覆盆子糖蛋白粗提物體內抗氧化作用研究

牛付閣，王紀平，王 芳，戴成國，段玉峰，*

（1.陜西師范大學食品工程與營養科學學院，陜西西安710062；2.國藥集團西北醫藥有限公司，陜西西安710001）

覆盆子糖蛋白粗提物體內抗氧化作用研究

牛付閣1，王紀平2，王 芳1，戴成國1，段玉峰1，*

（1.陜西師范大學食品工程與營養科學學院，陜西西安710062；2.國藥集團西北醫藥有限公司，陜西西安710001）

研究覆盆子糖蛋白粗提物對小鼠體內抗氧化作用。采用試劑盒測定小鼠血清、肝臟、腦中的丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）和過氧化氫酶（CAT）的活性。實驗結果表明：覆盆子糖蛋白粗提物可以提高受試小鼠血清、肝臟、腦中SOD、CAT及GSH-Px的活性，而降低這些組織中MDA的含量。說明覆盆子糖蛋白具有一定的抗氧化活性。

覆盆子，糖蛋白，體內抗氧化，動物實驗

覆盆子為薔薇科（Rosaceae）懸鉤子屬（Rubus L.）植物華東覆盆子（Rubus chingii Hu）的果實，含有檸檬酸、蘋果酸、黃酮類、生物堿、多糖和多種微量元素。有益腎，固精縮尿之功效，用于腎虛遺尿、小便頻數、陽萎早泄、遺精、滑精等癥［1-4］。近年來，國內有關覆盆子的文獻報道絕大多數集中在風濕性關節炎、抗誘變、腎虛遺尿，此外還用于治療糖尿病和心血管系統疾病等方面［5-7］。國外文獻中大多數為覆盆子食品方面的研究。有關藥理學、化學方面的研究較少［8-11］。本文主要以正常小鼠作對照，用不同劑量的覆盆子糖蛋白粗提物喂養小鼠，各組自由飲水，自由攝食，飼喂4周后，禁食12h，摘除眼球進行眼眶采血，并解剖取肝、腦組織測定丙二醛（MDA）含量，超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）和過氧化氫酶（CAT）的活性來研究覆盆子糖蛋白的體內抗氧化作用。以期為開發覆盆子新藥和活性成分提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

覆盆子 購于西安市藥材市場，經生藥學鑒定為薔薇科懸鉤子屬植物華東覆盆子（Rubus chingii Hu）的果實；ICR小鼠 購于西安第四軍醫大實驗動物中心；丙二醛（MDA）試劑盒、谷胱甘肽-過氧化物酶（GSH-Px）試劑盒、超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒、過氧化氫酶（CAT）試劑盒 均為南京建成生物工程研究所生產；其余試劑 均為國產分析純。

HHW-21CU-600型電熱恒溫水槽、DGX-9073B-1電熱鼓風干燥箱 上海福瑪實驗設備有限公司；RE-52AA型旋轉蒸發儀 上海亞榮生化儀器廠；SHZ -D（III）型循環水式真空泵 上海博訊實業有限公司醫療設備廠；800B型離心機 上海安亭科學儀器廠；微量移液器 日本NICHIRYO公司；LXJ-IIB型低速大容量多管離心機 上海安亭科學醫學儀器廠；T6新世紀紫外可見分光光度計 北京普析通用儀器有限公司；FW-80型高速粉碎機 河北省黃驊市新興電器廠；JA1203型電子分析天平 上海精密科學天平廠。

1.2 實驗方法

1.2.1 覆盆子糖蛋白粗提物的制備［12-13］將烘干的覆盆子，粉碎過80目篩，用石油醚80℃回流至無色，50℃水浴浸提4h，以4000r/min離心20min，濾去固體殘渣，濾液真空濃縮至一定體積后加4倍體積的95%乙醇沉淀，低溫靜置過夜，離心，取沉淀物。將沉淀物溶于少量蒸餾水重復2次沉淀步驟。然后再加入沉淀物2～4倍體積的無水乙醇，攪拌均勻，離心（3000r/min）5min，傾棄上清液，再依次加入丙酮、無水乙醚，按此操作洗滌脫水各一次。然后放置40℃真空干燥箱中讓溶劑揮發，即得干燥的覆盆子糖蛋白粗品。1.2.2 動物的分組及飼喂［14-15］選取健康ICR小鼠40只，隨機分為對照組和低、中、高劑量組，每組10只，雌雄各半。正常對照組小鼠每天灌服生理鹽水，低、中、高劑量組每日給予覆盆子糖蛋白粗提物分別為200、400、800mg/kg·d。各組自由飲水，自由攝食，飼喂4周后，禁食12h，摘除眼球進行眼眶采血，并解剖取肝、腦、腎、胸腺、脾、心臟等器官組織，冷凍備用。

1.2.3 血清及組織勻漿的制備 血清的制備：取血試管預先加入肝素抗凝劑，并低溫烘干。取血后，搖勻，即刻再放回冰浴中冷卻，并于3000r/min離心5min，分離血清，然后將血清傾入另一潔凈試管低溫保存備用。

組織勻漿的制備：取適量濕組織加生理鹽水按W∶V=1∶5在冰浴條件下用組織勻漿機制成勻漿，并于8000～10000r/min離心10min，將上清液傾入另一潔凈試管低溫保存備用。

1.2.4 指標測定 按照試劑盒指定的方法測定丙二醛（MDA）含量，超氧化物歧化酶（SOD）活力，谷胱甘肽-過氧化物酶（GSH-Px）活力和過氧化氫酶（CAT）活力。

1.2.5 數據統計 實驗結果以 ±SD形式表示，SPSS13.0統計軟件進行統計比較。

2 結果與分析

2.1 小鼠器官重量變化

由表1可以看出，經過低、中、高劑量組飼喂四周的小鼠，胸腺、脾、心、腎、肝臟、腦組織等器官或組織的重量和正常對照組的對應器官相比，有所增加，但量效關系不顯著。初步可以證明，飼喂覆盆子糖蛋白對小鼠身體沒有損傷。但深入的毒理實驗有待于進一步研究。

表1 小鼠各器官重量變化（±sD，n=10）

表1 小鼠各器官重量變化（±sD，n=10）

92.63±60 95.72±67 97.14±52 103.09±51脾（mg） 113.96±80124.48±55124.54±90123.97±39心（mg） 274.31±39285.50±36284.62±33297.45±17腎（mg） 512.33±62532.17±30542.48±73552.34±83肝臟（mg） 1350.11±39 1349.36±90 1351.08±74 1347.17±15腦組織（mg）器官 對照組 低劑量組 中劑量組 高劑量組胸腺（mg）940.52±81 946.91±91 973.67±30 953.33±45

2.2 丙二醛（MDA）含量的測定

從圖1可以看出，三個劑量組的小鼠血清、肝臟和腦組織中的丙二醛（MDA）的含量均低于對照組小鼠對應的含量。其中低、中、高三個劑量組血清MDA含量均顯著低于正常組含量（P＜0.05）；高劑量組肝臟MDA含量極顯著低于正常組含量（P＜0.01）；中、高劑量組腦組織MDA含量極顯著低于正常組含量（P＜0.01）。說明覆盆子糖蛋白粗提物具有明顯的抗氧化作用，并且呈一定的量效關系。

圖1 覆盆子糖蛋白粗提物對小鼠體內相關組織中MDA活性的影響

2.3 超氧化物歧化酶（SOD）活力的測定

從圖2可以看出，隨著劑量的增大，血清、肝組織和腦組織中總超氧化物歧化酶（T-SOD）活力與正常對照組比較均增大。其中低劑量組與正常對照組無顯著差異。中、高劑量組與正常對照組比較均有極顯著差異（P＜0.01）。說明服用覆盆子糖蛋白粗提物具有提高SOD活性的作用。

圖2 覆盆子糖蛋白粗提物對小鼠體內總超氧化物歧化酶（T-SOD）活力的影響

2.4 谷胱甘肽-過氧化物酶（GSH-Px）活力的測定

由圖3可以看出，隨著劑量的增大，小鼠血清、肝組織和腦組織中GSH-Px活力越來越高。其中中、高劑量組血清GSH-Px活力和腦組織GSH-Px活力均極顯著高于正常組（P＜0.01），低劑量組顯著高于正常組（P＜0.05）；高劑量組肝組織中GSH-Px活力極顯著高于正常組（P＜0.01），中劑量組肝組織中GSH-Px活力顯著高于正常組（P＜0.05）。這說明服用一定劑量的覆盆子糖蛋白粗提物能提高小鼠體內的GSH-Px活性，并且GSH-Px的活性增強的趨勢與測定范圍內服用的劑量成正比的關系，因此覆盆子糖蛋白具有明顯的抗氧化功能。

2.5 過氧化氫酶（CAT）活力的測定

由圖4可以看出，三個劑量組血清中CAT的活性都比對照組要大，高劑量組具有極顯著的差異（P＜0.01），中低劑量組與對照組沒有顯著差異；隨著劑量的增大，肝臟組織中CAT活力與正常對照組比較有所增大，低劑量組與正常組的差異性不是很明顯；中、高劑量組與正常組比較均有極顯著的差異（P＜0.01）。這說明服用一定劑量的覆盆子糖蛋白粗提物能提高CAT的活性。

圖3 覆盆子糖蛋白粗提物對小鼠體內谷胱甘肽-過氧化物酶（GSH-Px）活力的影響

圖4 覆盆子糖蛋白粗提物對小鼠體內過氧化氫酶（CAT）活力的影響

3 結論

覆盆子糖蛋白粗提物可以有效地降低小鼠血清、肝組織、腦組織中MDA的含量，特別是高劑量組都達到了極顯著差異性；小鼠血清、肝組織、腦組織中的GSH-Px的活力和SOD活力都比對照組有所提高，中、高劑量組幾乎全部與對照組相比有極顯著差異；中、高劑量組小鼠的肝組織中CAT活力與對照組相比有極顯著差異。說明覆盆子糖蛋白具有一定的抗氧化性。

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Study on antioxidation effect in vivo of glycoprotein from extract of Rubus chingii Hu

NIU Fu-ge1，WANG Ji-ping2，WANG Fang1，DAI Cheng-guo1，DUAN Yu-feng1，*
（1.College of Food Engineering and nutritional Science，Shaanxi Normal University，Xi’an 710062，China 2.Northwest Pharmaceutical Co.Ltd.Sinopharm，Xi’an 710001，China）

The antioxidant effect in vivo of glycoprotein from extract of Rubus chingii Hu on mice were studied.The contents of malondiadehyde（MDA），enzyme activities of superoxide dismutase（SOD），glutathione peroxidase（GSH-Px）and catalase in the serum，liver/brain of mice were measured by reagent box.Experimental results showed glycoprotein from extract of Rubus chingii Hu could improve the activity of SOD，CAT/GSH-Px in the serum，liver/brain，decrease the contents of MDA in the serum and the organs.ln conclusion，glycoprotein from extract of Rubus chingii Hu had strong antioxidant activity in vivo.

Rubus chingii Hu；glycoprotein；antioxidation in vivo；animal experiment

TS201.1

A

1002-0306（2010）12-0134-03

2009-12-07 *通訊聯系人

牛付閣（1983-），男，碩士研究生，研究方向：植物有效成分開發與利用。