結腸康Ⅰ號對潰瘍性結腸炎大鼠血清IL-6\\IL-10的影響

【摘要】目的:探討結腸康Ⅰ號對潰瘍性結腸炎的修復作用及對血清IL-6、IL-10的影響。方法:SD大鼠60只，隨機分為4組，分別為正常對照組、模型組、結腸康I號大、小劑量組。以5%2、4、6，三硝基苯磺酸(TNBs)誘導大鼠形成結腸炎癥，實驗完成后處死大鼠，觀察大體形態學及組織病理學改變，并采用放射免疫法檢測各組大鼠的血清IL-6、IL-10的水平。結果:結腸康Ⅰ號能有效提高大鼠血清IL-10含量，降低IL-6含量，并對損傷的大腸黏膜有明顯的修復作用。結論:結腸康Ⅰ號對大鼠實驗性潰瘍性結腸炎療效顯著，其作用機制可能與調節機體的免疫有關。

【關鍵詞】結腸康I號;潰瘍性結腸炎;IL-6;IL-10

【中圖分類號】R-33【文獻標識碼】A【文章編號】1007-8517(2010)14-086-2

Abstract:Objective:To investigate the repair on ulcerative colitis and affect on serum IL-6，IL-10 of Jiechangkang No1. Methods:60 SD rats were randomly divided into 4 groups: normal control group，model group，Jiechangkang No1 large dose group and small dose group.With 5% 2，4，6，-trinitrobenzene sulfonic acid(TNBs)induced the formation of colonic inflammation，rats were sacrificed to observe the general morphology and histopathological changes，and detected by radioimmunoassay rats serum IL-6，IL-10 levels. Results:The Jiechangkang No1 can effectively improve rats serum IL-10 levels and lower IL-6 levels，and significantly repair damage in colorectal mucosa. Conclusion:Jiechangkang No1 has a significant effect on experimental ulcerative colitis，its mechanism may be related to regulating the body's immunity.

Key words:Jiechangkang No1;ulcerative colitis;IL-6;IL-10

潰瘍性結腸炎(UC)是一種病因未明的以大腸黏膜和黏膜下層炎癥病變為主要特征的慢性疾病，久治愈，反復發作，近年來發病率在我國呈不斷上升趨勢。其病因和發病機制尚不十分清楚，目前認為主要與遺傳、免疫、環境等因素的相互作用有關。細胞因子在UC發病中的重要作用，越來越引起人們的關注，大量的研究提示潰瘍性結腸炎(ulcerative colitis，UC)患者有免疫異常[1-3]，如血中的抗結腸抗體[3]，循環免疫復合物等[2]，有人甚至認為它是一種自身免疫病，目前認為促炎細胞因子與抗炎細胞因子之間的平衡失調所致的免疫異常是UC的重要發病機制，在促炎因子中具有代表性的是IL-1、IL-6、TNF-α等，抗炎因子中具有代表性的是IL-4、IL-10等。目前對UC尚無滿意的治療手段，而中醫藥具有毒副作用小，遠期療效好等優勢，本實驗主要觀察經驗方結腸康Ⅰ號對UC大鼠結腸損傷的修復作用及血清IL-6、IL-10水平的影響，從而進一步驗證該藥的療效，探討其治療UC的免疫機理。

1實驗材料

1.1藥物與試劑

結腸康I號(主要由黃芪20g、黨參20g、白術15g、茯苓12g、白頭翁12g、秦皮6g、木香10g、地榆8g、元胡8g、白芍12g、甘草3g組成)，由深圳市長白山制藥廠提供，批號20081012，實驗前用蒸餾水配制成100%(1g/ml)的濃度。IL-6、IL-10放免試劑盒由解放軍總醫院科技開發中心放免所提供。磷酸緩沖溶液500毫升;2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS，Sigma公司產品)。乙醇為國產分析純。

1.2實驗動物

健康SD大鼠60只，體重200～220克，雌雄各半，購于南方醫科大學實驗動物中心。隨機分為4組，每組15只，雌雄各半，分別是正常組、模型組、結腸康I號大、小劑量組。

2實驗方法

2.1UC大鼠模型制備

除正常組外，其余各組大鼠造模前禁食不禁水48小時，禁食24小時后提起鼠尾將其懸空，使掙扎以排出大腸遠端的大便，共2次，每次相隔6小時以上，以氯氨酮(0.2ml/100g)腹腔注射麻醉大鼠，用外徑為2mm的硅膠管插入鼠肛內約8cm，經管內注入5%2.4、6-三硝基苯磺酸水溶液0.4ml(100mg/kg)+50%乙醇0.25ml，約10秒灌注完畢。

2.2給藥及取材

造模完成(第3天)后，結腸康I號大、小劑量組，每組每只大鼠分別用配制的結腸康I號液2.5ml、5ml灌胃，每天兩次;正常組、模型組每組每只大鼠均以蒸餾水3ml灌胃，每天一次，以上均給藥15天。四組大鼠分別給予藥物和蒸餾水灌胃15天后，于第16天分別眼球取血2毫升待測。截取距肛門8cm處結腸，用10%甲醛固定，肉眼觀察結腸大體形態、結腸黏膜損傷情況。常規石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡觀察。分離血清，-20℃保存，采用放射免疫法，嚴格按試劑盒說明書檢測血清IL-6、IL-10水平。

2.3統計學處理

應用SPSS13.0統計軟件，進行兩樣本均數差別的t檢驗。

3結果

3.1實驗動物數量分析

60只大鼠，模型組死亡1只，存活大鼠全部進入結果分析。

3.2結腸大體形態改變

正常組大鼠表現為腸道不增厚，皺襞紋理清晰，黏膜光滑潤澤，腸道無粘連，未見充血、糜爛及潰瘍。模型組大鼠可見結腸長度縮短、腸道粘連，腸脹氣，局部充血，腸壁增厚，纖維化，可見明顯潰瘍。結腸康I號低、高劑量組較模型組均有改善，其中結腸康I號高劑量組大部分未見明顯潰瘍。

3.3結腸病理組織學改變

正常組大鼠結腸上皮完整，結構清晰，固有層杯狀細胞豐富，腺體排列規則，偶有微量炎細胞浸潤，無充血、水腫，無潰瘍。模型組大鼠結腸全層普遍增厚，黏膜層缺失，杯狀細胞顯著減少，腺體破壞，有大量中性粒細胞、淋巴細胞及數量不等的嗜酸性粒細胞浸潤，可見纖維組織增生。結腸康I號低、高劑量組黏膜缺損、細胞浸潤較模型組明顯減輕。

3.4大鼠血清IL-6、IL-10水平變化

結果見表1。

表1 各組大鼠血清IL-6、IL-10水平變化比較(x±s)

組別nIL-6(pg/ml)IL-10(ng/ml)

正常組10102.12±7.2438.78±7.09

模型組9185.64±8.82**18.51±3.81*

低劑量組10151.92±5.22**△▲▲23.92±5.24**△▲▲

高劑量組10114.65±6.53△△ 33.57±5.32*△△

注:與正常組比較*P<0.05，**P<0.01;與模型組比較，△P<0.05，△△P<0.01;與高劑量組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01

模型組大鼠血清IL-6含量明顯高于正常組，IL-10含量明顯低于正常組，兩組比較有顯著性差異(P<0.01)。低劑量組IL-6及IL-10含量與模型組比較有差異(P<0.05)，高劑量組大鼠血清IL-6含量低于模型組，IL-10含量高于模型組，有非常顯著性差異(P<0.01)。低劑量組IL-6、IL-10的含量與高劑量組比較有顯著性差異(P<0.01)。

4討論

細胞因子分促炎性細胞因子和抗炎性細胞因子正常人群中這兩類細胞因子處于平衡狀態目前兩者之間的平衡失調所致免疫異常被視為UC的重要發病機制。IL-6是重要的促炎癥細胞因子，它是由單核巨噬細胞產生的多向性細胞因子，可由活化的T細胞、B細胞、纖維母細胞、內皮細胞等產生，具有廣泛的生物學活性。它可以加強終末B細胞的分化、介導免疫球蛋白的分泌、提高T細胞活化信號及促進細胞毒T細胞和NK細胞溶解細胞的能力。研究發現UC患者的血清IL-6水平明顯升高，且與病變范圍和病變嚴重程度呈正相關[2-3]。IL-10是由輔助性T細胞亞群TH1和TH2、單核細胞、巨噬細胞、B細胞和角質細胞(keratinocyte)產生的多效性抑炎細胞因子，其生物活性廣泛，其生物學作用是抑制炎癥反應和致炎細胞因子的釋放、調節T細胞、B細胞等多種免疫細胞的增殖和分化。有研究顯示，在UC患者結腸中，T淋巴細胞IL-10mRNA水平顯著升高，IL-10陽性細胞出現的頻率增加。又有研究報道，IL-10基因剔除小鼠可自發結腸炎說明IL-10在維持正常腸道黏膜免疫調節中發揮重要作用。

本病屬中醫“痢疾”、“腸癖”、“腸風”、“泄瀉”、“臟毒”等范疇。祖國醫學認為飲食不節，情志內傷，外感邪毒，勞倦過度等因素，都可損傷脾胃，導致泄瀉。久病及腎，火不溫土，脾腎陽虛，中氣不運，水濕停留;氣虛寒凝則血運無力，漸成瘀血阻滯，或濕熱蘊結損傷血絡，瘀阻腸絡。由于局部微循環障礙，日久形成腸粘膜潰瘍，糞下膿血粘液而成腸風。究其病機，本虛標實，以脾腎陽虛為本，寒濕停滯，濕熱蘊結，瘀血阻滯為標。結腸康I號系著名中西醫結合內科專家陳如山教授數十年治療潰瘍性結腸炎的經驗方，方中黃芪、黨參、白術、茯苓健脾益氣，具有增強細胞免疫及免疫調節作用，配以地榆、白頭翁能清熱解毒，止血止瀉，經現代藥理研究表明對多種革蘭氏陰性菌，陽性菌敏感，對慢性潰瘍性結腸炎有良好的效果;木香行氣導滯;延胡索、白芍化瘀行滯止痛，有改善組織微循環，殺菌、抗炎，促進損傷組織修復、促進代謝等作用，地榆有較好的止血，抗炎功效。全方具有健脾益氣，補脾益腎治本，清腸祛濕、活血化瘀、行氣導滯治標之功效，共同達到扶正祛邪，標本同治的目的。本實驗表明結腸康I號對UC大鼠結腸損傷具有明顯的修復作用，并能顯著降低大鼠血清IL-6水平，提高大鼠血清IL-10含量進一步揭示了結腸康I號治療UC的藥理機制為臨床廣泛應用提供了理論基礎。

參考文獻

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[3] 姚茹冰，等.烏梅丸對潰瘍性結炎大鼠病變結腸粘膜腫瘤壞死因子α，白介素-8及白介素-10的影響[J].中醫雜志，2002，43(19):935.