13] 劉燕萍. 腎臟病營養康復食譜[M]. 重慶:重慶出版社, 2007:1.

[14] 李明喜, 鄭法雷. 腎臟疾病鈣磷代謝紊亂的發病機理與治療[J]. 中國實用內科雜志, 1998, 18(2):110-111.

[15] 吉日木圖. 雙峰家駝與野駝分子進化及駝乳理化特性研究[D]. 呼和浩特:內蒙古農業大學, 2006.

[16] Ц БАТСY Х. Ингэний сyy цагаан идээ–зохицуулах y йлчилгээтэй хy нс б олох нь[M]. БАЙГАЛИЙН ЭЛС ЕКОЛОГИ СУВИЛАЛ:АДМОН XX К-Д ЭX ИЙГ БЭЛТГ ЭЖ X ЭВЛЭВ. УЛааНБааТар, 2006:50-55.

[17] 田碧文. 尿檢驗說明啥[N]. 大眾衛生報, 2004. 2004-04-07 (TOO版)

[18] AGRAWAL R P, SWAMI S C, BENIWAL R, et al. Effect of camel milk on glycemic control risk factors and diabetes qUPlity of life in type-1 diabetes:A randomized prospective controlled study[J]. International Journal of Diabetes in Developing Countries, 2002, 2(22):70-74.

[19] EL-SAYED I, EL-AGAMY S I, RUPPANNER R, et al. Antibacterial and antiviral activity of camel milk protective proteins[J]. Journal of Dairy Research, 1992, 59(2):169-175.

Alleviating Effect of Camel Milk on Chronic Renal Failure in Rats

PAN Lei1，WANG Jing2，WANG Juan2，HE Jun-xia2，LI Jian-mei2，JIRIMUTU1,*
(1. Key Laboratory of Dairy Biotechnology and Engineering, Ministry of Education, Inner Mongolia Agricultural University, Hohhot 010018, China；2. Camel Protection Association of Inner Mongolia, Hohhot 010018, China)

TS252.2

A

1002-6630(2010)17-0376-05

2010-06-29

潘蕾(1981—)，女， 碩士研究生，研究方向為乳品技術與加工工程。E-mail：panlei621@yahoo.com.cn

*通信作者：吉日木圖(1965—)，男，教授，博士，研究方向為食品科學。E-mail：yeluotuojirimutu@yahoo.com.cn