東北紅豆杉 (Taxus cuspidata)中四種紫杉烷類化合物抑制婦科腫瘤細(xì)胞增殖活性研究及其作用機(jī)制的初步探討

李 珊,馬如飛,王思明,張嫚麗,王于方,董 玫＊,史清文,張紅真

1河北醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科,石家莊 050031;2河北醫(yī)科大學(xué)法醫(yī)學(xué)系河北省法醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,石家莊 050017;3河北醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院,石家莊 050017

東北紅豆杉 (Taxus cuspidata)中四種紫杉烷類化合物抑制婦科腫瘤細(xì)胞增殖活性研究及其作用機(jī)制的初步探討

李 珊1,馬如飛2,王思明3,張嫚麗3,王于方3,董 玫2＊,史清文3,張紅真1

1河北醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科,石家莊 050031;2河北醫(yī)科大學(xué)法醫(yī)學(xué)系河北省法醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,石家莊 050017;3河北醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院,石家莊 050017

通過四唑鹽(MTT)比色法檢測東北紅豆杉中四種紫杉烷類化合物對人子宮頸癌細(xì)胞、人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞、人卵巢透明癌細(xì)胞和人卵巢囊腺癌細(xì)胞增殖的影響,不僅探討了這些化合物作用的構(gòu)效關(guān)系,還初步探討了其抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用機(jī)制。結(jié)果發(fā)現(xiàn) 9,10-去乙酰紫杉寧對人子宮頸癌細(xì)胞、人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞和人卵巢囊腺癌細(xì)胞的增殖均有明顯的抑制作用,與紫杉寧和 1β-羥基紫杉寧即使在 100μmol/L的高濃度下,對五種婦科腫瘤細(xì)胞的增殖不顯示抑制活性;流式細(xì)胞學(xué)檢查發(fā)現(xiàn) 9,10-去乙酰紫杉寧作用后的 HeLa細(xì)胞出現(xiàn)凋亡現(xiàn)象。因此推測:1.C-9,10位的羥基和 C-5位的肉桂酰基側(cè)鏈?zhǔn)窃擃惢衔镆种颇[瘤細(xì)胞增殖所必需的;2. 9,10-去乙酰紫杉寧有可能是通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡來實(shí)現(xiàn)其抑制 HeLa細(xì)胞的增殖作用。

東北紅豆杉;紫杉烷類化合物;腫瘤細(xì)胞;增殖活性;細(xì)胞凋亡

紅豆杉(俗稱紫杉,又稱赤柏松,yew)在植物分類學(xué)上歸屬于裸子植物亞門 (Gymnospermae),松杉綱 (Coniferopsidae),紅豆杉目 (Taxales),紅豆杉科(Taxaceae),紅豆杉族 (Taxeae)下的紅豆杉屬 (Taxus)。全世界約有 11種,主要分布于北半球,我國有4種 1變種,主要分布于甘肅、陜區(qū)[1,2],東北紅豆杉為其中的一種。民間用紅豆杉屬植物的果實(shí)和枝葉煎湯用以驅(qū)蟲、消積、潤燥、利尿消腫、通經(jīng),治療腎臟病、糖尿病、腎炎浮腫、小便不利、淋病、治療月經(jīng)不調(diào)、產(chǎn)后瘀血、痛經(jīng)等并且可以治療多種腸道寄生蟲[3-6]。

由于從紅豆杉科紅豆杉屬植物中發(fā)現(xiàn)了紫杉醇這一著名的抗腫瘤天然產(chǎn)物,紅豆杉屬植物成為近30年的研究熱點(diǎn)。隨著近年對紫杉醇及其前體物的需求量不斷攀升,尋找新的生物資源保護(hù)生態(tài)環(huán)境已迫在眉睫。盡管目前已經(jīng)提取分離得到了大量的紫杉醇類似化合物,但迄今為止仍沒有紫杉醇的第二代藥物上市。本文對從東北紅豆杉 (Taxus cuspidata)的可再生資源部位小枝和針葉中分離純化得到的四種紫杉烷類化合物進(jìn)行抑制 HeLa等人婦科腫瘤細(xì)胞增殖活性研究,并進(jìn)一步探討其作用機(jī)制,為開發(fā)新的治療婦科腫瘤藥物提供理論依據(jù)。

1 材料、試劑與儀器

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

試驗(yàn)用細(xì)胞株由日本千葉大學(xué)醫(yī)學(xué)部第二生物化學(xué)教室提供。HeLa:人子宮頸癌細(xì)胞株[7];HEC-1:人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株[8];SH IN3和 HOC-21:人卵巢透明癌細(xì)胞株[8];HAC-2:人卵巢囊腺癌細(xì)胞株[8]。試驗(yàn)用正常細(xì)胞由河北醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供。HELF:人胚肺成纖維細(xì)胞。紫杉烷類單體化合物 7-乙酰氧基-5-去桂皮酰基紫杉寧 (taxuspine F,1),紫杉寧 (taxinine,2),1β-羥基紫杉寧 (1β-hydroxyl-taxinine,3)和 9,10-去乙酰紫杉寧 (9,10-deacetyl taxinine,4)由河北醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院天然藥物化學(xué)教研室從東北紅豆杉的小枝和針葉中分離得到,經(jīng) 1D-和 2D-NMR等波譜技術(shù)確定其結(jié)構(gòu)如下(見圖 1)。

圖 1 四種紫杉烷類化合物化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig.1 Chemical structures of 4 non-paclitaxel-type taxoids

1.2 藥品和試劑

MTT為美國 Sigma產(chǎn)品,批號:Lot.T W 074,日本和光純藥工業(yè)株式會社;SDS為美國 Biotec公司產(chǎn)品;胎牛血清為 G IBCO公司產(chǎn)品;RPM I 1640和胰蛋白酶為 G IBCO公司產(chǎn)品;AnnexinⅤFITC KIT為晶美生物工程有限公司產(chǎn)品;Taxol由河北醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院天然藥物化學(xué)教研室提供。

1.3 儀器

生物顯微鏡:OLY MPUS,型號 JAPAN NO: 11058;CO2培養(yǎng)箱:MLO-18 A IL型,三洋電氣公司產(chǎn)品;倒置相差顯微鏡:LH50A型,日本 OLY MPUS產(chǎn)品;超凈工作臺:BHL-1300-2 B型,Airtech Japan;精密電子天平 (分度值 0.01 mg):L IBROR AEL-40 S M No.04001003,SH IMADZU CORPORAT ION;80-2低速離心機(jī):江蘇富化儀器有限公司;YXQG 02式蒸汽消毒鍋:山東新華醫(yī)療器械有限公司;DHX-9243B型(101-3 B)電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱:上海福瑪實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;酶標(biāo)儀:S/N:E 11325型為美國Precision microplate reader公司產(chǎn)品;光學(xué)顯微鏡:日本OLY MPUS生產(chǎn);培養(yǎng)板:美國 Costar公司產(chǎn)品;流式細(xì)胞儀:FACSCalibur型為美國 Becton Dickinson公司產(chǎn)品。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 腫瘤細(xì)胞株懸液制備[9]

用 RPM I1640完全培養(yǎng)液將被試腫瘤細(xì)胞株調(diào)整濃度為 2×105個(gè)細(xì)胞/mL的細(xì)胞懸液備用。

2.2 實(shí)驗(yàn)用化合物的體外抑瘤實(shí)驗(yàn)[10]

將被試腫瘤細(xì)胞株懸液接種于 96孔培養(yǎng)板,每孔 50μL(含 1×104個(gè)細(xì)胞),分別加入空白對照磷酸鹽緩沖液、溶劑對照(終濃度 0.5%DMSO)、陽性對照紫杉醇以及終濃度為1μmol/L、10μmol/L、100 μmol/L的化合物 1～4各 50μL,每組均設(shè) 3個(gè)復(fù)孔。置于飽和濕度、37℃和 5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h,于培養(yǎng)結(jié)束前 4 h,各培養(yǎng)孔加入 5 mg/mL四甲基偶氮唑藍(lán) (MTT)10μL。培養(yǎng)結(jié)束后,棄去培養(yǎng)上清,每孔加入反應(yīng)停止液 150μL,振蕩 10 min,使結(jié)晶充分溶解,用酶聯(lián)免疫檢測儀檢測各孔吸光度(OD)值,測定波長λ=570 nm,參考波長λ= 630 nm,并計(jì)算腫瘤細(xì)胞生存率。

腫瘤細(xì)胞生存率 (CS)%=實(shí)驗(yàn)組OD值/對照組OD值×100%

2.3 流式細(xì)胞儀及AnnexinⅤ-FITC試劑盒分析細(xì)胞凋亡

按左連富等[11]方法。HeLa細(xì)胞傳代進(jìn)入對數(shù)生長期,隨機(jī)分組,實(shí)驗(yàn)組加入 50μmol/L的 9,10-去乙酰紫杉寧,空白對照組加入磷酸鹽緩沖液,于培養(yǎng) 48 h后收集細(xì)胞,用 4℃預(yù)冷的 PBS洗細(xì)胞兩次,用 250μL結(jié)合緩沖液重新懸浮細(xì)胞,調(diào)整其濃度為 1×106/mL,取 100μL的細(xì)胞懸液于 5 mL流式管中,加入 5μL AnnexinⅤ/FITC和 10μL 20 μg/mL的 PI溶液,混勻后于室溫避光孵育 15 min,在反應(yīng)管中加 400μL稀釋好的結(jié)合緩沖液,及時(shí)上流式細(xì)胞儀分析。每次實(shí)驗(yàn)重復(fù) 3次。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

3 結(jié)果

3.1 化合物 1～4對體外培養(yǎng)的 HeLa細(xì)胞增殖的抑制作用

結(jié)果如圖 2所示,陽性對照紫杉醇顯示強(qiáng)的抑制人子宮頸癌細(xì)胞 (HeLa)增殖活性的作用,用 1 μmol/L、10μmol/L和 100μmol/L的紫杉醇處理HeLa細(xì)胞,其腫瘤細(xì)胞生存率分別為 28.34%、22.82%和 15.23%;而 7-乙酰氧基-5-去桂皮酰基紫杉寧 (1)即使用 100μmol/L處理 HeLa細(xì)胞,其腫瘤細(xì)胞生存率仍為 100%,對 HeLa細(xì)胞的增殖不顯示任何抑制活性;當(dāng)用 100μmol/L的與化合物 1母核結(jié)構(gòu)相同,在 5位碳原子上連接脂溶性的肉桂酰基側(cè)鏈的化合物2、3和4處理HeLa細(xì)胞,其腫瘤細(xì)胞生存率分別為下降為 65.48%,51.27%和26.93%,并且與空白對照組相比較具有非常顯著性差異。通過腫瘤細(xì)胞生存率和化合物 4濃度的對數(shù)回歸方程 y=-12.595 Ln(x)+87.333,得到化合物 4對 HeLa細(xì)胞增殖的半數(shù)抑制濃度 (IC50)僅為19.38μmol/L。

3.2 化合物 1～4對其它四種婦科腫瘤細(xì)胞增殖抑制活性的影響

試驗(yàn)結(jié)果如表 1所示。陽性對照紫杉醇對人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞 (HEC-1),人卵巢透明癌細(xì)胞株(SH IN3和 HOC-21)和人卵巢囊腺癌細(xì)胞株 (HAC-2)的增殖不顯示任何抑制活性,I C50都大于 100 μmol/L。化合物 3僅對 HAC-2的增殖有較弱的抑制活性,其 I C50為 88.75μmol/L;化合物 4對 HEC-1和 HAC-2的增殖有較強(qiáng)的抑制活性,其 IC50分別為32.04μmol/L和 67.22μmol/L。化合物 1和 2對四種婦科腫瘤細(xì)胞的增殖均不顯示抑制活性,其I C50都大于 100μmol/L。

3.3 化合物 1～4對人胚肺成纖維細(xì)胞增殖抑制活性的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖 3所示,陽性對照紫杉醇對人胚肺成纖維細(xì)胞 (HELF)的增殖呈現(xiàn)較強(qiáng)的抑制活性,IC50為 8.77μmol/L,化合物 1僅在 100μmol/L劑量組顯示較低的細(xì)胞增殖抑制活性,其細(xì)胞增殖生存率為 70.43%,C-5位具有肉桂酰基的其它三種試驗(yàn)用化合物 2～4對 HELF細(xì)胞的增殖不顯示抑制活性,三種被試化合物的 IC50均大于 100μmol/L。

圖 2 四種紫杉烷類化合物對人宮頸癌細(xì)胞增殖的影響Fig.2 The effect of four non-paclitaxel-type taxoids on the proliferation of HeLa tumor cell line

表 1 四種紫杉烷類化合物對四種婦科腫瘤細(xì)胞增殖活性的影響Table 1 The effect of three sesquiterpene lactones on the proliferation of other tumor cell line

圖 3 四種紫杉烷類化合物對人胚肺成纖維細(xì)胞增殖的影響Fig.3 The effect of four non-paclitaxel-type taxoids on the proliferation of Human embryonic lung fibroblast

3.4 AnnexinⅤ-FIFC/PI雙染流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果

9,10-去乙酰紫杉寧 (4)以 50μmol/L處理 He-La細(xì)胞,于 48 h后進(jìn)行Annexin-Ⅴ/PI染色,流式細(xì)胞儀檢測,結(jié)果顯示 HeLa細(xì)胞早期凋亡率為(48.51±6.84)%,PBS組為 (3.47±3.82)%,9, 10-去乙酰紫杉寧 50μmol/L濃度組與 PBS組相比,具有顯著性差異 (P<0.05)。流式細(xì)胞檢測提示9,10-去乙酰紫杉寧具有明顯誘導(dǎo) HeLa細(xì)胞凋亡的活性 (圖4)。

圖 4 9,10-Deacetyl taxinine對 HeLa細(xì)胞凋亡的影響Fig.4 The effect of 9,10-deacetyl taxinine on apoptosis of HeLa cell line

4 討論

癌癥是威脅人類健康的一大兇手,是僅次于心腦血管疾病的第二大致死性疾病,嚴(yán)重地威脅人類的健康和生命,婦科腫瘤又是臨床最常見的惡性腫瘤,手術(shù)和放療是婦科腫瘤常用的治療手段,療效肯定,但是中、晚期患者的治療效果迄今仍較差,5年生存率徘徊在 50%左右。現(xiàn)在臨床上應(yīng)用的抗癌藥物雖然種類不少,但價(jià)格昂貴,毒副作用嚴(yán)重,且尚沒有治療某些癌癥的特效藥。因此尋找療效確切,作用機(jī)理清楚,治愈率高,毒副作用小的抗癌藥物,攻克癌癥成為全世界醫(yī)藥工作者亟待解決的一大課題。植物在其漫長的進(jìn)化過程中合成了許許多多結(jié)構(gòu)各異的次生代謝天然產(chǎn)物,這些次生代謝產(chǎn)物不僅具有不同的生物活性,還常常被發(fā)現(xiàn)有新的作用機(jī)制,象紫杉醇 (Taxol)、長春新堿 (Vincristine, VCR)、喜樹堿 (Camptothecin,CPT)就是從植物中發(fā)現(xiàn)的三個(gè)優(yōu)秀的天然抗癌藥物中的代表,但彼此具有三個(gè)不同的甚至完全相反的抗癌作用機(jī)制,這些天然藥物的發(fā)現(xiàn)和在臨床上的廣泛應(yīng)用,極大地推動(dòng)了化學(xué)家和藥學(xué)家對抗癌藥物的研發(fā)[12,13]。

東北紅豆杉 (Taxus cuspidate)主產(chǎn)我國黑龍江省南部和吉林、遼寧等省,資源豐富,目前從東北紅豆杉中提取分離得到的 130多種紫杉二萜類化合物,其中一些化合物顯示了較好的抗腫瘤、抗炎、抗病毒等生物活性,非紫杉醇類紫杉烷類化合物如taxuspine D、taxezopidine K和 taxagifine顯示出對CaCl2誘導(dǎo)的微管解聚作用有效的抑制活性[14-18]。紫杉烷二萜類制劑除紫杉醇外,還有泰索帝 (docetaxel)等,既可單獨(dú)應(yīng)用,又可與順鉑、卡鉑等化療藥物聯(lián)合使用。另外,王建華等[19]對從東北紅豆杉中分離得到的 3種紫杉烷類化合物 2,9-diacetyl-5-cinnamoyl-phototaxicin II、5-acetyltaxuspineW 及 10-acetyltaxuspineB進(jìn)行抗癌活性研究,發(fā)現(xiàn) 3個(gè)化合物對人乳腺癌細(xì)胞的增值均有明顯的抑制作用。

本實(shí)驗(yàn)利用體外細(xì)胞培養(yǎng)方法,觀察了東北紅豆杉中 4種紫杉醇類單體化合物對人子宮頸癌細(xì)胞,人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞,人卵巢透明癌細(xì)胞和人卵巢囊腺癌細(xì)胞增殖的抑制作用,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明這 4種化合物中 9,10-去乙酰紫杉寧對 HeLa細(xì)胞、HEC-1細(xì)胞和 HAC-2細(xì)胞均有較強(qiáng)的抑制活性,其半數(shù)抑制濃度 (IC50)分別為 19.38μmol/L,32.04μmol/L和 67.22μmol/L,但四種化合物對于正常的細(xì)胞,即人胚肺成纖維細(xì)胞的增殖不呈現(xiàn)抑制活性。4個(gè)化合物均為 6/8/6三環(huán)紫杉烷類且 C-13位均含有羰基,化合物 2～4在 C-5位具有肉桂酰基,化合物2和 3在 C-9和 C-10位均是乙酰基,而化合物 4在C-9和 C-10位均是游離的羥基;化合物 1在 C-5位沒有肉桂酰基取而代之的是一個(gè)游離的羥基。由此我們推測 C-9,10位的羥基和 C-5位的肉桂酰基是該類化合物抑制腫瘤細(xì)胞增殖所必需的。

細(xì)胞凋亡又稱程序性細(xì)胞死亡 (programmed cell death,PCD),是在一定的生理和病理情況下如細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的變化或死亡信號觸發(fā)等,機(jī)體為維護(hù)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定,通過基因調(diào)控而使細(xì)胞主動(dòng)死亡的過程。隨著腫瘤分子生物學(xué)研究的深入,人們認(rèn)識到腫瘤的發(fā)生和發(fā)展不僅與腫瘤細(xì)胞的增殖分化異常有關(guān),而且同細(xì)胞凋亡的調(diào)控失常有關(guān)。腫瘤化療的目標(biāo)就是誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。目前臨床上使用的大多數(shù)抗腫瘤藥物可誘導(dǎo)敏感腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡,其抗腫瘤效能與腫瘤細(xì)胞在藥物誘導(dǎo)下發(fā)生細(xì)胞凋亡的內(nèi)在活性有關(guān)[20]。為了進(jìn)一步探討東北紅豆杉中單體化合物 9,10-去乙酰紫杉寧抑制 HeLa細(xì)胞增殖作用的機(jī)制,本實(shí)驗(yàn)利用 AnnexinⅤ-FIFC/ PI染色流式細(xì)胞儀檢測法測定了 7-乙酰氧基-5-去桂皮酰基紫杉寧誘導(dǎo) HeLa細(xì)胞的凋亡活性,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,9,10-去乙酰紫杉寧以 50μmol/L處理HeLa細(xì)胞 48 h后,HeLa細(xì)胞早期凋亡率為 (48.51 ±6.84)%,與 PBS組相比,具有顯著性差異 (P< 0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示東北紅豆杉中單體化合物 9, 10-去乙酰紫杉寧抑制 HeLa細(xì)胞增殖作用可能是通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡而實(shí)現(xiàn)的。我們還將繼續(xù)對該類化合物誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制進(jìn)行深入的研究,尤其是通過哪些基因誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡方面,并著手臨床應(yīng)用的探索。

致謝:國家自然科學(xué)基金(8107255)的資助。

1 Zheng HC(鄭汗臣),Cai SQ(蔡少青).Pharmacentical Botany and Pharmacognosia(藥用植物學(xué)與生藥學(xué)).Beijing:PeoplesMedical Publishing House,2003.228.

2 Yao ZS(姚振生).PharmacenticalBotany(藥用植物學(xué)). Beijing:China Press of Traditional Chinese Medicine,2003. 221.

3 Miller RJ.A brief survey of Taxus alkaloids and other taxane derivatives.J Nat Prod,1980,43:425-437.

4 Baloglu E,Kingston,DGI.The taxane diterpenoids.J Nat Prod,1999,62:1448-1472.

5 Shi QW,Kiyota H,Oritani T.New taxoids isolated from the yew trees in the recent years.Nat Prod Res Dev,1999,11: 62-78.

6 Shi QW,Kiyota K.New natural taxane diterpenoids from Taxusspecies since 1999.Chem B iodivers,2005,2:1597-1623.

7 Suzuki N,Fuse A.AUV-sensitive human clonal cell line, Rsa,which has low repair activity,M utat Res,1981,84:133-145.

8 Susuki N,Sekiya S,Sugano I,et al.Dipyridamole combined with tumor necrosis factor-a enhances inhibition of proliferation in human tumor cell lines,Jpn J Cancer Re,1995,86: 761-769.

9 Situ ZQ(司徒鎮(zhèn)強(qiáng)).Cell Culture(細(xì)胞培養(yǎng)).Beijing: World Publishing Corporation,1996.134-138.

10 Mao JH(毛俊浩),Lv ZL(呂志良),Zeng QL(曾群力) Ruan H(阮紅).Effects of the polysaccharide of Atractyl is macrocephala Ko idz on the function ofmouse T lymphocyte, Imm unol J,1996,12:233.

11 Zuo LF(左連富).Flow Cytometry Sample Preparation(流式細(xì)胞術(shù)).Beijing:Huaxia Publishing House,1991.14-19

12 Rocha AB,Lopes RM,Schwartsmann G.Natural products in anticancer therapy.CurrOpin Phar m.2001,1:364-369.

13 Clardy J.Walsh C.Lessons from natural molecules.Nature, 2004,42:829-837.

14 Napolitano U, Imperato F,Mossa B,et al.The role of neoadjuvant chemotherapy for squamous cell cervical cancer(Ib-IIIb):A long-term randomized trial.Eur J Gynaecol Oncol, 2003,24:51-59.

15 Park DC,K im JH,Lew YO,et al.Phase II trial of neoadjuvant paclitaxel and cisplatin in uterine cervical cancer.Gynecol Oncol,2004,92:59-63.

16 Kobayashi J,Shigemori H.Bioactive taxoids from Japanese yewTaxus cuspidataand taxol biosynthesis.Heterocycles, 1999,52:1111-1133.

17 Kobayashi J,Shigemori H.Bioactive taxoids from the Japanese yewTaxus cuspidate.M ed Res Rev,2002,22:305-328.

18 Shigemori H,Kobayashi J.Biological activity and chemistry of taxoids from the Japanese yew,Taxus cuspidate.J Nat Prod,2004,67:245-256.

19 Wang JH(王建華),DongM(董玫),Zang JF(張軍芳), et al.Effects of 3 taxanes from Taxus cuspida te on inh ib iting prolifera tion of cultured brea st cancer cellsin vitro. Phar m Clin Chin M aterM ed(中藥藥理與臨床),2008,24 (4):27-28.

20 Hannun YA.Apoptosis and the dilemma of cancer chemotherapy.B lood,1997,89:1845-1853.

Anti-proliferation Activity aga inst Tumor Cells of Non-paclitaxel-type Taxoids fromTaxus cuspidateand itsM echan ism

L I Shan1,MA Ru-fei2,WANG Si-ming3,ZHANGMan-li3, WANG Yu-fang3,DONGMei2＊,SH IQing-wen3,ZHANG Hong-zhen11The First Affiliated Hospital of HebeiM edical Uninversity,Shijiazhuang 050031,China;2Departm ent of ForensicM edicine,HebeiM edical Univercity,Shijiazhuang 050017,China;3Depar tm ent of M edicinal Natural Product Chem istry,School of Phar m aceutical Sciences,HebeiM edical University,Shijiazhuang 050017,China

Four non-paclitaxel-type taxoids taxuspine(1),taxinine(2),1β-hydroxyl-taxinine(3),and 9,10-deacetyl taxinine(4)were isolated fromTaxus cuspidata.Their anti-proliferation effects on the cell lines of HeLa,HEC-1, SH IN3,HOC-21,and HAC-2 were evaluated by usingMTT assay.In addition,the structure activity relationship and the possible mechanism were discussed.The results showed that only compound 4 exhibited significant anti-proliferation activities against HeLa,HEC-1,and HAC-2 cell lines and 9,10-hydroxyl and 5-cinnamoyl group were essential for the activity.Furthermore,the apoptosis induced by 9 in Hela cellwas studied by Flow Cytometry(FCM),which indicated that the anti-proliferation activity of 9,10-deacetyl taxinine was achieved by inducing HeLa cell apoptosis probably.

Taxus cuspidata;non-paclitaxel-type taxoids;human tumor cell lines;anti-proliferation activity;apoptosis

1001-6880(2010)06-1109-05

2009-05-14 接受日期:2010-07-07

國家自然科學(xué)基金(8107255)

＊通訊作者 Tel:86-311-8626-5602;E-mail:meidong@hebmu.edu.cn

R914;R284.3;Q946.91

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