家禽血液樣品的采集技術及應用

摘要:血液樣品采集技術直接影響血樣的質量，進而影響到免疫效果和疫情監測結果的準確性。綜合業內常用的各種作法，結合實踐體會，對翅內側翼下靜脈采血、跖骨內側靜脈采血、右側頸靜脈采血、心臟采血等采血方法及血清的制備方法，就操作要領、方法應用與選擇(家禽種類及日齡、需要血量多少)、方法評價等進行了較為詳細的描述和總結，對血液樣品采集過程中各關鍵操作環節提出了注意事項。

關鍵詞:血液樣品;家禽;采集

中圖分類號:S852.5文獻標識碼:B文章編號:1007-273X(2010)07-0040-02

養禽場對免疫后的抗體監測及疾病感染情況的檢測是禽類疫病防控的重要手段，家禽血液樣品的采集(主要是血清樣本)是一項重要的常規性和前提性工作，血樣質量的好差，直接影響到監測結果的準確性。正確的血液樣品采集技術是采血質量的前提保證。筆者結合長期的實踐體會，主要針對家禽血液樣品的采集、血清的制備及注意的問題進行介紹。

1器材的準備

采血器(常用5mL一次性塑料注射器)、血樣收集管(有蓋試管或V形管，并貼好標簽，便于登記)、試管架、5%碘酊棉球、75%酒精棉球、一次性塑料離心管、離心機、膠布或標簽紙、記號筆、相關表格等。

2采血方法

采血方法的選擇，主要取決于采血的目的、所需血樣或血清的數量以及家禽的種類、年齡等。凡用血量較少的檢驗如血液涂片、雞白痢全血平板凝集試驗等，可刺破冠、腳蹼皮下靜脈等組織，以吸管或毛細吸管直接取新鮮的血液;用中量血時可從靜脈血管采集;當需血量較多時可以從心臟采集。雛雞(1～30日齡)、水禽可采用跖骨內側靜脈采血法，成雞(30日齡以上)可采用翅內側翼下靜脈采血法。

2.1翅內側翼下靜脈采血法

此法適宜于30日齡以上的家禽，尤其是成雞，不適用于雛禽和水禽。雛禽翼下靜脈較細，且水禽羽毛豐厚，采血時須拔去絨羽會造成皮下毛細血管血液滲出，不易看清靜脈位置，另外翅內側皮膚松軟，血管位置不容易控制，采血時容易滾針，造成翅部瘀血，影響其活動及采食，也容易造成感染，影響經濟效益。

對于雞等體重較輕的家禽，助手以一手固定禽的兩只腿，另一手固定兩翼，腹部朝外，助手握兩翼的手稍高于另一手，暴露出翅膀內側。采血員左手使禽翅膀展開，露出腋窩部，拔去該部羽毛，可見到由翼根進入腋窩的一條較粗的靜脈，即翼根靜脈。其遠心端有一條較細的靜脈，即翼下靜脈。用5%碘酊和70%酒精棉球分別依次消毒暴露靜脈處的皮膚，待酒精揮發干燥后采血。術者用左手拇指壓迫翼下靜脈的近心端，使血管怒張，右手持帶5#~7#針頭(由于家禽靜脈較細，盡量選擇小號)的采血器，由翼根向翅尖方向(血流的相反方向)，以針口斜面向上，約與皮膚呈15°角沿靜脈刺入血管內，見血液回流，即可抽取血液[1]。持針時手要穩，進針不宜過深，如刺穿血管，則很快引起皮下血腫，導致采血失敗。抽血速度一定要緩慢，否則會使血管內壁互相粘連或針尖斜面緊貼血管內壁而采不出血并出現氣泡。采血完畢后，局部消毒并適當壓迫針孔處30s后即可止血。

2.2跖骨內側靜脈采血法

優點:①易于保定，血管位置明顯，血管不易滾動;②各個日齡的禽只均適用，尤其適用于水禽[2]和雛禽。

助手一手固定兩翼根部，另一手固定一腳，使禽側臥，禽腳朝向采血者。采血者左手固定另一腳，按住跖骨內側的靜脈，使腿部靜脈突起，常規消毒后，右手持5#采血器與跖骨皮膚呈10°角順血管方向進針取血[3]。跖骨內側靜脈采血是向心方向采血，采血時要注意進針角度不能太大，回抽活塞的速度也不能過快。

對日齡很小的雛禽，術者用左手中指及無名指夾住左腿，暴露跖骨內側靜脈，方法同上。雛禽的血管細小，血流量很少，所以在抽血的過程中要特別緩慢。

2.3右側頸靜脈采血法

右側頸靜脈較左側粗，故常采用右側[4]。左手以食指和中指夾住家禽頭部，并使頭偏向左側;常規消毒后，以拇指輕壓頸椎根部以使靜脈充血怒張。右手持注射器，挑破皮膚，傾斜30°左右角刺入靜脈取血液。

2.4心臟采血法

心臟采血對心臟損傷較大，也易傷及其他臟器，造成內臟出血，影響正常生長，甚至會造成死亡，特別是雛雞，常因針頭刺破心臟和肝臟導致出血過多而死。心臟采血雖然較有難度，但是采血速度快、血量多、效率高，尤其適用于需要多量血液時采用。

(1)助手右手抓住雞雙腿，左手握住兩翅膀，使雞右側臥，左側面向上，放在小桌或小凳子上。術者自龍骨突起前緣引一直線到翅基，再由此線中點向髖關節引一直線，此線前1/3和中1/3的交界處有一凹陷，即是心臟采血進針的部位，食指觸摸該處可感覺心跳(15日齡內雛雞更明顯);或找出由胸骨走向肩胛部的皮下大靜脈，心臟約在該靜脈分支下側。局部拔毛，常規消毒，用7#~9#針頭的采血器從肋骨間隙垂直進針，一般刺入2～3cm(進針深度應根據家禽個體大小作適當調整)即可達心臟，慢抽采血器，如不回血可調整進針深度，直至回血為止。若調整幾次后仍不回血，可抽出針頭，在附近重新垂直刺入，切不可在胸腔內任意調整針頭方向亂刺。大雞一般取30mL不致造成死亡。

(2)助手將禽仰臥保定，并使頸部及兩腿伸展。術者用手摸到胸骨的前端，兩側鎖骨融合成“V”字形的地方(鴨、鵝兩鎖骨的聯合處較圓)，局部常規處理。穿刺時，使該部皮膚緊張，避開嗉囊，針頭垂直向下刺入，然后將角度略減小，繼續斜向胸腔深部刺入，但要保持針尖指向胸腔中線，不宜偏斜(否則會刺傷肺組織)，直至刺入心房，即可緩慢抽取血液。雞心臟采血應在嗉囊空虛時進行，較為方便[5]。

3血清的制備與送檢

3.1分離方法

采到血液后，應立即將針頭拔掉，把注射器內的血液沿著試管壁緩緩注入干凈的干燥的試管或V形管中，編號，傾斜放置好;也可將采集到的血液保存在一次性注射器中自然析出血清，采血時將注射器活塞向后拉留出1cm左右的空隙，用針帽將針頭蓋上，防止污染，編號，將注射器針頭朝下傾斜放好。待血樣完全凝固后才能進行包裝和運輸，途中嚴禁振蕩，以免溶血。一般情況下，采集后的血樣當室溫在20℃以上時靜置2～3h即可析出血清;室溫在10℃以下時很難自然析出血清，需要立即將血樣放置在37℃溫箱或水浴中1～2h，以利血清析出。此外，還可低速離心分離血清，采血后去掉針頭，馬上慢慢注入一次性離心管并編號，待血液完全凝固后再進行離心。待血清析出后將血清分別吸入清潔、滅菌的試管或抗生素空瓶中，加蓋密封并編號。每份血清樣品量不能少于0.5mL。

3.2血清的保存及解凍

分離、密封好的血清，應冷凍或冷藏保存。一般情況下，在5d內測定的血清樣品可放置于4℃的冰箱中冷藏保存;樣品待檢時間超過1周的，需-15℃以下低溫冷凍保存。血清從低溫冰箱取出后，最好經4℃冰箱、室溫、37℃水浴條件逐步均勻融解，血清應完全融解混勻后再用。解凍血清不宜反復凍融。反復凍融會使血清中的脂蛋白和纖維蛋白變性，導致出現絮狀沉淀物[6]。

3.3血清的送檢

采集的樣品最好能在24h內及時送達實驗室(需4℃左右冷藏)。如果24h內不能送檢的，可把樣品冷凍，并以此狀態送檢。送檢過程中要防止震蕩、傾倒、破碎，避免樣品泄露。

參考文獻:

[1]覃珍姣.家禽血液樣品的采集和常見問題[J]. 廣西畜牧獸醫，2008，24(1):50-51.

[2]董柏華，嚴春華.淺談畜禽采血技術[J]. 中國動物檢疫，2006， 23(4):40.

[3]林開，嚴甦，嚴惠群. 家禽的采血技術及注意事項[J].畜牧獸醫科技信息，2007(11):45.

[4]陳俊杰a，鄧俊良，陳 萍． 家禽的幾種采血方法比較［Ｊ］． 中國家禽，２００５，２７（１１）：２１．

［５］ 孫泉云，潘水春，鞠龔訥．動物采血技術［Ｊ］．畜牧與獸醫，２００５， ３７（４）：３４－３５．

［６］ 肖建鋒．畜禽血樣采集與血清分離保存［Ｊ］． 四川畜牧獸醫，２００７，３４（１１）：５６－５７．