過氧化物酶體增殖物激活受體-γ和血管緊張素Ⅱ受體在慢性胰腺炎組織中的表達及意義

黃玲 高軍 滿曉華 龔燕芳 李兆申

·論著·

過氧化物酶體增殖物激活受體-γ和血管緊張素Ⅱ受體在慢性胰腺炎組織中的表達及意義

黃玲 高軍 滿曉華 龔燕芳 李兆申

目的觀察過氧化物酶體增殖物激活受體-γ(PPAR-γ)和血管緊張素Ⅱ受體(AT1R和AT2R)在慢性胰腺炎(CP)組織中的表達，探討其意義。方法收集2006年4月至2009年2月經病理確診的CP 24例，以12例正常胰腺組織作為對照。采用免疫組化方法檢測胰腺組織PPAR-γ和AT1R、AT2R的表達。結果正常胰腺組織PPAR-γ和AT1R蛋白多呈陰性表達，陽性分值分別為0.33±0.49和0.42±0.51；AT2R蛋白在腺泡、胰島細胞可呈陽性或弱陽性表達，在導管細胞質呈弱陽性表達,分值為2.33±1.37。CP組織PPAR-γ、AT1R和AT2R在腺泡、導管、間質及胰島細胞中均可有不同程度表達，陽性分值分別為3.28±2.46、4.36±2.80和4.61±2.89，均顯著高于正常對照組(P值分別為lt;0.01、lt;0.01、lt;0.05)。結論PPAR-γ和AT1R、AT12R在CP組織中均呈高表達，這可能是CP藥物治療的潛在靶點。

胰腺炎，慢性； 過氧化物酶體增殖物激活受體； 血管緊張素受體

過氧化物酶體增殖物激活受體(peroxisome proliferator-activated receptors，PPARs)屬核激素受體，包括PPAR-α、PPAR-β、PPAR-δ和PPAR-γ，其中PPAR-γ研究最為廣泛，它在調節炎癥應答、脂質合成、糖代謝及各種細胞的分化、增殖和凋亡途徑中發揮重要作用[1-2]。胰腺局部的腎素-血管緊張素系統(renin-angiotensin system，RAS)在胰腺的生理和病理生理過程中發揮重要作用，其生物功能是通過血管緊張素Ⅱ1型(angiotensin Ⅱ type 1 receptor，AT1R)和2型受體(angiotensin Ⅱ type 2 receptor，AT2R)來介導的，以AT1R占主導地位[3]。激活的血管緊張素Ⅱ(ATⅡ)與AT1結合介導氧化應激、誘導炎癥反應、細胞凋亡和組織纖維化[4-5]。本文應用免疫組化方法檢測慢性胰腺炎(CP)胰腺組織PPAR-γ與AT1R、AT2R蛋白的表達，探討其臨床意義。

材料與方法

一、臨床病例

收集我院2006年4月至2009年2月經外科手術及病理確診的CP患者24例，男性16例，女性8例，年齡32～68歲，平均50歲。其中伴胰腺導管內乳頭狀黏液瘤1例、假性囊腫4例、膿腫形成1例、胰管結石4例、左側門脈高壓癥1例、糖尿病2例。既往有急性胰腺炎發作病史8例，嗜酒者5例，嗜煙酒者2例。取12例正常胰腺組織作為對照。

二、胰腺組織病理檢查和膠原含量分析

所有標本常規切片，HE染色。由我院病理科醫師閱片。膠原采用苦味酸-天狼星紅染色，光鏡下為紅染。每張切片隨機取3個視野，應用MIQAS醫學圖像定量分析系統軟件(上海求為生物科技有限公司)計算陽性紅染面積的百分率，即膠原含量。

三、PPAR-γ、AT1R、AT2R和α-SMA蛋白檢測

采用Envision免疫組織化學法，按試劑盒(美國DAKO公司)說明書操作。以PBS作為陰性對照，以胰腺癌組織作為陽性對照。胞質或胞核呈棕黃色為陽性染色。在高倍顯微鏡(×400)下隨機取3個視野，計算陽性細胞百分數及染色強度。著色細胞數lt;30%為1分，30%～60%為2分，gt;60%為3分；無著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分，兩者乘積為總積分。

四、統計學處理

結 果

一、胰腺組織病理學改變及膠原含量

對照組顯示正常的胰腺組織結構。所有CP患者的胰腺組織均符合CP病理組織學特征[6]，包括腺泡萎縮、壞死，小葉內和(或)小葉間纖維化，繼發胰管改變，腺泡與胰島分離，炎癥細胞浸潤等。正常胰腺組織中，僅血管、胰管周圍可見紅染區(圖1a)，膠原含量為(23.83±3.71)%；CP的胰腺組織小葉內和(或)小葉間出現陽性染色(圖1b)，膠原含量為(70.50±7.69)%。兩者相差顯著(Plt;0.05)。

二、α-SMA、PPAR-γ、AT1R和AT2R蛋白表達

正常胰腺組織僅血管平滑肌細胞呈α-SMA陽性(圖1c)，分值為0.75±0.45；CP組織在血管壁、小葉內和(或)小葉周圍呈α-SMA陽性(圖1d)，分值為4.61±3.01，顯著高于正常組(Plt;0.01)。

正常胰腺組織PPAR-γ蛋白多呈陰性表達，偶見腺泡細胞核、胰島細胞質弱陽性表達(圖1e)，分值為0.33±0.49；CP組織的腺泡和(或)導管細胞核、間質細胞核陽性染色，胞質染色少見，胰島細胞核或細胞質偶見(圖1f)，分值為3.28±2.46，顯著高于正常組(Plt;0.01)。

正常胰腺組織AT1R蛋白多呈陰性表達，偶見腺泡、胰島細胞質弱陽性表達(圖1g)，分值為0.42±0.51；CP組織腺泡、導管、胰島細胞質陽性染色，間質細胞質偶見(圖1 h)，分值為4.36±2.80，顯著高于對照組(Plt;0.01)。

正常胰腺組織AT2R蛋白在腺泡、胰島細胞質可呈陽性或弱陽性表達，在導管細胞質弱陽性表達(圖1i),分值為2.33±1.37；CP組織腺泡、導管、胰島細胞質呈陽性或強陽性染色(圖1j)，分值為4.61±2.89，顯著高于正常組(Plt;0.05)。

討 論

在不同的炎癥反應中，PPAR-γ表達各異，如在人類的潰瘍性結腸炎和肝硬化病變中呈低表達，而在動脈粥樣硬化病變中呈高表達[6]。Nakajima等[7]報道，小鼠腸道缺血-再灌注損傷時腸道組織存在內源性PPAR-γ途徑，內源性配體激活PPAR-γ為腸道缺血-再灌注損傷提供保護作用，包括直接受累的組織和遠處臟器。而嚴重的內毒素血癥，PPAR-γ的保護作用不能阻止肝臟損傷的發生[8]。體外實驗證實，合成的PPAR-γ配體的親和力在nmol范圍，大多數內源性配體在μmol范圍，說明合成的PPAR-γ配體具有較高的親和力[9]。

圖1a、c、e、g、i分別為正常胰腺組織天狼星紅染色及α-SMA、PPAR-γ、AT1R、AT2R的表達(×200)；b、d、f、h、j分別為CP組織天狼星紅染色及α-SMA、PPAR-γ、AT1R、AT2R的表達(×200)

ATⅡ參與心、肝、腎等臟器的纖維化形成過程。在CP 動物模型中，ATⅡ介導TGF-β1的產生和胰腺星狀細胞(PSCs)激活、增殖，促進膠原合成和胰腺組織纖維化進展[10]。Yamada等[11]研究顯示，在Wistar Bonn/Kobori大鼠自發性CP模型中，AT1R拮抗劑坎地沙坦通過抑制TGF-β1的過表達，阻止PSCs的激活，改善CP的炎癥和纖維化程度。AT1R拮抗劑替米沙坦具有部分激動PPAR-γ的特性。Imayama等在體外研究發現，通過激活PPAR-γ，能抑制AT1R的表達，這種對ATⅡ功能的雙重抑制，即直接阻斷AT1R以及激活PPAR-γ、下調AT1R有助于更完全地抑制腎素-血管緊張素系統。

本實驗結果顯示，CP的胰腺組織中，腺泡壞死、萎縮，胰腺實質由大量纖維組織取代，并伴胰管結構的異常。這些纖維組織內可見富含α-SMA蛋白的PSCs。與正常對照組比較，CP組織中PPAR-γ、AT1R和AT2R蛋白均呈高表達，提示這些蛋白參與胰腺纖維化的過程。

AT2R在胚胎發育期呈高表達，在正常成人的心血管系統呈低表達。在高血壓、動脈粥樣硬化形成、心肌梗死等病理狀態下，AT2R的擴張血管作用被增強，在心血管重塑和炎癥過程中，AT2R能夠刺激心肌和血管平滑肌生長、增殖和凋亡，但仍存在爭議。目前，AT2R確切的擴血管作用可能有助于改善胰腺血流，以及減少膠原沉積作用，但是否能夠緩解CP病情進展，有待于進一步研究。

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2010-02-01)

(本文編輯：屠振興)

Expressionofperoxisomeproliferator-activatedreceptor-γandangiotensinⅡreceptorproteininchronicpancreatitistissue

HUANGLing,GAOJun,MANXiao-Hua,GONGYan-Fang,LIZhao-shen.

DepartmentofGastroenterology,ChanghaiHospital,SecondMilitaryMedicalUniversity,Shanghai200433,China

LIZhao-shen,Email:zhsli@81890.net

ObjectiveTo investigate the expression of peroxisome proliferator-activated receptor-γ (PPAR-γ) and angiotensin receptor (AT2R) in chronic pancreatitis tissue.MethodsBetween April 2006 and February 2009, 24 patients were pathologically diagnosed as chronic pancreatitis were enrolled and 12 samples of normal pancreatic tissues were treated as controls. Immunohistochemical staining was used to detect PPAR-γ and AT1R, AT2R expression in pancreatic tissues.ResultsPPAR-γ and AT1R were mostly negatively expressed in normal pancreatic tissues, the positive scores were 0.33±0.49 and 0.42±0.51, respectively, while AT2R were weakly positively or negatively expressed in acinus and islet cell, and it was weakly positively expressed in ductal epithelial cells, the positive score was 2.33±1.37. In chronic pancreatitis tissue, PPAR-γ, AT1R and AT2R were positively expressed in acinus, ductal epithelial cells, and islet cell, the positive scores were 3.28±2.46, 4.36±2.80 and 4.61±2.89, which were significantly higher than those in the normal group (Plt;0.01,Plt;0.01,Plt;0.05).ConclusionsPPAR-γ, AT1R and AT2R were positively expressed in chronic pancreatitis tissue, and they may be the treatment target of chronic pancreatitis.

Pancreatitis,chronic； Peroxisome proliferator-activated receptors； Angiotensin receptors

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2010.02.013

200433 上海，第二軍醫大學長海醫院消化內科

李兆申，Email：zhsli@81890.net