高效液相色譜法測(cè)定大補(bǔ)陰丸中鹽酸小檗堿的含量

【摘要】目的:建立測(cè)定大補(bǔ)陰丸中黃柏含量的高效液相色譜方法。方法:采用Phenomenex C18色譜柱(250mm×4.6mm，4μm)，以磷酸鹽緩沖溶液[0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液和0.05mol/L十二烷基磺酸鈉溶液(1:1)]-甲醇(70:30)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)265nm，柱溫為30℃，流速:1.0mL·min-1。結(jié)果:鹽酸小檗堿回歸方程為A=48.237C+0.8431，r=0.9995，線性范圍2.036～40.72μg/mL。平均回收率為96.66%，RSD為1.26%。結(jié)論:該法操作簡(jiǎn)單，精密度高，重復(fù)性好，檢測(cè)快速，定量準(zhǔn)確，可用于大補(bǔ)陰丸的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】大補(bǔ)陰丸;鹽酸小檗堿;高效液相色譜法

【中圖分類號(hào)】R927.2【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1007-8517(2010)14-039-1

大補(bǔ)陰丸由熟地黃、鹽黃柏、鹽知母、龜甲、豬脊髓五味藥物組成，具有滋陰降火的功效，用于陰虛火旺、潮熱盜汗、咳嗽咯血、耳鳴遺精等癥。方中鹽黃柏具有滋陰降火的功效，用于陰虛火旺、盜汗骨蒸等癥;其主要成分為鹽酸小檗堿，現(xiàn)采用高效液相色譜法測(cè)定大補(bǔ)陰丸中鹽酸小檗堿的含量來(lái)確定制劑中鹽黃柏的含量，方法簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于大補(bǔ)陰丸的質(zhì)量控制。

1儀器與材料

1.1儀器Agilent1100系列高效液相色譜儀(包括四元梯度泵;紫外檢測(cè)器;Agilent工作站)BP211D電子分析天平(Sartorius)。

1.2試藥鹽酸小檗堿對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)0713-200608)甲醇為色譜，純水為超純水;其他試劑均為分析純;大補(bǔ)陰丸為市售。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱:Phenomenex C18色譜柱(250mm×4.6mm，4μm);流動(dòng)相為磷酸鹽緩沖液[0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液和0.05mol/L十二烷基磺酸鈉溶液(1:1)]-甲醇(70:30);流速:1.0ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng)265nm，柱溫為30℃;進(jìn)樣量;10micro;l;理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計(jì)算，應(yīng)不低于4000。色譜圖見(jiàn)圖1。

2.2對(duì)照品溶液制備精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品10.18mg，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，制成每ml含101.8micro;g的溶液，作為對(duì)照品溶液。分別精密吸取對(duì)照品溶液1.3.5.10.15.20ml置50mL量瓶中，加甲醇制成濃度為2.036，6.108，10.18，20.36，30.54，40.72micro;g/ml的對(duì)照品系列濃度溶液，即得。

2.3供試品溶液的制備取本品(水蜜丸)適量，研細(xì)，取1g精密稱定，置索氏提取器中精密加入甲醇-鹽酸(100:1)的混合溶液適量，加熱回流提取至提取液無(wú)色，將提取液移至100ml量瓶中，用少量上述混合溶液洗滌容器，洗液并入同一量瓶中，加上述混合液至刻度，搖勻，精密量取5ml至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，作為供試品溶液。

2.4線性關(guān)系考察取2.2項(xiàng)下對(duì)照品系列濃度溶液，按2.1色譜條件進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得峰面積，以濃度(C)對(duì)峰面積(A)積分值進(jìn)行線性回歸，求得回歸方程為A=48.237C+0.8431，r=0.9995。表明鹽酸小檗堿在2.036-40.72micro;g/ml濃度范圍內(nèi)，線性良好。

2.5空白實(shí)驗(yàn)按照中國(guó)藥典2005年版處方比例及制法制成不含黃柏的樣品，并按供試品的制法制成陰性對(duì)照溶液，依法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果陰性對(duì)照品溶液在鹽酸小檗堿保留時(shí)間處無(wú)色譜峰出現(xiàn)(見(jiàn)圖l)，表明該實(shí)驗(yàn)條件下，其他藥材成分對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。

圖l 對(duì)照品及樣品的HPLC圖譜

1-對(duì)照品;2-陰性樣品(缺黃柏);3-大補(bǔ)陰丸樣品

2.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取樣品按2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在0、3、6、9、12h進(jìn)樣檢測(cè)，測(cè)得結(jié)果RSD為1.03%，表明樣品溶液在12h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一樣品5份按2.3項(xiàng)下方法制得供試品溶液，依法進(jìn)樣檢測(cè)，分別測(cè)定含量，RSD為0.92%。

2.8精密度實(shí)驗(yàn)取實(shí)驗(yàn)用對(duì)照品溶液，分別連續(xù)進(jìn)樣5次，RSD為0.32%。結(jié)果表明儀器運(yùn)行良好。

2.9加樣回收率實(shí)驗(yàn)精密稱取已知含量的供試品(批號(hào)20080607)1g，共6份，分別精密加入一定量的鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液，依法提取測(cè)定。

2.10樣品測(cè)定取二個(gè)廠家樣品4批，制成供試品溶液，分別測(cè)定吸收峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算鹽酸小檗堿含量，結(jié)果如下

樣品含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

廠家產(chǎn)地批號(hào)含量(mg/g)RSD(%)

福建200806073.210.65

200807122.57 1.17

200712043.840.73

陜西0712081.070.54

3討論

3.1通過(guò)含量測(cè)定結(jié)果可見(jiàn)廠家及各批號(hào)的產(chǎn)品間的含量存在差異，這可能與原料藥有關(guān);在舊版藥典中黃柏與關(guān)黃柏合并做為黃柏使用，新版藥典中才分列使用，而二者的含量差別懸殊，市場(chǎng)上混用比較嚴(yán)重，成方制劑中有必要增加對(duì)其含量的考察。

3.2經(jīng)比較索氏回流提取法比超聲波提取法含量高，而且所測(cè)定的目標(biāo)成分為有色物質(zhì)，以回流液無(wú)色作為提取終點(diǎn)，有利于判斷，實(shí)驗(yàn)證明，該法提取完全，回收率較好。

3.3試驗(yàn)采用十二烷基磺酸鈉作為離子對(duì)試劑，能與目標(biāo)成分結(jié)合形成離子對(duì)，從而減少硅醇基的影響。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明，離子對(duì)試劑的使用，有助改善組分的分離。

參考文獻(xiàn)

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì)編.中國(guó)藥典[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:214-329.