ACE基因和CYP基因多態(tài)性與妊娠期高血壓疾病的相關(guān)性研究*

牛建清，李宏芬，沈志霞，張?zhí)N霞，代 琪，王 健，范淑英

（華北煤炭醫(yī)學(xué)院附屬開灤醫(yī)院 1.婦產(chǎn)科；2.檢驗(yàn)科，河北 唐山 063000）

妊娠期高血壓疾病是妊娠期特有的疾病，發(fā)病率在我國(guó)約占9.4%，國(guó)外報(bào)道7%～12%。該病嚴(yán)重影響母嬰健康，是導(dǎo)致孕產(chǎn)婦及圍產(chǎn)兒死亡的主要原因，但其確切的發(fā)病機(jī)制至今未明[1]。有研究表明，妊娠期高血壓疾病具有較高的遺傳傾向。有關(guān)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（angiotensin converting enzyme，ACE）和醛固酮合成酶（aldosterone synthase，CYP11B2）基因與妊娠期高血壓疾病的相關(guān)研究，鮮有報(bào)道。本文通過病例-對(duì)照研究，探討ACE基因I/D多態(tài)性及CYP11B2基因-344T/C多態(tài)性與妊娠期高血壓疾病患者的相關(guān)關(guān)系，有助于從遺傳學(xué)角度解釋妊娠期高血壓疾病的病因，為臨床早期預(yù)防、診斷和治療提供了分子遺傳學(xué)的依據(jù)。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選擇87例2000～2003年開灤醫(yī)院產(chǎn)科妊娠期高血壓疾病的住院患者，妊娠期高血壓疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)參照樂杰主編的《婦產(chǎn)科學(xué)》第6版[2]。妊娠期高血壓疾病患者87例，平均年齡（27±6.5）歲，連續(xù)測(cè)量非同日血壓3次，平均值為SBP≥140mmHg和/或DBP≥90mmHg，經(jīng)詢問病史和化驗(yàn)檢查排除原發(fā)性高血壓、糖尿病、腎病患者。對(duì)照組為年齡相匹配的175名同期住院分娩者，經(jīng)檢查孕期（既往）無高血壓、冠心病、腦血管病、糖尿病、腎病等病史。

1.2 方法

1.2.1 DNA的提取 抽取外周靜脈血5mL，乙二胺四乙酸二鈉（EDTA）抗凝，采用氯仿/異戊醇經(jīng)典方法提取DNA。

1.2.2 ACE基因檢測(cè) PCR擴(kuò)增參照文獻(xiàn)[3]設(shè)計(jì)引物（上海生工合成）。上游：5'-CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT-3'；下游：5'-GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3'。ACE基因檢測(cè)方法見參考文獻(xiàn)[4]。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn)490 bp片段長(zhǎng)度者為II純合型，出現(xiàn)190 bp片段長(zhǎng)度者為DD純合型，出現(xiàn)190、490 bp兩條片段長(zhǎng)度者，為ID雜合型。

1.2.3 CYP11B2基因型檢測(cè) PCR擴(kuò)增參照文獻(xiàn)[5]設(shè)計(jì)引物序列（上海生工）。上游：5'-CAGGAGGAGACCCCATGTGAC-3'；下游：5'-CCTCCACCCTGTTCAGCCC-3'。CYP11B2基因檢測(cè)方法見參照文獻(xiàn)[6]。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物為537 bp，在這個(gè)片段中存在2個(gè)自然的酶切位點(diǎn)，經(jīng)HaeⅢ內(nèi)切酶消化后產(chǎn)生273、138、126 bp長(zhǎng)度的片段，若擴(kuò)增片段中存在T-344C堿基替換，則產(chǎn)生新的HaeⅢ酶切點(diǎn)（GGCC），片段273 bp經(jīng)HaeⅢ內(nèi)切酶消化后產(chǎn)生202 bp和71 bp長(zhǎng)度的2個(gè)片段，所以TT基因型有273、138、126 bp共 3個(gè)片段，TC基因型有 5個(gè)片段：273、202、71、138、126 bp，CC 基因型有4個(gè)片段：202、71、138、126 bp。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 所得結(jié)果用SPSS 11.5軟件分析，基因型及等位基因風(fēng)險(xiǎn)率以比數(shù)比（OR）及95%可信區(qū)間（95%CI）表示。

2 結(jié)果

2.1 妊娠期高血壓ACE基因I/D多態(tài)性

妊娠期高血壓疾病組中ACE基因 I/D的ID和DD基因型頻率高于正常對(duì)照組，分別為41.4%和28.7%；相對(duì)于II基因型，攜帶ID和DD基因型人群患妊娠期高血壓疾病的OR值分別為1.981（95%CI 1.081～3.631）和 2.347（95%CI 1.191～4.627）；根據(jù)分離分析方法計(jì)算等位基因頻率，D等位基因頻率也高于正常對(duì)照組，為49.42%；相對(duì)于I等位基因，攜帶D等位基因患妊娠期高血壓疾病的OR值為 1.737（95%CI 1.202～2.512）（表1）。

2.2 妊娠期高血壓CYP11B2基因-344T/C位點(diǎn)多態(tài)性

妊娠期高血壓疾病組CYP11B2基因-344T/C位點(diǎn)TC和CC基因型頻率高于正常對(duì)照組，分別為40.2%和17.2%；相對(duì)于TT基因型，攜帶TC和CC基因型人群患妊娠期高血壓疾病的OR值分別為1.577（95%CI 0.903～2.754）和6.081（95%CI 2.300～16.078）；根據(jù)分離分析方法計(jì)算等位基因頻率，C等位基因頻率也高于正常對(duì)照組，為37.4%；相對(duì)于T等位基因，C等位基因患妊娠期高血壓疾病的 OR 值為 2.114（95%CI 1.420～3.147）（表2）。

表1 妊娠期高血壓疾病組與正常對(duì)照組ACE基因I/D多態(tài)性基因型和等位基因分析

表2 妊娠期高血壓疾病組與正常對(duì)照組CYP11B2基因-344T/C多態(tài)性基因型和等位基因分析

2.3 妊娠期高血壓ACE基因I/D和CYP11B2基因-344T/C多態(tài)性的聯(lián)合基因型頻率

為探討ACE基因I/D及CYP11B2基因-344T/C基因多態(tài)性與妊娠期高血壓疾病發(fā)病的相互關(guān)系，以每個(gè)個(gè)體的ACE基因I/D多態(tài)性基因型和CYP11B2基因-344T/C位點(diǎn)變異的基因型構(gòu)成，進(jìn)行聯(lián)合分析：相對(duì)于II-TT聯(lián)合基因型，同時(shí)攜帶TC-DD聯(lián)合基因型患妊娠期高血壓疾病的OR值為 6.019（95%CI 2.089～17.336）；CC-II、CC-ID、CC-DD聯(lián)合基因型由于樣本量小，不具有代表性，應(yīng)加大樣本量；其余聯(lián)合基因型，差異均無顯著性（P＞0.05）（表3）。

表3 妊娠期高血壓疾病組與對(duì)照組ACE基因I/D及CYP11B2基因-344T/C多態(tài)性的聯(lián)合基因型分析

3 討論

妊娠期高血壓疾病的基本病理生理變化是全身小動(dòng)脈痙攣，血管內(nèi)皮損傷，血管對(duì)血管緊張素Ⅱ敏感性增強(qiáng)，血管內(nèi)皮及其基底膜受損，凝血反應(yīng)被激活，血管活性物質(zhì)比例失調(diào)，最終使小血管痙攣，子宮胎盤缺血，導(dǎo)致妊娠期高血壓疾病的發(fā)生[7]。

ACE是腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（renin-angiotensin-aldosterone system，RAAS） 的關(guān)鍵酶，ACE基因位于人染色體17q23上，ACE的作用產(chǎn)物-血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）是RAAS作用于效應(yīng)器的關(guān)鍵成分。ACE可將血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)換成具有強(qiáng)烈血管收縮活性的血管緊張素Ⅱ，血管緊張素Ⅱ作用于血管緊張素受體Ⅰ，促進(jìn)腎上腺皮質(zhì)釋放醛固酮，醛固酮再通過控制鹽平衡和血管內(nèi)容量調(diào)節(jié)血壓。醛固酮合成酶是體內(nèi)合成醛固酮的最后一步生化反應(yīng)的催化酶，具有11-β羥化酶、18羥化酶和18氧化酶的活性，屬于線粒體細(xì)胞色素P450酶超家族。醛固酮合成酶（CYP11B2）基因是編碼醛固酮生物合成終末階段的關(guān)鍵基因，精確定位在8q24.3。CYP11B2基因轉(zhuǎn)錄調(diào)空區(qū)存在-344C/T單核苷酸等位基因多態(tài)性，這個(gè)位點(diǎn)恰好是類固醇生成轉(zhuǎn)錄因子-1的部位[8]。有研究表明，CYP11B2基因的變異可致醛固酮分泌失調(diào)[9]。醛固酮過度分泌使體內(nèi)水電解質(zhì)平衡失調(diào)，水鈉潴留，血容量增加，通過非基因快速作用，使血管平滑肌細(xì)胞通透性增高，水鈉儲(chǔ)留于細(xì)胞內(nèi)，鈉氫交換增加，細(xì)胞內(nèi)鈣及三磷酸肌醇濃度增高，從而使血管對(duì)加壓物質(zhì)反映增強(qiáng)，血管平滑肌張力增高[10～12]。

在妊娠期高血壓疾病組中，D等位基因頻率高于正常對(duì)照組，因此導(dǎo)致ACE水平升高，AngⅠ轉(zhuǎn)變成AngⅡ增加，以致出現(xiàn)血管痙攣、血壓升高，導(dǎo)致妊高征的病理變化[13]。本研究結(jié)果顯示，攜帶ID和DD基因型的人群，患妊娠期高血壓疾病的風(fēng)險(xiǎn)性分別增加了1.981倍和2.347倍；攜帶D等位基因的危險(xiǎn)性增加了1.737倍，提示妊娠期高血壓疾病的遺傳傾向與ACE基因的D等位基因有關(guān)，D等位基因可能是妊娠期高血壓疾病遺傳標(biāo)志之一。但亦有結(jié)論不同的報(bào)道[14]。

BENETOS 等[15]發(fā)現(xiàn)，醛固酮合成酶（CYP11B2）基因-344C基因型的白人，其臥位血漿醛固酮水平高于醛固酮合成酶（CYP11B2）基因-344T基因型白人，提示醛固酮合成酶（CYP11B2）基因-344等位基因可能與原發(fā)性高血壓發(fā)病有關(guān)。本研究結(jié)果表明，妊娠期高血壓疾病組中CYP11B2基因-344T/C位點(diǎn)的TC基因型頻率，高于正常對(duì)照組，患病風(fēng)險(xiǎn)（增加了1.577倍）雖有增高的趨勢(shì)，但并無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；攜帶CC基因型人群患病風(fēng)險(xiǎn)增加了6.081倍；攜帶C等位基因的危險(xiǎn)性增加了2.114倍，表明具有-334C位點(diǎn)突變的個(gè)體可能是妊娠期高血壓疾病發(fā)生中的高危人群。

本研究對(duì)ACE基因I/D和CYP11B2基因-344T/C多態(tài)性進(jìn)行聯(lián)合基因型分析，發(fā)現(xiàn)相對(duì)于II-TT聯(lián)合基因型，同時(shí)攜帶DD-TC聯(lián)合基因型的個(gè)體患妊娠期高血壓疾病的危險(xiǎn)性增加了6.019倍。上述結(jié)果提示，ACE基因缺失及CYP11B2基因點(diǎn)突變的多態(tài)性可能共同對(duì)妊娠期高血壓疾病的發(fā)生、發(fā)展起作用。

總之，妊娠期高血壓疾病的發(fā)病機(jī)理是極其復(fù)雜的，它可能是一種多基因決定和受多種因素影響的疾病。隨著分子遺傳學(xué)研究的不斷深入，ACE基因和CYP11B2基因在妊娠期高血壓疾病中的確切發(fā)病機(jī)制將進(jìn)一步被闡明。

[1]趙彩珍,喬福元.妊娠期高血壓疾病患者腹腔巨噬細(xì)胞分泌功能的變化[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2006,16(2):283-285

[1]ZHAO CZ,QIAO FY.Changes in function of peritoneal macrophages in patients with hypertension disorder complicating pregnancy[J].China Journal of Modern Meoicine,2006,16(2):283-285.Chinese

[2]LE J Editor.Obstetrics and Gynecology.The six edition.peking：People’s Medical Publishing House,2004:97-104.Chinese

[3]RIGAT B,HUBERT C,CORVOL P,et al.PCR deletion of the insertion/deletion polymorphism of the human angiotensin converting enzyme gene(DCP1)(dipeptidy carboxy peptidase 1).Nucleic Acids Res,1992,20(6):1433．

[4]LI HF,SHEN ZX,CHANG YH,et al.Distribution of polymorphism of angiotensin converting enzyme gene and A1166-C single nucleotide polymorphism (SNP)of angiotensinⅡtype 1 receptor gene in normal Chinese Population[J].Chinese Journal of Laboratory Medicine,2003,26(2):89-92.Chinese.

[5]KAWAMOTO T,MITSUUCHI Y,OHNISHI T,et al.Cloning and expression of a cDNA for human cytochrome P-450aldo as.Biochem Biophys Res Commun,1990,173(1):309-316.

[6]李宏芬,沈志霞,吳壽嶺,等.中國(guó)人群醛固酮合成酶(CYP11B2)基因T-344C單核苷酸多態(tài)性頻率分析.中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2008,18(2):233-235.

[6]LI HF,SHEN ZX,WU SL,et al.c SNP (Single Nucleotide Polymorphism)of CYP11B2 gene in normal Chinese Population[J].China Journal of Modern Medicine,2008,18(2):233-235.Chinese

[7]歐陽艷瓊,陳漢平,陳惠禎,等.妊娠期間高血壓疾病患者血清脂聯(lián)素、瘦素水平的變化及其臨床意義的研究[J],中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2007,17(6):697-700.

[7]OUYANG YQ,CHEN HP,CHEN HZ,et al.Study of changes of adiponection and leptin in hypertension disoeder amplicating pregnancy and their clinical significance[J].China Journal of Modern Meoicine,2007,17(6):697-700.Chinese

[8]MULATERO P,SCHIAVONE D,FALLO F,et al.CYP11B2 gene polymorphisms in idiopathic hyperaldosteronism.Hypertension,2000,35(3):694-698.

[9]TAYMANS SE,PACK S,PAK E,et al.Human CYP11B2(aldosterone synthase)maps to chromosome 8q24.3.L Clin Endocri Metab,1998,83(3):1033-1036.

[10]CHRIST M,DOUWES K,EISEN C,et al.Repid Effects of Aldosterone on Sodium Transport in Vascular Smooth Muscle Cells.Hypertension,1995,25(1):117-123.

[11]WEHLING M,BAUER MM,ULSENHEIMER A,et al.Nongenomic effects of aldosterone on intracellular pH in vascular smooth muscle cells.Biochem Biophys Res Commun,1996,223(1):181-186.

[12]PIRPIRIS M,SUDHIR K,YEUNG S,et al.Pressor responsiveness in corticosteroid-induced hypertension in humans.Hypertension,1992,19(6 pt 1):567-574.

[13]ZHU MH,XIA YP,CHENG WW,et al.Distribution of absense polymorphism of hypertensive disorder complicating pregnancy angiotensin converting enzyme gene[J].China J Obstet Gynecol,1998,33(2):83-85.Chinese.

[14]GAO XY,ZHANG WY,WU ZH,et al.Distribution of absense polymorphism of hypertension syndrome of pregnancy family constellation [J].China J Obstet Gynecol,2003,38(5):302-303.Chinese.

[15]BENETOS A,POIRIER O,GUYENE TT,et al.Genetic determination of plasma aldosterone levels.Hypertension,1997,30:493-494.