p53、Bcl-2蛋白在結直腸癌中的表達及其與預后的關系

鄭 勇 高緒鋒 張松濤 張守永 黃新明 陳 生

野生型的p53蛋白對細胞增殖有負調控作用，突變的p53蛋白功能喪失，導致細胞過度增殖，與腫瘤的發生密切相關。Bcl-2蛋白是屬于Bcl-2基因家族中的抑制細胞凋亡的蛋白，其表達的改變不僅影響正常細胞DNA損傷的修復和異常細胞的正常凋亡，還影響腫瘤細胞自身的凋亡[1]。關于p53和Bcl-2在結直腸癌組織中表達的臨床意義、與預后判斷的關系以及2種蛋白表達的相關性尚存爭論，我們通過免疫組化SABC法檢測結直腸癌組織中p53和Bcl-2的陽性表達，并對隨訪病例資料進行分析，旨在探討p53和Bcl-2在結直腸癌組織中表達的臨床意義及其與預后判斷的關系。

1 材料與方法

1.1 一般資料

2004年8月～2007年10月，我院收治的并行腫瘤切除術的結直腸癌患者120例，其中男性68例，女性52例，均有完整的病例資料，術前均無放療或化療。患者年齡39～73歲，平均58.4歲，其中>60歲(老年組)36例，≤60歲(中青年組)84例。腫瘤部位：升結腸20 例，橫結腸18例，降結腸40例，乙狀結腸32例，直腸10例。Dukes分期：A期24例，B期32例，C期64例；腫瘤分化程度：高分化癌82例，中分化癌28例，低分化癌10例。 淋巴結轉移：已轉移64例，未轉移56例。腫瘤生長方式：腫塊型26例，浸潤型38例，潰瘍型56例。SABC及DAB顯色試劑盒購自武漢Boster(博士德)公司，Bcl-2單克隆抗體購自Dako公司，p53單克隆抗體購自美國Zymed公司。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化法檢測p53蛋白及Bcl-2蛋白 采用免疫組化SABC法，用已知胃癌Bcl-2表達陽性細胞作為Bcl-2陽性對照，用已知胃癌p53表達陽性細胞為p53陽性對照,用PBS代替一抗作為陰性對照。具體操作按試劑盒說明書進行。

1.2.2 隨訪病例的研究 對Dukes B期的病例進行5年隨訪，計算5年生存率。

1.2.3 結果評定標準 著染腫瘤細胞數與腫瘤細胞總數的比值在15%～20%為弱陽性(+)，21%～50%為陽性(++)，>50%為強陽性(+++)。

1.3 統計學方法

所有數據均采用SPSS13.0統計軟件包進行分析，計數資料采用χ2檢驗；相關性分析采用Spearman等級相關分析法。

2 結果

2.1 p53和Bcl-2蛋白在結直腸癌組織中的表達情況

p53在結直腸癌腫瘤組織中表達的陽性率為63.3%(76/120)，在高分化、中分化、低分化腫瘤組織中的陽性率兩兩比較，P<0.05，有統計學意義；不同年齡、性別、Dukes分期、腫瘤發生部位及淋巴結轉移中，p53的陽性率均無統計學意義，P>0.05。Bcl-2蛋白在結直腸癌腫瘤組織中的陽性率為46.7%(56/120)，在高分化、中分化、低分化腫瘤組織中的陽性率兩兩比較，P<0.01，有統計學意義；不同年齡、性別、Dukes分期、腫瘤發生部位及淋巴結轉移中，Bcl-2的陽性率均無統計學意義，P>0.05。見表1。

2.2 結直腸癌腫瘤組織中p53和Bcl-2蛋白表達的相關性

在不同分化程度的腫瘤組織中，隨著腫瘤分化程度的降低，p53的陽性率升高；而Bcl-2隨著腫瘤分化程度的降低，陽性率降低。經Spearman等級相關分析顯示，腫瘤組織中p53的陽性表達和Bcl-2的陽性表達呈負相關，P<0.05，有統計學意義，見表1。

表1 p53、Bcl-2的在腫瘤組織中的表達與腫瘤臨床病理指標的關系(例，%)

注：組內兩兩比較，★為P<0.05，▼為P<0.01

2.3 Dukes不同分期病例的隨訪結果

120例中隨訪113例，隨訪率94.2%，隨訪期限6個月至5年。Dukes A期24例中p53陽性表達14例，陰性表達10例；Bcl-2陽性表達13例，陰性表達11例。Dukes B期31例中p53陽性表達19例，陰性表達12例；Bcl-2陽性表達15例，陰性表達16例。Dukes C期58例中p53陽性表達38例，陰性表達20例；Bcl-2陽性表達24例，陰性表達34例。通過Spearman相關分析表明，p53的陽性表達與患者的5年生存率呈負相關；Bcl-2的陽性表達患者的5年生存率呈正相關。見表2。

表2 113例結直腸癌患者術后5年生存率比較(例，%)

注：同一分期內，p53陰性組與陽性組比較，▲為P<0.05；Bcl-2陽性組與陰性組比較，▲為P<0.01

3 討論

p53基因是細胞凋亡的重要調控基因,分為野生型和突變型2型。野生型p53基因是1種抑癌基因，能誘導終末分化,維持基因穩定,觸發衰老和誘導細胞凋亡,是負生長調控因子。當p53基因突變時,細胞周期失控,某些癌基因得以激活(如RAS基因)，使細胞無限制地生長，腫瘤的侵襲力增強,淋巴轉移的危險性增加。正常細胞內p53基因為野生型,其表達的蛋白在細胞中含量極少，且半衰期短，一般免疫組化方法不易檢出；而突變型p53蛋白由于構象改變,表達量增加,半衰期延長，穩定性增加，故免疫方法測得的p53蛋白基本上是突變型p53 蛋白[2]。近年來，突變的p53蛋白在人結直腸癌腫瘤組織中的陽性表達已經得到證實。普遍認為結直腸癌中抑癌基因p53的突變、功能減退與突變的p53蛋白的異常堆積密切相關[3]。本文研究結果顯示，p53在結直腸癌的陽性率為63.3%，與文獻[4]報道結果較一致。本文研究結果還顯示，p53的陽性率與腫瘤組織的分化程度有關，腫瘤的分化程度越低，p53的陽性率越高。

關于p53的表達與腫瘤的進展及腫瘤的生長部位等的關系仍存在較多爭議[5，6]，多數資料顯示，p53的陽性率與腫瘤的分期、淋巴結的轉移、腫瘤生長部位及患者的年齡、性別關系不大。鄒揚等[3]研究結果顯示，p53的陽性率與淋巴結轉移顯著相關，而且淋巴結轉移是多種因素中的唯一相關因素。本組資料研究結果顯示，p53的陽性率與患者的年齡、性別、腫瘤的Dukes分期、腫瘤的生長方式、生長部位、淋巴結是否轉移無關，而在腫瘤的Dukes分期中，雖然在不同分期中p53的陽性率差異無統計學意義，但是，DukesC期的陽性率高于A、B期。本研究還表明，p53的陽性表達率與患者的5年生存率呈負相關，有關p53表達與結直腸癌術后預后的關系及其相關機制分子還有待進一步深入研究。

Bcl-2是抑制細胞凋亡的蛋白，在結直腸癌組織中的表達及其與結直腸癌的發生、發展及預后的關系也備受關注。多數研究認為，Bcl-2的表達和結直腸癌的預后有關，認為其表達和腫瘤的復發呈負相關；有學者認為其與生存時間無關，與預后相關，也有少數研究認為Bcl-2陽性表達和預后無關。本組資料研究表明，Bcl-2蛋白在結直腸癌腫瘤組織中的陽性率為46.7%，在高分化、中分化、低分化腫瘤組織中的陽性率有統計學意義；在不同年齡、性別、Dukes分期、腫瘤發生部位及淋巴結轉移中，Bcl-2的陽性率均無統計學意義，Bcl-2的表達與預后呈負相關(P<0.01)，其陽性表達5年生存率高于陰性表達者，有關Bcl-2表達與結直腸癌術后預后的關系及其相關分子機制還有待進一步深入研究。本組資料研究還表明，在不同分化程度的腫瘤組織中，p53的表達和Bcl-2的表達呈負相關。

總之，突變的p53在結直腸癌組織中高表達，并且隨腫瘤組織分化程度的降低其表達增高；Bcl-2蛋白在結直腸癌組織中低表達，隨腫瘤組織分化程度的降低其表達亦降低。p53、Bcl-2的陽性率與患者的5年生存率均相關。

[1]Tang Li-gui.The Bcl-2 family with the coloectal caicinoma〔J〕.The Molecular Biology Brochure,Foreign Medicine,2005,25(3):168.

[2]張常華,何裕隆,詹文華,等.多發性結腸癌中抑癌基因p53的表達與突變〔J〕.中華實驗外科雜志，2005，3 (22):305.

[3]Zou Yang,Sun Zhen-dong,Di Jian-zhong,et al.The correlation between the expresion of P53 protein with the clinical stage and prognosis of colorectal cancer〔J〕.Surg Theory and Practice,2003,8(2):155.

[4]趙光明,展 瑞,鄒國楨,等.Hpa、p53表達與大腸癌浸潤轉移的關系〔J〕.山東醫藥，2010，50(10)：54.

[5]Okubo R,Masuda H,Nemoto N.P53 mutation found to be a significant prognostic indicator in distal colorectal cancer〔J〕.Oncol Rep,2001,8(3):509.

[6]鄧 昊,鄧 羚,陳 瑩,等.p53過度表達與結直腸癌淋巴結轉移、微轉移關系的研究〔J〕.腫瘤防治研究，2003，30(6):486.