鄂西北地區規模化雞場禽流感抗體水平監測

摘要:2009年1~12月對鄂西北地區16個雞場接種禽流感疫苗20d后的雞隨機采集血樣433份，應用ELISA方法對血清的禽流感抗體水平進行監測調查。調查結果表明，在受檢的433份血清中，抗體陰性樣本86份，占19.9%;抗體陽性樣本347份，陽性率80.1%;抗體強陽性樣本有282份，占65.1%。統計分析表明，在受檢的16家雞場中，群體免疫合格率在75%以上的有12家，占75.0%。結論:2009年禽流感的免疫合格血清(強陽性)相對較低，受檢的規模化雞場僅部分能達到保護水平，且各雞場的免疫水平存在較大差異。

關鍵詞:鄂西北;禽流感;抗體

中圖分類號:S852.5+2文獻標識碼:B文章編號:1007-273X(2010)09-0031-02

禽流感是由禽流感病毒(Avian influenza virus，AIV)引起的一種急性高致病性傳染病。該病臨床癥狀不盡相同，從無任何肉眼臨床癥狀到高死亡率發病期，呼吸道病患是最常見的表現，伴有產蛋率下降、綠色糞便、口鼻腔呈血樣分泌物，頭部雞冠肉髯發紺，水腫等。雞只接種禽流感疫苗后體內會產生特異性抗體，借助酶聯免疫試驗(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA)可對血清中AIV抗體水平進行定量檢測，有效評估雞群的免疫狀態。為監測鄂西北地區規模化雞場AIV抗體水平，筆者于2009年1～12月對鄂西北地區16家規模化雞場的AIV抗體進行了血清學監測，現將其報道如下。

1材料與方法

1.1血樣的采集

對鄂西北地區16家存籠1萬只規模雞場雞只隨機采血，每只2mL翅下靜脈血樣，共采集血樣433份。

1.2血樣的處理

采集血樣靜置1h，待血清析出后，2 000r/min離心10min，取上層血清待檢。

1.3儀器與試劑

GF—M2000型酶標儀，山東高密彩虹分析儀器有限公司生產;37℃恒溫水箱;禽流感病毒抗體檢測ELISA試劑盒，深圳康百得生物有限公司生產。

1.4試驗方法與原理

1.4.1試驗方法酶聯免疫吸附試驗法(ELISA)。

1.4.2原理 應用AIV病毒抗原包被微孔，被檢樣品加入包被孔后的孵化階段，血清樣品中的特異性AIV抗體與包被的病毒抗原反應，形成復合物。經過洗滌，未結合的物質被去掉。微孔加入酶標二抗，酶標二抗可以與吸附在包被孔壁的雞AIV抗體結合。反應后洗滌，未結合的酶標二抗被洗滌，再加入酶底物和顯色劑。顯示反應顏色與血清中AIV抗體數量直接相關。

1.4.3操作步驟樣本稀釋:將樣本液按1∶100比例稀釋。加樣反應:將稀釋好的樣本液取100μL注入已包被有AIV病毒抗原的反應孔，37℃避光反應30min后洗滌。試驗設陰性、陽性對照各2孔，與試驗組同步。加酶反應:每孔加入酶標二抗100μL，37℃避光反應30min后洗滌。顯色反應:加底物和顯色劑各50μL，37℃避光反應10min，加入終止液50μL，然后用酶標儀于450nm(620nm作參比波長)讀取OD值。

1.4.4結果判斷S/N≥2.1表示雞體內有AIV抗體存在，結果陽性;S/N≥4.1表示雞體內有較強的AIV抗體存在，結果強陽性，免疫合格。其中，S為樣本OD值;N為陰性對照OD值。

2結果與分析

所檢測的433份血樣中，1~3月份檢測4家雞場共113份血樣，其中92份陽性，陽性率81.4%;強陽性72份，強陽性率63.7%;其中，免疫合格雞場3家，占受檢雞場75%。4~6月份檢測3家雞場共88份血樣，57份陽性，陽性率64.8%;強陽性52份，強陽性率59.1%;其中，免疫合格雞場2家，占受檢雞場66.7%。7~9月份檢測2家雞場共70份血樣，62份陽性，陽性率88.6%;強陽性60份，強陽性率85.7%;其中，免疫合格雞場2家，占受檢雞場100%。10~12月份檢測7家雞場共162份血樣，136份陽性，陽性率84.0%;強陽性98份，強陽性率60.5%;其中，免疫合格雞場5家，占受檢雞場71.4%。

綜合4個季度ELISA檢測S/N的分布結果，在受檢的433份血清中，抗體陰性樣本86份，占19.9%;抗體陽性樣本數347份，陽性率80.1%;抗體強陽性樣本有282份，占65.1%。統計分析表明，在受檢的16家雞場中，群體免疫合格率在75%以上的有12家，占75.0%。

具體調研情況見表1。

3討論

(1)調查發現還有一部分養雞戶過分依賴免疫程序，導致雞場實際情況下的免疫不合格，這對于規模化雞場的生物安全體系必將帶來很大的威脅。因此，規模化雞場除了需規范新城疫疫苗免疫程序外，還需加強抗體水平監測，確保雞群免疫合格。

(2)通過統計可知，2009年鄂西北地區規模化雞場禽流感免疫總體合格率為65.1%，免疫合格率較低，但是免疫合格率在各雞場分布極不平衡，一部分免疫情況好的雞場，合格率可達100%，而免疫情況差的雞場，合格率為0。望引起有關部門的注意。

(3)通過對養殖場的登記結合監測數據分析來看，新引進雞只初次免疫效果通常較差，首免間隔20d后加強免疫一次，有較好的免疫效果，不過還需對抗體水平進行一次跟蹤，根據結果再次調整免疫。

(4)ELISA方法檢測禽流感抗體水平是評估養殖場免疫水平的一種十分有效的方法，適合于在注射疫苗15～20d后進行檢測評估免疫效果，或免疫合格雞場數月后抗體水平下降，再次評估群體抗體水平。