紅魚眼醇提物鎮(zhèn)痛抗炎作用的實驗研究Δ

秦貽強，李 江，蔡小玲（桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥劑科，桂林市541001）

紅魚眼是大戟科植物無毛龍眼睛Phyllanthus reticulates Poir.Var.glaber Muell.Arg.或龍眼睛P.reticulates Poir.的干燥莖，具有祛風(fēng)活血、散瘀消腫的功效[1]，為廣西尤其是壯族民間常用藥味。臨床中多采用其復(fù)方內(nèi)服或外用等療法治風(fēng)濕性、類風(fēng)濕性、骨性關(guān)節(jié)炎[2，3]。紅魚眼作為治療風(fēng)濕痹癥的藥物運用較廣，但是僅在臨床應(yīng)用方面有報道，而相關(guān)藥理研究甚少，不利于其安全用藥與進一步開發(fā)使用。因此，本研究采用相應(yīng)動物模型，對紅魚眼醇提物的鎮(zhèn)痛、抗炎作用進行了探討，以期為臨床用藥提供理論依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

R-200型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（瑞士Buchi公司）；UV2550型紫外分光光度計（日本島津公司）；HH-W600型數(shù)顯三用恒溫水浴箱（金壇市科析儀器有限公司）；微量進樣器（芬蘭Thermo Finnpipette公司）；BT224S型電子分析天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）。

1.2 試藥

紅魚眼購自廣西南寧市中堯藥材市場，經(jīng)桂林醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系天然藥物化學(xué)教研室唐愛蓮副教授鑒定為真品；吲哚美辛腸溶片（廣東華南藥業(yè)集團有限公司，批號：081108）；鹽酸曲馬多緩釋片（深圳南方盈信制藥有限公司，批號：20090801）。

1.3 動物

SPF級昆明種小鼠150只，♀♂兼半，體重（20±2）g；SPF級SD大鼠50只，♂，體重（200±20）g，均由桂林醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供（動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（桂）2007-0001）。

2 方法與結(jié)果

2.1 醇提物的制備

藥材粉碎為粗粉，采用10倍量75%乙醇水浴回流提取，每次2 h，共提取2次，過濾后合并濾液，于60℃減壓回收至無醇味，分別配制成所需濃度的供試液，待用。

2.2 紅魚眼醇提物對小鼠熱板法痛閾值的影響

取♀小鼠若干，置于（55±0.5）℃恒溫?zé)岚迳希蕴蚝笞阕鳛橥从X指標(biāo)，秒表記錄痛閾值，每只小鼠測定2次，中間間隔3 min，取其均值為正常痛閾值。取正常痛閾值在5～30 s的小鼠50只，隨機分為模型對照（生理鹽水20 mL·kg-1）、鹽酸曲馬多（0.04 g·kg-1）和紅魚眼醇提物高、中、低劑量（30、20、10 g·kg-1）組。ig給藥后，于30、60、120 min分別測定痛閾值。若測定中小鼠痛閾值＞30 s，則按照30 s計算。結(jié)果表明，高、中、低劑量紅魚眼醇提物均能不同程度顯著提高小鼠對熱反應(yīng)的痛閾值（P＜0.01或P＜0.05），提示紅魚眼醇提物對小鼠由刺激引起的疼痛具有良好的鎮(zhèn)痛作用。紅魚眼醇提物對小鼠熱板法痛閾值的影響見表1。

2.3 紅魚眼醇提物對小鼠醋酸扭體反應(yīng)的影響

取小鼠50只，♀♂兼半，隨機分為模型對照（生理鹽水20mL·kg-1）、吲哚美辛（20 mg·kg-1）和紅魚眼醇提物高、中、低劑量（30、20、10 g·kg-1）組，每組10只。ig給藥，每天1次，連續(xù)3 d。末次給藥后30 min每只小鼠ip新配制的0.6%醋酸溶液0.1 mL·10 g-1，觀察并記錄小鼠的扭體潛伏期和15 min內(nèi)扭體反應(yīng)的次數(shù)。結(jié)果表明，僅吲哚美辛組的扭體抑制率與模型對照組比較差異顯著（P＜0.05），其余各組均無顯著差異，提示紅魚眼醇提物對小鼠ip醋酸引起急性腹膜炎而產(chǎn)生的疼痛無明顯的鎮(zhèn)痛作用。紅魚眼醇提物對小鼠醋酸扭體反應(yīng)的影響見表2。

表1 紅魚眼醇提物對小鼠熱板法痛閾值的影響（±s，n＝10）Tab 1 Effect of the ethanol extracts of P.reticulates on the pain threshold in hot plate metho（d±s，n＝10）

表1 紅魚眼醇提物對小鼠熱板法痛閾值的影響（±s，n＝10）Tab 1 Effect of the ethanol extracts of P.reticulates on the pain threshold in hot plate metho（d±s，n＝10）

與模型對照組比較：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01vs.model control group：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

組別模型對照組鹽酸曲馬多組紅魚眼醇提物低劑量組紅魚眼醇提物中劑量組紅魚眼醇提物高劑量組劑量/g·kg-1 120 min 10.7±3.5 13.6±4.4 14.6±4.3 16.0±5.6＊14.7±5.8-0.04 10 20 30給藥前痛閾值/s 14.2±3.4 15.0±4.4 13.3±2.9 14.7±1.8 14.2±3.9給藥后痛閾值/s 30 min 9.7±2.2 18.5±7.2＊＊12.3±2.7＊15.7±2.0＊＊14.7±2.5＊＊60 minimages/BZ_205_394_507_396_507.pngimages/BZ_205_329_530_334_530.png10.7±2.5 14.9±3.6＊14.3±2.8＊14.4±4.0＊8.8±2.0

表2 紅魚眼醇提物對小鼠醋酸扭體反應(yīng)的影響（±s，n＝10）Tab 2 Effect of the ethanol extracts of P.reticulates on the acetic acid writhing tes（t±s，n＝10）

表2 紅魚眼醇提物對小鼠醋酸扭體反應(yīng)的影響（±s，n＝10）Tab 2 Effect of the ethanol extracts of P.reticulates on the acetic acid writhing tes（t±s，n＝10）

與模型對照組比較：＊P＜0.05vs.model control group：＊P＜0.05

組別模型對照組吲哚美辛組紅魚眼醇提物低劑量組紅魚眼醇提物中劑量組紅魚眼醇提物高劑量組扭體抑制率/%-31.8＊8.8 1.4 8.9劑量/g·kg-1-0.02 10 20 30扭體次數(shù)/次14.8±4.8 10.1±2.8 13.5±3.8 14.6±3.8 13.9±4.5

2.4 紅魚眼醇提物對二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳廓腫脹度的影響

分組、給藥同“2.3”項下方法。ig給藥，每天1次，連續(xù)7 d。末次給藥60 min后，將30 μL二甲苯均勻涂抹于小鼠右耳廓兩面致炎。致炎30 min后，脫頸椎處死小鼠，沿耳廓基線剪下兩耳，并以直徑8 mm打孔器分別在左右耳對稱部位打下圓形耳片，分別用電子天平稱重，計算腫脹度和腫脹抑制率。小鼠耳廓腫脹程度以每鼠左右耳片重量之差的平均值來表示[腫脹抑制率（%）＝（模型對照組腫脹度－用藥組腫脹度）/模型對照組腫脹度×100%]。結(jié)果表明，紅魚眼高、中劑量組的耳廓腫脹度與模型對照組比較差異顯著（P＜0.01或P＜0.05），提示紅魚眼醇提物對二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳廓腫脹能起到一定的抗炎作用。紅魚眼醇提物對二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳廓腫脹度的影響見表3。

表3 紅魚眼醇提物對二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳廓腫脹度的影響（±s，n＝10）Tab 3 Effect of the ethanol extracts of P.reticulates on the mice ear swelling induced by xylen（e±s，n＝10）

表3 紅魚眼醇提物對二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳廓腫脹度的影響（±s，n＝10）Tab 3 Effect of the ethanol extracts of P.reticulates on the mice ear swelling induced by xylen（e±s，n＝10）

與模型對照組比較：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01vs.model control group：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

抑制率/%-34.01 8.50 11.53 29.37組別模型對照組吲哚美辛組紅魚眼醇提物低劑量組紅魚眼醇提物中劑量組紅魚眼醇提物高劑量組劑量/g·kg-1-0.02 10 20 30耳廓腫脹度/mg 12.98±1.41 8.57±0.67＊＊11.88±1.36 11.49±1.13＊9.17±0.95＊＊

2.5 紅魚眼醇提物對大鼠角叉菜膠致足趾腫脹的影響

取大鼠25只，♂，均分為模型對照（生理鹽水5 mL·kg-1）、吲哚美辛（0.015 g·kg-1）和紅魚眼醇提物高、中、低劑量（7.5、5、2.5 mg·kg-1）組。ig給藥，每天1次，連續(xù)3 d。末次給藥后立即于每只大鼠右后足爪部sc 0.1 mL的1%角叉菜膠致炎，分別于致炎前和致炎后1、2、3、4 h用毛細管放大法測量右后足容積，以計算腫脹抑制率[腫脹抑制率（%）＝（模型對照組腫脹度－給藥組腫脹度）/模型對照組腫脹度×100%]。結(jié)果表明，高、中、低劑量紅魚眼醇提物對大鼠足趾腫脹均有不同程度的抑制作用，高、中劑量紅魚眼醇提物在60～240 min內(nèi)抑制作用穩(wěn)定，而低劑量紅魚眼醇提物至180 min后才出現(xiàn)抑制作用，提示紅魚眼醇提物對角叉菜膠致大鼠足趾腫脹的抑制作用時間較長。紅魚眼醇提物對大鼠角叉菜膠致足趾腫脹的影響見表4。

表4 紅魚眼醇提物對大鼠角叉菜膠致足趾腫脹的影響（±s，n＝5）Tab 4 Effect of the ethanol extracts of P.reticulates on rat toe swelling induced by carrageena（n±s，n＝5）

表4 紅魚眼醇提物對大鼠角叉菜膠致足趾腫脹的影響（±s，n＝5）Tab 4 Effect of the ethanol extracts of P.reticulates on rat toe swelling induced by carrageena（n±s，n＝5）

與模型對照組比較：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01vs.model control group：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

組別模型對照組吲哚美辛組紅魚眼醇提物低劑量組紅魚眼醇提物中劑量組紅魚眼醇提物高劑量組劑量/g·kg-1注射后不同時間的足腫脹率/%-0.015 2.5 5.0 7.5正常足容積/mL 1.03±0.02 1.04±0.01 1.01±0.05 1.02±0.01 1.07±0.01 60 min 27.74±6.84 21.24±5.83 26.20±3.46 17.45±2.69＊＊13.99±2.57＊＊120 min 38.12±8.39 21.23±3.10＊＊32.96±4.63 24.13±2.29＊＊27.42±4.97＊180 min 36.81±6.46 14.66±2.22＊＊25.47±3.17＊＊22.0±1.50＊＊25.21±7.60＊240 min 35.18±5.66 11.81±4.59＊＊18.37±2.98＊＊16.67±0.86＊＊20.56±7.35＊

2.6 紅魚眼醇提物對大鼠角叉菜膠性炎性滲出液中前列腺素（PG）E2含量的影響[4]

分組、給藥與炎癥復(fù)制同“2.5”項下方法。角叉菜膠致炎4 h后頸椎脫臼處死大鼠，齊踝關(guān)節(jié)剪下炎性足，稱重，剝皮，充分剪碎，置于8 mL生理鹽水和2 mL甲醇中浸泡過夜，10 000 r·min-1離心3 min，取上清液0.6 mL，置于10.0 mL量瓶中，加入0.5 mol·L-1氫氧化鉀-甲醇溶液2 mL，在50℃水浴中異構(gòu)化20 min，放冷至室溫，然后用甲醇定容，搖勻，于278 nm波長處測吸光度（A），以每1 g炎性組織相當(dāng)?shù)腁值表示PGE2的含量（A/g足重）。結(jié)果表明，紅魚眼醇提物高劑量組與模型對照組比較PGE2含量顯著降低（P＜0.05）。紅魚眼醇提物對大鼠角叉菜膠性炎性滲出液中PGE2含量的影響見表5。

表5 紅魚眼醇提物對大鼠角叉菜膠性炎性滲出液中PGE2含量的影響（±s，n＝5）Tab 5 Effect of the ethanol extracts of P.reticulates on the content of PGE2in the carrageenan induced inflammatory effusion in ra（t±s，n＝5）

表5 紅魚眼醇提物對大鼠角叉菜膠性炎性滲出液中PGE2含量的影響（±s，n＝5）Tab 5 Effect of the ethanol extracts of P.reticulates on the content of PGE2in the carrageenan induced inflammatory effusion in ra（t±s，n＝5）

與模型對照組比較：＊P＜0.05vs.model control group：＊P＜0.05

組別模型組吲哚美辛組紅魚眼醇提物低劑量組紅魚眼醇提物中劑量組紅魚眼醇提物高劑量組0.202 1±0.009 9 0.183 4±0.009 2＊0.201 4±0.028 1 0.220 5±0.019 4 0.181 0±0.016 0＊-0.015 2.5 5.0 7.5 1.608 3±0.081 6 1.653 0±0.085 8 1.580 2±0.087 3 1.642 0±0.111 1 1.732 2±0.116 3 0.324 8±0.018 4 0.303 0±0.018 2 0.319 8±0.059 0 0.363 6±0.054 8 0.313 0±0.029 8 PGE2含量/ng·g-1劑量/g·kg-1足重/g A值

3 討論

本研究表明，紅魚眼醇提物在熱板法鎮(zhèn)痛實驗中，能不同程度提高小鼠的痛閾值，起到一定的鎮(zhèn)痛作用；而抗炎實驗中其不僅能減輕二甲苯誘導(dǎo)的小鼠耳腫脹程度，并能不同程度抑制角叉菜膠誘導(dǎo)的大鼠足腫脹反應(yīng)，高劑量作用下還可減少角叉菜膠致炎的鼠足滲出液中PGE2的含量，說明其具有一定的抗炎作用，且作用機制可能與抑制炎性部位PGE2的生成有關(guān)。本研究結(jié)果論證了紅魚眼傳統(tǒng)功效與現(xiàn)代藥理研究的一致性，可為指導(dǎo)臨床合理用藥，并將其開發(fā)成高效、低毒、價廉、療效確切的具有抗風(fēng)濕作用的新型天然藥物提供理論依據(jù)。因此，進一步深入開展紅魚眼藥理學(xué)方面的研究，對抗風(fēng)濕疾病的治療及其開發(fā)利用有著重要意義。

[1] 廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳.廣西中藥材標(biāo)準(zhǔn)（1990年版）[S].南寧：廣西科學(xué)技術(shù)出版社，1992：52.

[2] 王柏燦.壯醫(yī)火功加熨浴療法治療痹病89例臨床觀察[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2007，14（8）：60.

[3] 鐘麗雁，李鳳珍，謝愛澤.壯藥內(nèi)服加藥熨治療膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎30例觀察[J].實用中醫(yī)藥雜志，2009，25（6）：358.

[4] 崔曉燕，王素霞，侯永利.金銀花提取物的抗炎機制研究[J].中國藥房，2007，18（24）：1 861.